抗CLAUDIN18.2多特异性抗体及其用途制造技术

本公开总体涉及免疫球蛋白相关组合物(例如，多特异性抗体或其抗原结合片段)，这些组合物可结合到Claudin 18.2蛋白质。本技术的多特异性抗体可用于检测和治疗有需要的受试者中的Claudin 18.2相关癌症的方法中。18.2相关癌症的方法中。18.2相关癌症的方法中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CLAUDIN 18.2多特异性抗体及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年8月6日提交的美国临时申请63/061,895、于2020年9月4日提交的美国临时申请63/074,582和于2021年2月2日提交的美国临时申请63/144,657的权益和优先权，这些申请的公开内容全文以引用方式并入本文。


[0003]本技术总体涉及特异性结合Claudin 18.2蛋白质的免疫球蛋白相关组合物(例如，多特异性抗体或其抗原结合片段)的制备及其用途。特别地，本技术涉及Claudin 18.2结合多特异性抗体的制备及其在检测和治疗癌症中的用途。

技术介绍

[0004]以下对本技术背景的描述仅简单地作为理解本技术的辅助而提供，并不承认描述或构成本技术的现有技术。
[0005]Claudin是形成紧密连接的整合膜蛋白。紧密连接充当防止溶质和水自由通过上皮或内皮细胞层之间的细胞间隙的物理屏障(Markov,A.G.等人，IUBMB Life，第67卷：第29
‑
35页(2015年)；Furuse,M.等人，J Cell Biol，第141卷：第1539
‑
1550页(1998年)；Nitta,T.等人，J Cell Biol，第161卷：第653
‑
660页(2003年)；Deli,M.A.，Biochim Biophys Acta，第1788卷：第892
‑
910页(2009年))。此外，紧密连接在维持细胞极性和信号传导中也起着关键作用。上皮细胞极性的破坏是恶性转化的早期事件(Martin,T.A.和Jiang,W.G.，Biochim Biophys Acta，第1788卷：第872
‑
891页(2009年))。Claudin 18.2在很大一部分的原发性胃癌及其转移癌中含量丰富，并在其恶性转化中发挥重要作用。例如，在胰腺、食管、卵巢和肺肿瘤中发现了claudin 18.2的频繁异位激活(Niimi等人(2001年)，Mol Cell Biol，第21卷第21期：第7380
‑
7390页；Tanaka等人(2011年)，J Histochem Cytochem，第59卷第10期：第942
‑
952页；Micke等人(2014年)，Int J Cancer，第135卷第9期：第2206
‑
2214页；Shimobaba等人(2016年)，Biochim Biophys Acta，第1863卷(第6期A专辑)：第1170
‑
1178页；Singh等人(2017年)，J Hematol Oncol，第10卷第1期：第105页；Tokumitsu等人(2017年)，Cytopathology，第28卷第2期：第116
‑
121页)。
[0006]因此，迫切需要有效治疗Claudin 18.2相关恶性肿瘤的新型抗Claudin18.2免疫球蛋白相关组合物。

技术实现思路

[0007]在一个方面，本公开提供了多特异性(例如，双特异性)抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含结合Claudin 18.2表位的第一抗原结合部分和结合到第二表位的至少第二抗原结合部分，其中第一抗原结合部分包含第一重链免疫球蛋白可变结构域(V
H
)和第一轻链免疫球蛋白可变结构域(V
L
)，其中第二抗原结合部分包含第二V
H
和第二V
L
，并且其中(a)第一V
H
包含选自SEQ ID NO:6、12、18、24和30的V
H
‑
CDR1序列；选自SEQ ID NO:
7、13、19、25和31的V
H
‑
CDR2序列；以及选自SEQ ID NO:8、14、20、26和32的V
H
‑
CDR3序列，并且/或者(b)第一V
L
包含选自SEQ ID NO:9、15、21、27和33的V
L
‑
CDR1序列；选自SEQ ID NO:10、16、22、28、34、155和156的V
L
‑
CDR2序列；以及选自SEQ ID NO:11、17、23、29和35的V
L
‑
CDR3序列。
[0008]在一个方面，本公开提供了多特异性(例如，双特异性)抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含结合claudin 18.2表位的第一抗原结合部分和结合到第二表位的至少第二抗原结合部分，其中第一抗原结合部分包含第一重链免疫球蛋白可变结构域(V
H
)和第一轻链免疫球蛋白可变结构域(V
L
)，其中第二抗原结合部分包含第二V
H
和第二V
L
，并且其中(a)第一V
H
包含SEQ ID NO:6的V
H
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:7的V
H
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:8的V
H
‑
CDR3序列，并且/或者第一V
L
包含SEQ ID NO:9的V
L
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:155的V
L
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:11的V
L
‑
CDR3序列；(b)第一V
H
包含SEQ ID NO:12的V
H
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:13的V
H
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:14的V
H
‑
CDR3序列，并且/或者第一V
L
包含SEQ ID NO:15的V
L
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:156的V
L
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:17的V
L
‑
CDR3序列；(c)第一V
H
包含SEQ ID NO:18的V
H
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:19的V
H
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:20的V
H
‑
CDR3序列，并且/或者第一V
L
包含SEQ ID NO:21的V
L
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:22的V
L
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:23的V
L
‑
CDR3序列；(d)第一V
H
包含本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双特异性抗体或其抗原结合片段，所述双特异性抗体或其抗原结合片段包含结合Claudin 18.2表位的第一抗原结合部分和结合到第二表位的第二抗原结合部分，其中所述第一抗原结合部分包含第一重链免疫球蛋白可变结构域(V
H
)和第一轻链免疫球蛋白可变结构域(V
L
)，其中所述第二抗原结合部分包含第二V
H
和第二V
L
，并且其中：(a)所述第一V
H
包含SEQ ID NO:6的V
H
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:7的V
H
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:8的V
H
‑
CDR3序列，并且/或者所述第一V
L
包含SEQ ID NO:9的V
L
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:155的V
L
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:11的V
L
‑
CDR3序列；(b)所述第一V
H
包含SEQ ID NO:12的V
H
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:13的V
H
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:14的V
H
‑
CDR3序列，并且/或者所述第一V
L
包含SEQ ID NO:15的V
L
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:156的V
L
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:17的V
L
‑
CDR3序列；(c)所述第一V
H
包含SEQ ID NO:18的V
H
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:19的V
H
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:20的V
H
‑
CDR3序列，并且/或者所述第一V
L
包含SEQ ID NO:21的V
L
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:22的V
L
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:23的V
L
‑
CDR3序列；(d)所述第一V
H
包含SEQ ID NO:24的V
H
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:25的V
H
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:26的V
H
‑
CDR3序列，并且/或者所述第一V
L
包含SEQ ID NO:27的V
L
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:28的V
L
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:29的V
L
‑
CDR3序列；或者(e)所述第一V
H
包含SEQ ID NO:30的V
H
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:31的V
H
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:32的V
H
‑
CDR3序列，并且/或者所述第一V
L
包含SEQ ID NO:33的V
L
‑
CDR1序列、SEQ ID NO:34的V
L
‑
CDR2序列和SEQ ID NO:35的V
L
‑
CDR3序列。2.一种双特异性抗体或其抗原结合片段，所述双特异性抗体或其抗原结合片段包含结合Claudin 18.2表位的第一抗原结合部分和结合到第二表位的第二抗原结合部分，其中所述第一抗原结合部分包含第一重链免疫球蛋白可变结构域(V
H
)和第一轻链免疫球蛋白可变结构域(V
L
)，其中所述第二抗原结合部分包含第二V
H
和第二V
L
，并且其中所述第一V
H
包含选自SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46
‑
49或54
‑
57中任一者的氨基酸序列；并且/或者(b)所述第一V
L
包含选自SEQ ID NO:37、39、41、43、45、50
‑
53或58
‑
61中任一者的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体或抗原结合片段，其中所述第二V
H
包含选自SEQ ID NO:97、99、100、101、102或157中任一者的氨基酸序列；并且/或者(b)所述第二V
L
包含选自SEQ ID NO:98、103或158中任一者的氨基酸序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的双特异性抗体或抗原结合片段，所述双特异性抗体或抗原结合片段还包含选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgM、IgD和IgE的同种型的Fc结构域。5.根据权利要求4所述的双特异性抗体，所述双特异性抗体包含IgG1恒定区，所述恒定区包含选自N297A、K322A、L234A和L235A的一个或多个氨基酸取代；或者包含IgG4恒定区，所述恒定区包含S228P突变。6.根据权利要求1至3中任一项所述的双特异性抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab、F(ab')2、Fab'、scF
v
和F
v
。7.一种双特异性抗体，所述双特异性抗体包含结合Claudin 18.2表位的第一抗原结合部分和结合到第二表位的第二抗原结合部分，其中所述双特异性抗体包含重链(HC)氨基酸
序列或其具有一个或多个保守氨基酸取代的变体以及/或者轻链(LC)氨基酸序列或其具有一个或多个保守氨基酸取代的变体，所述重链氨基酸序列包括SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:161，所述轻链氨基酸序列包括SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:162。8.根据权利要求7所述的双特异性抗体，所述双特异性抗体包含分别选自以下的HC氨基酸序列和LC氨基酸序列：SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:85和SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:159和SEQ ID NO:160以及SEQ ID NO:161和SEQ ID NO:162。9.一种双特异性抗体，所述双特异性抗体包含结合Claudin 18.2表位的第一抗原结合部分和结合到第二表位的第二抗原结合部分，其中所述第一抗原结合部分包含第一重链免疫球蛋白可变结构域(V
H
)和第一轻链免疫球蛋白可变结构域(V
L
)，其中所述第二抗原结合部分包含第二V
H
和第二V
L
，并且其中(a)所述第一V
L
序列与SEQ ID NO:37、39、41、43、45、50
‑
53或58
‑
61中任一者的所述轻链免疫球蛋白可变结构域序列具有至少95％同一性；并且/或者(b)所述第一V
H
序列与SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46
‑
49或54
‑
57中任一者的所述重链免疫球蛋白可变结构域序列具有至少95％同一性，任选地其中所述第二V
H
包含选自SEQ ID NO:97、99、100、101、102或157中任一者的氨基酸序列；并且/或者(b)所述第二V
L
包含选自SEQ ID NO:98、103或158中任一者的氨基酸序列。10.一种双特异性抗体，所述双特异性抗体包含结合Claudin 18.2表位的第一抗原结合部分和结合到第二表位的第二抗原结合部分，其中所述双特异性抗体包含：(a)与存在于SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:69、SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:92、SEQ ID NO:94、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:160或SEQ ID NO:162中的LC序列具有至少95％同一性的LC序列；以及/或者(b)与存在于SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:81、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:93、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:159或SEQ ID NO:161中的HC序列具有至少95％同一性的HC序列。11.根据权利要求7至10中任一项所述的双特异性抗体，其中所述抗体包含IgG1恒定区，所述恒定区包含选自N297A、K322A、L234A和L235A的一个或多个氨基酸取代。12.一种双特异性抗体，所述双特异性抗体包含第一多肽链、第二多肽链、第三多肽链和第四多肽链，其中所述第一多肽链和所述第二多肽链彼此共价键合，所述第二多肽链和所述第三多肽链彼此共价键合，并且所述第三多肽链和所述第四多肽链彼此共价键合，并且其中：
(a)所述第一多肽链和所述第四多肽链中的每一者在N
‑
末端至C
‑
末端方向上包含：(i)能够特异性结合到第一表位的第一免疫球蛋白的轻链可变结构域；(ii)所述第一免疫球蛋白的轻链恒定结构域；(iii)包含氨基酸序列(GGGGS)3的柔性肽接头；和(iv)连接到第二免疫球蛋白的互补重链可变结构域的所述第二免疫球蛋白的轻链可变结构域，或连接到第二免疫球蛋白的互补轻链可变结构域的所述第二免疫球蛋白的重链可变结构域，其中所述第二免疫球蛋白的所述轻链可变结构域和所述重链可变结构域能够特异性结合到第二表位，并通过包含氨基酸序列(GGGGS)6的柔性肽接头连接在一起以形成单链可变片段；并且(b)所述第二多肽链和所述第三多肽链中的每一者在所述N
‑
末端至C
‑
末端方向上包含：(i)能够特异性结合到所述第一表位的所述第一免疫球蛋白的重链可变结构域；和(ii)所述第一免疫球蛋白的重链恒定结构域；并且其中所述第一免疫球蛋白的所述重链可变结构域或所述第二免疫球蛋白的所述重链可变结构域选自SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46
‑
49或54
‑
57中的任一者，并且/或者所述第一免疫球蛋白的所述轻链可变结构域或所述第二免疫球蛋白的所述轻链可变结构域选自SEQ ID NO:37、39、41、43、45、50
‑
53或58
‑
61中的任一者。13.根据权利要求12所述的双特异性抗体或抗原结合片段，其中所述第一免疫球蛋白的所述重链可变结构域选自SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46
‑
49或54
‑
57中的任一者，所述第一免疫球蛋白的所述轻链可变结构域选自SEQ ID NO:37、39、41、43、45、50
‑
53或58
‑
61中的任一者，所述第二免疫球蛋白的所述重链可变结构域选自SEQ ID NO:97、99、100、101、102或157中的任一者，并且所述第二免疫球蛋白的所述轻链可变结构域选自SEQ ID NO:98、103或158中的任一者。14.根据权利要求12所述的双特异性抗体或抗原结合片段，其中所述第一免疫球蛋白的所述重链可变结构域选自SEQ ID NO:97、99、100、101、102或157中的任一者，所述第一免疫球蛋白的所述轻链可变结构域选自SEQ ID NO:98、103或158中的任一者，所述第二免疫球蛋白的所述重链可变结构域选自SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46
‑
49或54
‑
57中的任一者，并且所述第二...

【专利技术属性】
技术研发人员：G，
申请(专利权)人：阿布普罗公司，
类型：发明
国别省市：