一种人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773及其应用，保藏编号为CCTCC NO：C202370。该细胞株有EML4

【技术实现步骤摘要】
一种人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773及其应用


[0001]本专利技术涉及肿瘤生物学领域，尤其涉及一种人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773，同时涉及该非小细胞肺癌细胞株HC4773的应用。

技术介绍

[0002]肺癌是严重危害人类生命和健康的常见恶性肿瘤。肺癌分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)，其中80％～85％为非小细胞肺癌，约2/3非小细胞肺癌存在基因改变，约1/2患者可获得靶向治疗机会。对治疗有显著反应的NSCLC基因型包括表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)突变、ALK重排、ROS原癌基因重排等。为了促进和满足对人非小细胞肺癌的研究，需要越来越多的各种人体来源的存在基因改变的肺癌细胞株。为此我们建立了一种人的非小细胞肺癌细胞株HC4773，该细胞株有EML4
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ALK基因重排，重排型号为EML4
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ALK variant 3(E6；A20)。该细胞株ALK蛋白表达阳性。这种非小细胞肺癌细胞株的建立，可成为研究ALK基因重排的非小细胞肺癌的癌症生物学机制、开发和评价ALK基因重排肺癌的抗癌药物以及耐药机制、耐药性逆转的重要工具。

技术实现思路

[0003]本专利技术的首要目的是提供一种人ALK重排非小细胞肺癌细胞株，该细胞株可用于构建人的有ALK重排非小细胞肺癌体内、外肿瘤的动物和细胞模型。
[0004]所述的人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773，保藏编号为CCTCC NO：C202370。
[0005]进一步地，该细胞株有EML4
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ALK基因重排，重排型号为EML4
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ALK variant3(E6；A20)。
[0006]更进一步地，该细胞株ALK蛋白、角蛋白Pan
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Keratin及Epcam蛋白表达阳性。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供所述的人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773在制备筛选和评估抗肿瘤药物的制剂中的应用。
[0008]进一步地，所述的肿瘤为肺癌。
[0009]本专利技术的第三个目的是提供所述的人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773在制备研究肿瘤耐药机制的制剂中的应用。
[0010]本专利技术的第四个目的是提供所述的人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773在在构建人非小细胞肺癌体内、外肿瘤模型中的应用。
[0011]本专利技术的人ALK重排非小细胞肺癌细胞株，命名为人源非小细胞肺癌细胞株HC4773，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2023年3月24日，保藏编号为CCTCC NO：C202370。
[0012]本专利技术的细胞株取自一个61岁的男性黄种人的低分化肺鳞状细胞癌的肺部手术肿瘤标本，用II型胶原酶消化，采用改良的ACL4无血清培养基培养2个月后改用含10％FBS RPMI1640培养基扩增培养。该细胞株角蛋白Pan
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Keratin、Epcam蛋白及ALK蛋白表达阳性。
[0013]本专利技术研发过程包括以下步骤：
[0014](1)人源非小细胞肺癌细胞株HC4773在ACL4无血清培养基中的培养。
[0015](2)人源非小细胞肺癌细胞株HC4773在含10％FBS RPMI1640培养基中培养、消化及传代。
[0016](3)人源非小细胞肺癌细胞株HC4773角蛋白Pan
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Keratin、Epcam蛋白及ALK蛋白的表达。
[0017](4)人源非小细胞肺癌细胞株HC4773在免疫缺陷小鼠体内的致瘤能力。
[0018](5)人源非小细胞肺癌细胞株HC4773 ALK重排亚型。
[0019](6)人源非小细胞肺癌细胞株HC4773 ALK对靶向药物Crizotinb的敏感性。
[0020](7)人源非小细胞肺癌细胞株HC4773 STR的鉴定。
[0021]本专利技术的人源非小细胞肺癌细胞株HC4773可以用于研究人的ALK重排非小细胞肺癌细胞形态学及生物学特点、筛选和评估抗肿瘤药物及作用机制、研究肿瘤耐药机制、开发肿瘤耐药逆转药物及研究更有效的肿瘤治疗方法等，并可用于ALK重排非小细胞肺癌致瘤机制及其相关信号通路的研究。具有较高的科研和生产应用价值，预期能产生良好的科研、经济和社会效益。
附图说明
[0022]图1为本专利技术的人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773在倒置相差显微镜下拍摄的照片；
[0023]A为100倍，B为200倍。
[0024]图2为本专利技术人ALK重排非小细胞肺癌细胞株Pan
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Keratin、Epcam及ALK蛋白的表达；
[0025]A和B为HC4773细胞免疫荧光Pan
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Keratin(A)及Epcam(B)的表达(绿色荧光为Pan
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Keratin及Epcam，蓝色荧光为细胞核)；C为本专利技术人ALK重排非小细胞肺癌细胞株免疫印迹Epcam及ALK蛋白的表达，其中H3122为ALK表达阳性细胞株作阳性对照，A549为ALK表达阴性细胞株作阴性对照。
[0026]图3为人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773细胞生长曲线及倍增时间；
[0027]图4为人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773在免疫缺陷小鼠SCID Beige皮下所成的瘤体；
[0028]红色箭头所指处即为皮下所成的瘤体。
[0029]图5为人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773 ALK重排亚型Sanger法测序图；
[0030]HC4773 ALK重排亚型为EML4
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ALK variant 3(E6；A20)，箭头处为ALK 20号外显子的起始处，也是EML4与ALK的连接处。
[0031]图6为人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773对靶向药物Crizotinb的敏感性测定结果。
[0032]图7为人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773STR的鉴定结果。
具体实施方式
[0033]为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、构造特征、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以详细说明，但不会形成对本专利技术保护范围的限制。
[0034]本专利技术中涉及的现有实验方法、测试方法及溶液配制方法可以参考《细胞实验指南》，标准书号：7
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03
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007598
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6/Q.891原著：[美]D.L.斯佩克特R.D.戈德曼&L.A.莱因万德。
[0035]实施例中提及的RPMI1640培养液、试剂、抗体及试剂盒均为市购产品。
[0036]实施例1：人源非小细胞肺癌细胞株HC4773的制备
[0037]包括以下步骤：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773，保藏编号为CCTCC NO：C202370。2.根据权利要求1所述的人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773，其特征在于，该细胞株有EML4
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ALK基因重排，重排型号为EML4
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ALK variant 3(E6；A20)。3.根据权利要求1所述的人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773，其特征在于，该细胞株ALK蛋白表达阳性。4.根据权利要求1所述的人ALK重排非小细胞肺癌细胞株HC4773，其特征在于，该细胞株角蛋白Pan
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【专利技术属性】
技术研发人员：胡野荣，周杨钊，谭凌，
申请(专利权)人：中南大学湘雅二医院，
类型：发明
国别省市：