检测脑膜瘤和胶质瘤TERT启动子突变的引物组、试剂盒、扩增方法和应用技术

本申请涉及基因检测领域，尤其涉及检测脑膜瘤和胶质瘤TERT启动子突变的引物组、试剂盒、扩增方法和应用；所述引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的第一C228T突变基因探针、如SEQ ID NO.2所示第二突变型C228T突变基因探针、如SEQ ID NO.3所示第一C250T突变基因探针和如SEQ ID NO.4所示第二C250T突变基因探针；还包括核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的第一GAPDH基因探针和如SEQ ID NO.6所示的第二GAPDH基因探针；设计C228T突变基因探针和C250T突变基因探针，引入GAPDH基因对样本质量的差异进行控制，能得到特异性表达的真正差异，实现一次性扩增就能检测出脑膜瘤和胶质瘤中的TERT启动子突变型。中的TERT启动子突变型。中的TERT启动子突变型。

【技术实现步骤摘要】
检测脑膜瘤和胶质瘤TERT启动子突变的引物组、试剂盒、扩增方法和应用


[0001]本申请涉及基因检测领域，尤其涉及检测脑膜瘤和胶质瘤TERT启动子突变的引物组、试剂盒、扩增方法和应用。

技术介绍

[0002]TERT(telomerase reverse transcriptase，端粒末端转移酶逆转录酶)突变与脑膜瘤的WHO分级级别、复发率、侵袭性等具有密切的关系，而且具有TERT启动子突变的脑膜瘤直接诊断为CNS WHO III级，是较为严重的脑膜瘤。目前TERT在绝大多数非肿瘤细胞中没有转录活性，但是约在73％的肿瘤中存在TERT突变，目前常见的TERT突变主要发生在TERT启动子的5号染色体的两个热点(1,295,228和1,295,250)，分别被命名为C228T突变和C250T突变。目前TERT启动子突变型脑膜瘤患者的中位无复发生存期为14个月，而TERT启动子野生型脑膜瘤患者的中位为101个月，因此与TERT启动子野生型脑膜瘤患者相比，有TERT启动子突变型脑膜瘤复发率增加了5.4倍、死亡率增加了3.6倍，在脑膜瘤患者中检测TERT启动子突变型显得十分必要。
[0003]同时TERT启动子突变中的C228T突变是更普遍的癌症相关TERT变体，其中又以少突胶质细胞瘤的突变比例最高，胶质瘤是中枢神经系统最常见、预后较差的恶性肿瘤，一般需要通过手术切除，但是切除之前需要先分析胶质瘤中的突变类型，方便对手术切除的部位和切除的方式进行确定，因此对TERT突变进行检测，是确定胶质瘤和脑膜瘤中的突变类型的重要方式之一。
[0004]目前针对基因突变的检测包括实时定量PCR、荧光原位杂交、流式细胞术、二代测序技术，它们都是通过患者血液、体液或组织细胞对DNA进行检测，但都因技术人员要求高、操作复杂、费用昂贵、报告周期长等缺点，导致其在实际的临床应用中十分受限，同时由于不同检测方法所用试剂的灵敏度不同，为了检测的准确，一般还需要多次取样，增加了检测步骤和费用，影响患者自身的情况。
[0005]为了解决灵敏度的问题，目前常规的技术手段是通过荧光定量PCR技术提高检测的灵敏程度，从而提高检测的准确性，但是目前针对脑膜瘤和胶质瘤的TERT启动子突变检测，由于探针引物的特异性要求不同，因此大多需要分开并采用不同的引物组进行检测，导致检测的时间过长，因此如何提供既能检测脑膜瘤又能检测胶质瘤中TERT启动子突变的探针引物组，是目前亟需解决的技术问题。

技术实现思路

[0006]本申请提供了检测脑膜瘤和胶质瘤TERT启动子突变的引物组、试剂盒、扩增方法和应用，以解决现有技术中引物组难以同时检测脑膜瘤和胶质瘤中TERT启动子突变的技术问题。
[0007]第一方面，本申请提供了一种检测脑膜瘤和胶质瘤TERT启动子突变的引物组，所
述引物组包括第一C228T突变基因探针、第二突变型C228T突变基因探针和、第一C250T突变基因探针和第二C250T突变基因探针，所述第一C228T突变基因探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述第二突变型C228T突变基因探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述第一C250T突变基因探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述第二C250T突变基因探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
[0008]所述引物组还包括第一GAPDH基因探针和第二GAPDH基因探针，所述第一GAPDH基因探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述第二GAPDH基因探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
[0009]可选的，所述引物组还包括第一GAPDH上游引物、第二GAPDH上游引物、第一GAPDH下游引物和第二GAPDH下游引物，所述第一GAPDH上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述第二GAPDH上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述第一GAPDH下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述第二GAPDH下游引物如SEQ ID NO.10所示。
[0010]可选的，所述第一C228T突变基因探针和第二C228T突变基因探针的5
’
端分别连接有第一报告基团，所述第一C228T突变基因探针和第二C228T突变基因探针的3
’
端分别连接有第一非荧光淬灭基团。
[0011]可选的，所述第一C250T突变基因探针和所述第二C250T突变基因探针的5
’
端分别连接有第二报告基团，所述第一C250T突变基因探针和所述第二C250T突变基因探针的3
’
端分别连接有第二非荧光淬灭基团。
[0012]可选的，所述第一报告基团和所述第二报告基团分别包括FAM或ROX。
[0013]可选的，所述第一非荧光淬灭基团和所述第二非荧光淬灭基团分别包括BHQ或MGB。
[0014]可选的，所述引物组还包括第一TERT上游引物、第二TERT上游引物、第一TERT下游引物和第二TERT下游引物，所述第一TERT上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，所述第二TERT上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，所述第一TERT下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，所述第二TERT下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示。
[0015]第二方面，本申请提供了一种检测脑膜瘤和胶质瘤TERT启动子突变的试剂盒，所述试剂盒包括第一方面所述的引物组。
[0016]第三方面，本申请提供了一种非诊断目的检测脑膜瘤和胶质瘤TERT启动子突变的扩增方法，所述扩增方法在第二方面所述的试剂盒中进行，所述扩增方法包括：
[0017]分别提取预设重量的离体肿瘤组织样品；
[0018]对所述肿瘤组织样品进行前处理，得到含目的基因的样品上清液；
[0019]向所述试剂盒中加入所述样品上清液和磁珠溶液，后进行PCR扩增反应，以得到纯化的扩增产物，其中，所述预设重量为2.5mg～5.0mg，所述肿瘤组织样品包括脑膜瘤组织样品和/或胶质瘤组织样品。
[0020]第四方面，本申请提供了一种检测脑膜瘤和胶质瘤TERT启动子突变的引物组的应用，将第一方面所述的引物组用于制备手术过程中快速检测脑膜瘤TERT启动子突变的检测试剂中。
[0021]本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
[0022]本申请实施例提供的一种检测脑膜瘤和胶质瘤TERT启动子突变的引物组的应用，
通过设计的第一C228T突变基因探针、第二突变型C228T突变基因探针和、第一C250T突变基因探针和第二C250T突变基因探针，可以在同一次的检测过程中将脑膜瘤或者胶质瘤中的TERT启动子突变的C228T突变和C250T突变检测出，同时还引入了第一GAPDH基因探针和第二GAPDH基因探针作为内参基因，利用GAPDH基因对样本质量的差异进行控制，使得C228T突变和C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
任一项所述的引物组用于制备手术过程中快速检测脑膜...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛皓，李刚，韩哲，姚嘉，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：