一种用于治疗视神经损伤的外泌体滴眼液及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种用于治疗视神经损伤的外泌体滴眼液及其制备方法，外泌体滴眼液的原料成分包括以下质量分数的组分：间充质干细胞外泌体2％～8％、维生素E 0.2％～0.8％、玻璃酸钠0.5％～1.5％、卡波姆0.1％～0.5％。该滴眼液具有抑制炎症反应，保护神经细胞，减轻各种原因导致的视网膜损伤，促进视神经细胞的神经突生长和功能恢复，缓解眼疲劳，改善视网膜血液循环等显著功效；此外，该滴眼液不含防腐剂、激素等成分，可长期使用，不刺激，无副作用。无副作用。

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗视神经损伤的外泌体滴眼液及其制备方法


[0001]本专利技术涉及药物制剂领域，尤其涉及一种用于治疗视神经损伤的外泌体滴眼液及其制备方法。

技术介绍

[0002]视神经属于中枢神经系统的一部分，由视网膜神经节细胞的胞体及轴突所组成，可将视网膜收集到的视觉信息传递至大脑皮层。视神经损伤作为常见眼部疾患，通常由外伤、遗传和一些病理因素，如青光眼、糖尿病、视网膜血管阻塞、缺血性视神经病变、视神经炎等引起，可导致视功能不可逆受损甚至失明。造成视神经损伤的病因和发病机制复杂，目前，治疗上没有明确、统一、公认的治疗方案。现有的治疗主要包括：对因治疗、药物治疗、中医治疗、联合用药、视神经鞘减压术、辅助治疗及外泌体治疗。
[0003]间充质干细胞外泌体(MSCs
‑
Exo)是一种携带DNA、miRNA、蛋白质等成分的细胞外囊泡。研究证实，MSCs
‑
Exo可以抑制炎症反应，保护神经细胞，减少神经细胞的损坏和凋亡，同时可以促进血管的新生，运送营养物质、生长因子等，促进视神经细胞的神经突生长和功能恢复。同时间充质干细胞外泌体有药物载体性、靶向性、良好的组织相容性及避免全身的排斥反应，因此其在视神经损伤相关研究具有广阔的研究前景。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种用于治疗视神经损伤的外泌体滴眼液及其制备方法，以减轻各种原因导致的视网膜损伤，促进视神经细胞的神经突生长和功能恢复，缓解眼疲劳，改善视网膜血液循环。
[0005]为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：
[0006]本专利技术第一方面提供了一种用于治疗视神经损伤的外泌体滴眼液，其原料成分包括以下质量分数的组分：间充质干细胞外泌体2％～8％、维生素E 0.2％～0.8％、玻璃酸钠0.5％～1.5％、卡波姆0.1％～0.5％。
[0007]进一步的，间充质干细胞外泌体的质量分数是间充质干细胞外泌体3％、维生素E 0.5％、玻璃酸钠0.7％、卡波姆0.1％
[0008]进一步的，间充质干细胞外泌体的质量分数是间充质干细胞外泌体5％、维生素E 0.5％、玻璃酸钠0.7％、卡波姆0.1％。
[0009]进一步的，还包括质量分数是0.1％～3.0％的生理盐水。
[0010]进一步的，还包括质量分数是86.2％～97.5％的注射用水。
[0011]本专利技术的第二方面提供了一种用于治疗视神经损伤的外泌体滴眼液的制备方法，包括如下步骤：
[0012]S1、间充质干细胞的培养：人脐带间充质干细胞MSCs以1
×
105/cm2的密度接种于培养瓶中，培养基用完全间充质干细胞培养基，将细胞培养瓶置于37℃、5％CO2孵育箱中培养；
[0013]倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化，待细胞长至培养瓶底60％面积时，换液培养，加无血清间充质干细胞培养液，48h后，收集培养上清液，合并于4℃冷藏备用；
[0014]S2、外泌体的提取：将人脐带间充质干细胞MSCs培养上清液收集至50mL离心管中，4℃、300g离心10min，以去除死细胞；将上清液转移至新的离心管中，4℃、2000g离心10min，以去除大的细胞碎片；将上清液转移至新的离心管中，4℃，10000g离心30min，以去除细胞器及小颗粒；
[0015]小心将上清液转移至无菌超速离心管中，进行第一次超速离心，4℃、100000g离心70min；用移液器将上清小心的移除，离心管底的沉淀用无菌PBS重悬，进行第二次超速离心，4℃、100000g离心70min；用移液器将上清小心的移除，得到的沉淀为外泌体。根据收集培养基的体积，按照每50mL收集的培养基最终使用不超过50μL的PBS重悬的要求加入适量无菌PBS重悬，然后用0.22μm离心式过滤器过滤；获得的无菌外泌体重悬液用BCA蛋白定量试剂盒检测总蛋白浓度，将无菌外泌体重悬液分装于无菌EP管中，置于
‑
80℃环境保存；
[0016]S3，辅配料的配制：将质量总量的0.2％～0.8％的维生素E、0.5％～1.5％玻璃酸钠、0.1％～0.5％卡波姆粉末混和均匀，紫外线消毒杀菌；
[0017]S4，滴眼液的配制：用质量总量的50％的注射用水溶解消毒后的玻璃酸钠和卡波姆的混和粉末，边加边搅拌，持续搅拌60分钟后，加入质量总量的2％～8％的间充质干细胞外泌体，最后加入生理盐水调节渗透压，测量PH值，使用PH调节剂将PH值调至6～7.5，补足注射用水，持续搅拌12h后，滤去不溶杂质，以2ml每支分装，密封得成品。
[0018]进一步的，S1中所述完全间充质干细胞培养基是90％间充质干细胞培养液+10％FBS。
[0019]进一步的，S1中所述人脐带间充质干细胞为3～6代的人脐带间充质干细胞。
[0020]进一步的，S3中所述射线消毒杀菌时间为30分钟。
[0021]进一步的，S4中所述滴眼液成品于2～8℃保存。
[0022]本专利技术与现有技术相比，其有益效果为：
[0023]1.本专利技术中所述的滴眼液，特别添加了间充质干细胞外泌体，间充质干细胞外泌体具有神经营养以及免疫抑制作用，能减轻各种原因导致的视网膜损伤、减轻炎症反应，促进视神经细胞的神经突生长和功能恢复。
[0024]2.添加了维生素E和玻璃酸钠，这些成分搭配使用，相互作用，使得本专利技术的滴眼液缓解眼疲劳、改善视网膜血液循环、减轻充血等的效果显著。
[0025]3.本专利技术中所述的的滴眼液不含防腐剂、激素等成分，可长期使用，不刺激，无副作用。
具体实施方式
[0026]下面结合实施例对本专利技术作进一步的详细描述。本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
[0027]为了实现减轻各种原因导致的视网膜损伤，促进视神经细胞的神经突生长和功能恢复，缓解眼疲劳，改善视网膜血液循环的目的，本实施例1提供了一种用于治疗视神经损
伤的外泌体滴眼液，由以下质量分数的组分制成：
[0028]间充质干细胞外泌体2％～8％、维生素E 0.2％～0.8％、玻璃酸钠0.5％～1.5％、卡波姆0.1％～0.5％，生理盐水0.1％～3.0％，余量为注射用水，各原料的含量总和为100％。其中，间充质干细胞外泌体为人脐带间充质干细胞外泌体，具有神经营养以及免疫抑制作用，能减轻各种原因导致的视网膜损伤、减轻炎症反应，促进视神经细胞的神经突生长和功能恢复。而维生素E可抑制眼睛晶状体内的过氧化脂反应，使末梢血管扩张，改善血液循环，缓解眼疲劳。玻璃酸钠是角膜基质的重要组成部分，不仅有稳定泪膜、保水、保湿、润滑的作用，还促进角膜上皮细胞增殖和损伤修复，减轻角膜上皮炎症，恢复眼表损伤。玻璃酸钠作为药物媒介，不仅具有良好的生物相容性，而本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗视神经损伤的外泌体滴眼液，其特征在于，其原料成分包括以下质量分数的组分：间充质干细胞外泌体2％～8％、维生素E 0.2％～0.8％、玻璃酸钠0.5％～1.5％、卡波姆0.1％～0.5％。2.根据权利要求1所述的外泌体滴眼液，其特征在于，间充质干细胞外泌体的质量分数是：间充质干细胞外泌体3％、维生素E 0.5％、玻璃酸钠0.7％、卡波姆0.1％。3.根据权利要求1所述的外泌体滴眼液，其特征在于，间充质干细胞外泌体的质量分数是：间充质干细胞外泌体5％、维生素E 0.5％、玻璃酸钠0.7％、卡波姆0.1％。4.根据权利要求1或2或3所述的外泌体滴眼液，其特征在于，还包括质量分数是0.1％～3.0％。5.根据权利要求4所述的外泌体滴眼液，其特征在于，还包括质量分数是86.2％～97.5％的注射用水。6.一种用于治疗视神经损伤的外泌体滴眼液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、间充质干细胞的培养：人脐带间充质干细胞MSCs以1
×
105/cm2的密度接种于培养瓶中，培养基用完全间充质干细胞培养基，将细胞培养瓶置于37℃、5％CO2孵育箱中培养；倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化，待细胞长至培养瓶底60％面积时，换液培养，加无血清间充质干细胞培养液，48h后，收集培养上清液，合并于4℃冷藏备用；S2、外泌体的提取：将人脐带间充质干细胞MSCs培养上清液收集至50ml离心管中，4℃、300g离心10mim，以去除死细胞；将上清液转移至新的离心管中，4℃、2000g离心10min，以去除大的细胞碎片；将上清液转移至新的离心管中，4℃，10000g离心30min，以去除细胞器及小颗粒；小心将上清液转移至无菌超...

【专利技术属性】
技术研发人员：晁晓东，蔡敏，
申请(专利权)人：陕西初源外泌体生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：