一种生产胞二磷胆碱的方法技术

本发明专利技术公开了一种生产胞二磷胆碱的方法，属于基因工程和微生物工程领域。本发明专利技术通过基因编辑技术敲除宿主细胞基因组上的dCTP脱氨酶基因dcd、磷酸核苷激酶基因ndk、核糖核苷三磷酸还原酶基因nrdD和/或三磷酸核苷焦磷酸水解酶基因mazG，并过量表达磷酸胆碱胞苷酰转移酶基因CCT和胆碱激酶基因CKI，并敲除宿主细胞基因组上的肽聚糖糖基转移酶基因mtgA，并将酿酒酵母来源的ScCCT酶进行定点突变提高酶活力，构建获得的重组大肠杆菌的胞二磷胆碱发酵水平可达28.3g/L以上。这种高效的重组菌株可用于实现胞二磷胆碱的工业化生产，利于降低其生产成本及环境污染，实现绿色生物制造。实现绿色生物制造。实现绿色生物制造。

【技术实现步骤摘要】
一种生产胞二磷胆碱的方法


[0001]本专利技术涉及一种生产胞二磷胆碱的方法，属于基因工程和微生物工程领域。

技术介绍

[0002]胞二磷胆碱，又名胞磷胆碱、尼古林、二磷酸胞嘧啶胆碱、胞嘧啶核苷二磷酸胆碱，为核苷衍生物。可改善头部外伤后或脑手术后意识障碍的意识状态及脑电图，促进脑卒中偏瘫病人的上肢运动功能的恢复，对促进大脑功能恢复、促进苏醒有一定作用。促进卵磷脂生物合成和抗磷脂酶A作用。与蛋白分解酶抑制剂合用，可保护及修复胰腺组织。
[0003]目前，胞磷胆碱的生产方法主要有化学合成法和生物合成法。化学合成法主要为前期的工业生产路线。化学合成法存在诸多缺点，例如：有毒有机化学试剂的使用、低转化率等，不适于大规模的生产。目前工业生产上主要采用啤酒酿造后产生的酿酒酵母渣，催化胞嘧啶核苷酸CMP和磷酸胆碱，酶法转化生产胞二磷胆碱。CN1944661A披露了一种利用啤酒酵母合成胞二磷胆碱的方法，转化率达65％，产品浓度最高仅达4g/L。但是此种方法的底物价格较为昂贵，同时这种酿造啤酒产生的酿酒酵母没有经过特异性改造与优化，其催化底物胞嘧啶核苷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生产胞二磷胆碱的重组菌，其特征在于，以大肠杆菌为宿主细胞，敲除基因组上的dCTP脱氨酶编码基因dcd、磷酸核苷激酶编码基因ndk、核糖核苷三磷酸还原酶编码基因nrdD和/或三磷酸核苷焦磷酸水解酶编码基因mazG，并过量表达磷酸胆碱胞苷酰转移酶编码基因CCT和胆碱激酶编码基因CKI。2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述过量表达为将编码基因CCT和编码基因CKI整合至大肠杆菌基因组上。3.根据权利要求1或2所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌在yhdE位点整合编码基因CKI，在poxB位点整合编码编码基因CCT。4.根据权利要求1～3任一所述的重组菌，其特征在于，所述磷酸胆碱胞苷酰转移酶编码基因CCT的氨基酸序列如(a)或(b)所示：(a)氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；(b)在(a)的基础上将第111位的缬氨酸Val突变为丙氨酸Ala。5.根据权利要求1～4任一所述的重组菌，其特征在于，还敲除了肽聚糖糖基转...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玮琪，张剑，
申请(专利权)人：江苏香地化学有限公司，
类型：发明
国别省市：