用于食管鳞癌检测的生物标记物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种用于食管鳞癌检测的生物标记物，该分子标记物为ZNF831基因上的序列为SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5这5个基因片段。发明专利技术人研究发现，ZNF831基因在食管鳞癌组织中的mRNA表达量明显低于癌旁正常组织。进一步通过检测ZNF831上的序列为SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5这5个基因片段在食管鳞癌细胞株EC9706中的表达水平，发现ZNF831基因上的序列为SEQ ID NO.5的基因片段表达显著升高。提示该片段可用于食管鳞癌检测中，为进一步研究ZNF831基因在食管鳞癌发生发展中的作用和机制提供了依据。食管鳞癌发生发展中的作用和机制提供了依据。

【技术实现步骤摘要】
ID NO.10
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SEQ ID NO.11所示，或为SEQ ID NO.12
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SEQ ID NO.13所示，或为SEQ ID NO.14
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SEQ ID NO.15所示，或为SEQ ID NO.16
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SEQ ID NO.17所示。
[0018]在其中一些实施例中，所述上下游引物序列分别为SEQ ID NO.16
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SEQ ID NO.17所示。
[0019]在其中一些实施例中，所述试剂盒的检测样本选自血液、胸腔积液、腹水、羊水、骨髓或培养的人或动物细胞。
[0020]本专利技术的另一目的还提供了上述食管鳞癌检测试剂盒在食管鳞癌检测中的应用。
[0021]本专利技术另一目的还提供了一种检测食管鳞癌的方法。
[0022]实现上述目的的技术方案如下：
[0023]一种检测食管鳞癌的方法，包括以下步骤：
[0024](1)获取待测的生物样品基因组DNA；
[0025](2)对所述ZNF831基因表达量进行检测。
[0026]在其中一些实施例中，所述生物样品为血液、胸腔积液、腹水、羊水、骨髓或培养的人或动物细胞。
[0027]本专利技术的专利技术人找到了一种可用于检测食管鳞癌的分子标记物，该分子标记物为ZNF831基因上的序列为SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5这5个基因片段。专利技术人研究发现，ZNF831基因在食管鳞癌组织中的mRNA表达量明显低于癌旁正常组织。而通过检测ZNF831上的序列为SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5这5个基因片段在正常食管上皮细胞株HEEC和食管鳞癌细胞株EC9706中的表达水平，可明显看出ZNF831基因的SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5在EC9706细胞中，与在正常食管上皮细胞株HEEC中的表达量相比，均存在高表达，并且SEQ ID NO.5在EC9706细胞中高表达量相比而已更为明显。进一步地通过生物信息学分析，发现差异性甲基化的片段中有一个高甲基化片段位于ZNF831基因的启动子区域。并且，用甲基化抑制药物5
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Aza
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dC处理ZNF831基因低表达的食管鳞癌细胞株后，ZNF831基因的mRNA表达水平显著上升，提示ZNF831基因在食管鳞癌中可能是一个受DNA甲基化调控的抑癌基因，且可能参与化学致癌发生过程。这为进一步研究ZNF831基因在食管鳞癌发生发展中的作用和机制提供了依据。
附图说明
[0028]图1为用GraphPad Prism软件分析ZNF831基因在肿瘤组织和癌旁正常组织中的mRNA表达情况，其中，A为ZNF831基因在所有样本肿瘤组织及癌旁正常组织中的表达统计分析结果；B为ZNF831基因在配对样本肿瘤组织及癌旁正常组织中的表达统计分析结果。
[0029]图2为ZNF831的5个基因片段在食管鳞癌细胞株EC9706的表达检测结果示意图，其中泳道1、3、5、7、9分别为细胞株HEEC中ZNF831基因SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5的表达情况，泳道2、4、6、8、10分别为食管鳞癌细胞株EC9706中ZNF831基因SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5的表达情况。
[0030]图3为用甲基化抑制药物5
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Aza
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dC处理食管鳞癌细胞ECA109后，ZNF831基因的mRNA表达水平的检测结果示意图，其中泳道1、2分别为细胞株HEEC采用5
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Aza
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dC和DMSO培养后ZNF831基因SEQ ID NO.5和ACTIN基因的表达情况，泳道3、4分别为细胞株NCI
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H1975采用5
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Aza
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dC和DMSO培养后ZNF831基因SEQ ID NO.5和ACTIN基因的表达情况。
具体实施方式
[0031]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述。本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术公开内容的理解更加透彻全面。
[0032]下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
[0033]此外，如本专利技术所使用的，术语“或”是包含性的“或”符号，并且等同于术语“和/或”，除非上下文另有明确规定。术语“基于”不是排他性的，并且允许基于未描述的其他因素，除非上下文另有明确规定。此外，在整个说明书中，“一个”、“一种”和“所述/该”的含义包括复数指示物。“在......中”中的含义包括“在......中”和“在......上”。
[0034]以下结合具体实施例对本专利技术作进一步详细的说明。
[0035]实施例1 ZNF831基因在肿瘤患者中的表达
[0036]整理从TCGA数据库获取的关于食管鳞癌患者ZNF831基因mRNA表达的数据，并与其临床病例资料进行匹配合并。根据ZNF831基因的表达量，采用中位数对510例食管鳞癌患者进行分组，将表达量高于中位数的病例定义为高表达组(255例)，低于中位数的病例定义为低表达组(255例)。然后对肿瘤组织和癌旁正常组织(59例)中ZNF831基因的表达量及其与临床病理指标之间的关系进行统计分析。
[0037]表1
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1 ZNF831在所有肿瘤组织样本及癌旁正常组织中的mRNA相对表达水平
[0038][0039]表1
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2 ZNF831在配对样本肿瘤组织及癌旁正常组织中的mRNA相对表达水平
[0040][0041][0042]上述分析结果如上表1
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1和图1所示，通过采用GraphPad Prism软件分析了TCGA数据库中ZNF831基因在肿瘤组织(510例食管鳞癌患者)和癌旁正常组织(59例)中的mRNA表达情况，其中，A为ZNF831基因在所有样本肿瘤组织及癌旁正常组织中的表达统计分析结果；B为ZNF831基因在配对样本肿瘤组织及癌旁正常组织中的表达统计分析结果。ZNF831基因在食管鳞癌组织中的mRNA表达量明显低于癌旁正常组织(P<0.01)，如上表1
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1及图1中A所示。在59例配对样本的肿瘤组织和癌旁正常组织中也发现，ZNF831基因在肿瘤组织中明显较癌旁正常组织下调，两组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)，如上表1
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2及图1中B所示。
[0043]实施例2 ZNF831基因在肿瘤细胞中的表达
[0044]实验材料：
[0045]正常食管上皮细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于食管鳞癌检测的生物标记物，其特征在于，所述生物标记物为ZNF831基因，所述ZNF831基因序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5。2.根据权利要求1所述用于食管鳞癌检测生物标记物，其特征在于，所述ZNF831基因序列为SEQ ID NO.5。3.权利要求1
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2所述生物标记物在制备检测食管鳞癌试剂中的应用。4.一种食管鳞癌检测试剂盒，其特征在于，包括检测权利要求1
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2任一项所述生物标记物的试剂。5.根据权利要求4所述食管鳞癌检测试剂盒，其特征是在于，所述试剂盒是采用聚合酶链式反应技术、原位杂交技术、酶学突变检测技术、化学剪切错配技术、质谱分析技术、基因芯片技术或基因测序技术或它们的组合制备而成。6.根据权利要求5所述食管鳞癌检测试剂盒，其特征是在于，所述试剂盒采用的技术为包括聚合酶链式反应技术，所述聚合酶链式反应是RT
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PCR、免疫PCR、巢式PCR、荧光PCR、膜结合PCR、锚定PCR、固着PCR、原位PCR、不对称PCR、长距离PCR、降落伞PCR、梯度PCR中的任意一种。7.根据权利要求6所述食管鳞癌检测试剂盒，其特征在于，所述聚合酶链式反应是RT
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【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书九页序列表四页附图二页，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：