一种石油烃降解菌及其培养方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种石油烃降解菌及其培养方法和应用。该菌为芽孢杆菌(Bacillus sp.)Bacillus 3#，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.21561。该菌株筛选自油田污染土壤，能够很好适应石油污染环境并在其中定殖，具有较强的环境适应性，可降解石油烃的范围广，且石油降解率较高。解率较高。解率较高。

【技术实现步骤摘要】
一种石油烃降解菌及其培养方法和应用


[0001]本专利技术涉及石油污染的微生物修复
，具体涉及一种石油烃降解菌及其培养方法和应用。

技术介绍

[0002]在石油的开采、运输和加工过程中，石油及其制品通过多种途径进入环境，对土壤和水体造成严重污染，并威胁人类健康。石油污染土壤治理技术的研究及应用正日益受到广泛重视和关注。
[0003]目前石油污染土壤的治理技术主要有物理方法、化学方法和生物方法。物理修复在去除石油烃的同时也破坏了土壤的组分和结构，而且费用昂贵；化学法修复效果较好，但使用的化学试剂会产生二次污染，限制了其应用范围。生物修复技术可利用特定的植物、微生物或原生动物等吸收、转化或降解环境污染物，实现环境修复的目的，而且生物修复费用低、效果好，对环境影响低、无二次污染、不破坏植物生长所需的土壤环境，被认为是一种十分具有发展前景的石油污染修复方法。在微生物降解石油的过程中，微生物以石油烃为碳源和能源，并通过自身的代谢产生分解酶，裂解长链或多环烃类；另外微生物在生长繁殖过程中能产生诸如生物降解酶、生物表面活性剂等有利于驱油的物质，促进石油烃分解成为小分子从而达到降解的目的。由此可见筛选降解石油的特种微生物是生物修复技术的关键。
[0004]现有的石油降解微生物筛选主要以实验室研究为主，以汽油、柴油或某种单组份石油烃为底物进行菌种筛选，对于成分复杂、不易降解的原油污染关注较少。原油中含有胶质和沥青质等结构复杂的重质成分，不易被乳化，不易被降解，在自然界中很难找到能够降解原油中所有组分的单一菌种。因此，筛选可降解石油烃的范围广，特别是可降解重质石油烃的菌种，是提高石油烃降解率的关键，也是开发石油烃污染土壤修复菌剂的基础。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种石油烃降解菌及其培养方法和应用。该菌株筛选自油田污染土壤，能够很好适应石油污染环境并在其中定殖，具有较强的环境适应性，可降解石油烃的范围广，且石油降解率较高。
[0006]本专利技术第一方面提供一种石油烃降解菌，芽孢杆菌Bacillus 3#，其分类命名为芽孢杆菌(Bacillus sp.)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.21561。
[0007]根据本专利技术，所述石油烃降解菌，芽孢杆菌Bacillus 3#，主要形态特征为：菌落呈圆形，边缘整齐，表明光滑，有光泽，乳白色半透明，菌体呈杆状，中生芽孢，无荚膜。
[0008]根据本专利技术，所述石油烃降解菌，芽孢杆菌Bacillus 3#，生理生化特征表现为：
[0009](1)柠檬酸盐利用实验+
[0010](2)过氧化氢酶实验+
[0011](3)氧化酶实验+
[0012](4)淀粉水解实验+
[0013](5)甲基红实验+
[0014](6)明胶液化实验+
[0015](7)硫化氢产生实验
‑
[0016](8)吲哚实验
‑
[0017](9)油脂水解实验
‑
[0018](10)乳糖氧化发酵实验
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[0019](11)硝酸盐还原实验
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[0020](12)石蕊牛奶实验胨化
[0021](13)革兰氏染色+；
[0022]其中，+表示阳性，
‑
表示阴性。
[0023]根据本专利技术，所述石油烃降解菌，芽孢杆菌Bacillus 3#，为好氧菌，代谢可产生色氨酸酶、过氧化氢酶，不分解或较少分解葡萄糖。
[0024]本专利技术第二方面提供上述石油烃降解菌的培养方法，所述方法包括：将所述芽孢杆菌Bacillus 3#活化后，接种到培养基中培养，即得到芽孢杆菌Bacillus 3#种子液。
[0025]根据本专利技术，所述培养方法中，菌株接种后培养时的条件为：温度35～40℃时间24～48h；并且培养时保持培养基震荡培养。震荡参数为150～200rpm。
[0026]根据本专利技术，所述培养方法中，所述培养基为：按重量份计，牛肉膏4～6，蛋白胨8～11，NaCl 4～6，蒸馏水900～1000；所述培养基的pH值为6.8～7.2。培养基的制备方法按照本领域常规方法制备。
[0027]根据本专利技术，所述活化的具体步骤为：把菌株接种到固体培养基的斜面或者平板中培养得到活化后菌株。培养温度为30～40℃时间40～50h。培养后保存于冰箱中待用。保存温度为0～5℃。所述固体培养基为：按重量份计，牛肉膏4～6，蛋白胨8～11，NaCl 4～6，琼脂15～25，蒸馏水900～1000；固体培养基的pH值为6.8～7.2。固体培养基的制备方法按照本领域常规方法制备。
[0028]本专利技术第三方面提供上述石油烃降解菌在石油烃降解中的应用。
[0029]根据本专利技术，优选地，所述应用为降解菌在原油降解中的应用。
[0030]根据本专利技术，所述应用包括：将培养后的芽孢杆菌Bacillus 3#种子液接种到石油无机盐培养基中培养，对石油烃降解。
[0031]根据本专利技术，培养后的芽孢杆菌Bacillus 3#种子液的体积占石油无机盐培养基体积的1％～10％。
[0032]根据本专利技术，所述应用中的培养条件为：温度35～40℃时间5～10d；并且培养时保持培养基震荡培养。震荡参数为150～200rpm。
[0033]根据本专利技术，所述石油无机盐培养基为：按重量份计，K2HPO
4 5～7，KH2PO45～7，(NH4)2SO
4 5～7，NaCl 4～6，原油1～2，蒸馏水900～1100；所述培养基的pH值为6.8～7.2；所述原油为辽宁盘锦地区的油田所产原油。所述石油无机盐培养基的制备方法按照本领域常规方法制备，制备得到的培养基在118～125℃下灭菌25～40min。
[0034]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0035]1)本专利技术提供的芽孢杆菌Bacillus 3#筛选自油田污染土壤，能够很好适应石油污染环境并在其中定殖，具有较强的环境适应性。特别的，本专利技术菌株作为单一菌种，可直接降解成分复杂，不易降解的原油，可降解的石油烃范围广，并且在降解石油的过程中兼产生物表面活性剂，可乳化石油烃，进一步促进了石油烃的降解，石油降解率较高。
[0036]2)本专利技术所述的芽孢杆菌Bacillus 3#可以在常规条件下以原油为唯一碳源进行生长，无需人为添加能源、碳源，工艺要求低，应用成本低。
[0037]3)本专利技术所述的芽孢杆菌Bacillus 3#应用于石油污染的治理中，菌体在降解石油后，其菌体本身可通过自然降解而去除，不会对环境产生二次污染。
[0038]本专利技术的石油烃降解菌，芽孢杆菌Bacillus 3#，其分类命名为芽孢杆菌(Bacillus sp.)，已于2020年12月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种石油烃降解菌，芽孢杆菌Bacillus 3#，其分类命名为芽孢杆菌(Bacillus sp.)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.21561。2.一种权利要求1所述降解菌的培养方法，其特征在于，所述方法包括：将所述芽孢杆菌Bacillus 3#活化后，接种到培养基中培养，即得到芽孢杆菌Bacillus 3#种子液。3.根据权利要求2所述培养方法，其特征在于，所述培养方法中，菌株接种后培养时的条件为：温度35～40℃，时间24～48h；优选地，培养时保持培养基震荡培养；震荡参数为150～200rpm。4.根据权利要求2所述培养方法，其特征在于，所述培养方法中，所述培养基为：按重量份计，牛肉膏4～6，蛋白胨8～11，NaCl 4～6，蒸馏水900～1000；所述培养基的pH值为6.8～7.2。5.根据权利要求2所述培养方法，其特征在于，所述活化的具体步骤为：把菌株接种到固...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宇，单广波，徐佰青，王山榕，王永剑，
申请(专利权)人：中国石油化工股份有限公司大连石油化工研究院，
类型：发明
国别省市：