一种鼠三阴性乳腺癌细胞系及其应用制造技术

本发明专利技术公开了鼠三阴性乳腺癌细胞系及其应用，通过离体的鼠乳腺肿瘤切除标本的原代培养建立了鼠三阴性乳腺癌细胞系，命名为MCMT

【技术实现步骤摘要】
一种鼠三阴性乳腺癌细胞系及其应用


[0001]本专利技术属于微生物医学领域，具体涉及一种鼠三阴性乳腺癌细胞系及其应用。

技术介绍

[0002]乳腺癌在全世界大多数地区的发病率有逐年增高的趋势，现在已经成为女性发病率最高的恶性肿瘤。全世界每年约有一百多万妇女患有乳腺癌，有50万妇女死于乳腺癌。近年来其发病率逐年增加，已经是女性最常见的恶性肿瘤。对于乳腺癌的生物学特性、实验治疗研究等是目前很热门的课题之一，建立人和小鼠的乳腺癌细胞系对于研究乳腺癌的发生发展，侵袭转移及复发具有十分重要的意义。
[0003]乳腺癌的主要治疗手段包括手术治疗、化疗、内分泌治疗和靶向治疗。三阴性乳腺癌是最具侵袭性的乳腺癌细胞亚型之一，该细胞生长迅速，通常在发现时肿瘤已经扩散至其它组织器官，预后较差。三阴性乳腺癌缺乏雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体(Her
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2)这三个治疗靶点，内分泌治疗和针对Her
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2的靶向治疗均无效，所以三阴性乳腺癌相关药物筛选一直为研究热点。鼠乳腺癌被认为是研究人类乳腺癌的良好模型。鉴于肿瘤细胞系的建立在肿瘤的基础研究中具有重要作用，但是目前世界范围内可应用的鼠三阴性乳腺癌细胞株较少的现状，且每一株细胞系都有其独特的特性，因此丰富细胞系的种类和数量尤为重要，也为转化医学的发展提供了基础。基于本实验室已成功建立的犬三阴性乳腺癌细胞系CMT
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1211，本专利技术拟通过异种肿瘤细胞移植并取材培养，建立一株新的鼠三阴性乳腺癌细胞系，该细胞系可在体外连续传代培养而保持鼠三阴性乳腺癌细胞的特性不变，适合作为研发人类三阴性乳腺癌相关免疫治疗、诊断和药物的细胞材料。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种鼠三阴性乳腺癌细胞系，命名为MCMT
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2021，该细胞系已于2023年2月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C202337，MCMT
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2021是CK8、Ki67、Vimentin阳性表达的三阴性鼠乳腺癌细胞系，证实其肿瘤细胞主要来源于上皮细胞，可在体外连续传代培养而保持鼠三阴性乳腺癌细胞的特性不变，具有体外成瘤能力的肿瘤特性。
[0005]鼠三阴性乳腺癌细胞系MCMT
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2021通过下述方法制得：
[0006]异种动物接种：将三阴性乳腺癌细胞系CMT
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1211以4
×
106细胞量皮下注射接种于四周龄雌性裸鼠背部，接种后第21天安乐死裸鼠，并无菌摘除肿瘤组织；
[0007]取材：获得离体的新鲜的鼠乳腺肿瘤切除标本，病灶组织浸入无菌5％双抗PBS溶液清洗，并去除结缔组织和坏死组织；
[0008]原代培养：将肿瘤组织消化后接种于T25培养瓶瓶壁，静置培养，约4h后细胞贴壁生长；
[0009]传代培养：当细胞布满瓶底时，吸除培养液，PBS缓冲液漂洗，0.25％胰蛋白酶消化，按1:3的比例传代，目前已传至50余代。
[0010]经生物学特性鉴定获得鼠三阴性乳腺癌细胞系，命名为MCMT
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2021，保藏编号为CCTCC NO:C202337，具有以下生物学特性：
[0011]1.单层贴壁生长，失去接触抑制，细胞形态为多边形，排列紧密呈上皮样，呈铺路石样生长，细胞核较大，有多个核仁，细胞传至50代形态稳定；
[0012]2.体外培养生长良好，每1天传代一次，能够连续稳定传代，目前已传至50余代；
[0013]3.染色体核型分析结果为染色体结构与数目均表现异常，结果显示该细胞系染色体数目从68
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123条不等，中位数为95.5；
[0014]4.MCMT
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2021细胞免疫荧光染色结果为ER、PR、HER
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2、E
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cadherin阴性，CK8、Vimentin、Ki67强阳性，证实本细胞系主要来源于上皮细胞，分子分型属于三阴型。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点及有益效果：
[0016]1.本专利技术建立的细胞系增殖倍增时间为18.90h，该细胞系增殖倍增时间显著低于已有鼠三阴性乳腺癌细胞系，有投入生产使用价值。
[0017]2.本专利技术建立的细胞系可在体外连续传代培养而保持鼠三阴性乳腺癌细胞的特性不变，接种BALB/c小鼠7天即致瘤，成瘤率100％。且接种10天左右成功建立肺脏、肝脏肿瘤转移模型。MCMT
‑
2021细胞系在体内试验证实其致瘤所需细胞量少，致瘤速度快，可于BALB/c小鼠体内致瘤，且接种十天后自发性肺转移率为100％，其体内实验效果明显优于已有细胞系，适合作为研发人三阴性乳腺癌相关免疫治疗、诊断和药物的细胞材料。
附图说明
[0018]图1
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3:鼠三阴性乳腺癌细胞系MCMT
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2021倒置显微镜下细胞形态(分别为4
×
，10
×
及20
×
倍镜细胞形态图)。
[0019]图4
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5:鼠三阴性乳腺癌细胞系MCMT
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2021透射电镜细胞形态及结构。
[0020]图6:鼠三阴性乳腺癌细胞系MCMT
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2021增殖曲线。
[0021]图7:鼠三阴性乳腺癌细胞系MCMT
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2021染色体核型。
[0022]图8:鼠三阴性乳腺癌细胞系MCMT
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2021染色体数量分析表。
[0023]图9:鼠三阴性乳腺癌细胞系MCMT
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2021免疫荧光染色结果。
[0024]图10:鼠三阴性乳腺癌细胞系MCMT
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2021BALB/c小鼠皮下成瘤图。
[0025]图11:鼠三阴性乳腺癌细胞系MCMT
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2021BALB/c小鼠肺脏剖检图。
[0026]图12:鼠三阴性乳腺癌细胞系MCMT
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2021BALB/c小鼠肝脏剖检图。
具体实施方式
[0027]实施例1鼠三阴性乳腺癌细胞系MCMT
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2021的制备方法
[0028]1.取材
[0029]将本实验室已成功建立的犬三阴性乳腺癌细胞系CMT
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1211以4
×
106细胞量皮下注射接种于四周龄雌性裸鼠背部，接种后第21天安乐死裸鼠，并无菌摘除肿瘤组织。取病灶组织1cm3浸入无菌5％双抗PBS溶液清洗，并去除结缔组织和坏死组织。
[0030]2.原代培养
[0031]将漂洗、修剪干净的肿瘤组织块剪成约1mm3大小的小块，放入50ml离心管中加入约5ml胶原酶溶液，密封离心管，37℃震荡消化至组织块分散呈絮状。将消化后的组织液通
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鼠三阴性乳腺癌细胞系MCMT
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2021，其特征在于，其保藏号为CCTCC NO:C20233...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱昌伟，李文萱，贺丽欣，王潇，王晓维，周涵，冯会利，张博寒，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：