一种重组猪胃蛋白酶的纯化制备方法及重组猪胃蛋白酶技术

本公开的一种重组猪胃蛋白酶的纯化制备方法及重组猪胃蛋白酶，其中，纯化制备方法包括：将具有载体的猪胃蛋白酶转化到大肠杆菌中表达，并将表达后的猪胃蛋白酶进行发酵离心处理，得到湿菌；收获的湿菌经大肠杆菌裂解澄清试剂盒裂解、离心，获得沉淀；洗涤沉淀，获得包涵体，包涵体变性后进一步复性，得到复性液；复性液进一步在4℃透析过液，并将透析过液后的复性液进行离子交换层析纯化，得到纯度≥90％的重组猪胃蛋白酶原；重组猪胃蛋白酶原进一步脱盐，获得纯度≥95％的重组猪胃蛋白酶。该工程菌株在大肠杆菌培养基中表达猪胃蛋白酶原，后期再经过培养基及培养条件优化可实现猪胃蛋白酶原的高效连续生产，具有良好的商业应用前景。前景。前景。

【技术实现步骤摘要】
一种重组猪胃蛋白酶的纯化制备方法及重组猪胃蛋白酶


[0001]本公开涉及重组猪胃蛋白酶纯化
，具体涉及一种重组猪胃蛋白酶的纯化制备方法及重组猪胃蛋白酶。

技术介绍

[0002]胃蛋白酶是蛋白酶中的一种，广泛应用于医药、食品、轻工以及生物技术等各个领域。目前其主要来源于动物(如牛、羊、猪等)的胃组织，但是动物源胃蛋白酶存在较多问题，例如易容受动物脏器资源的限制；胃蛋白酶产量小、价格高，且酶活性低、质量不稳定；容易产生有害化学物质残留，例如动物组织的有毒有害因子。因此，以上因素限制了胃蛋白酶的广泛使用。通过基因工程方法，构建重组胃蛋白酶高产工程菌，是解决胃蛋白酶目前应用“瓶颈”的有效方法，该方法通过大规模发酵生产，可大大降低成本，并且纯化得到的酶产物残留少，纯度高，具有环保、不受原料限制等优点。
[0003]但是，目前依然缺少高效表达有活性的胃蛋白酶的工程菌，商品化的重组胃蛋白酶还很少，无法满足市场应用。
[0004]需要说明的是，在上述
技术介绍
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组猪胃蛋白酶的纯化制备方法，其特征在于，包括：将具有载体的猪胃蛋白酶转化到大肠杆菌中表达，并将表达后的猪胃蛋白酶进行发酵离心处理，得到湿菌；收获的湿菌经大肠杆菌裂解澄清试剂盒裂解、离心，获得沉淀；洗涤沉淀，获得包涵体，包涵体变性后进一步复性，得到复性液；复性液进一步在4℃透析过液，并将透析过液后的复性液进行离子交换层析纯化，得到纯度≥90％的重组猪胃蛋白酶原；重组猪胃蛋白酶原进一步脱盐，获得纯度≥95％的重组猪胃蛋白酶。2.根据权利要求1所述的重组猪胃蛋白酶的纯化制备方法，其特征在于，还包括：对重组猪胃蛋白酶进行活性检测，将活性检测合格的重组猪胃蛋白酶进行分装并保存；其中，保存温度不高于
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20℃。3.根据权利要求2所述的重组猪胃蛋白酶的纯化制备方法，其特征在于，活性检测采用中国药典2020版胃蛋白酶活性检测方法测定重组猪胃蛋白酶活性。4.根据权利要求1所述的重组猪胃蛋白酶的纯化制备方法，其特征在于，步骤洗涤沉淀，获得包涵体中，采用的洗涤液洗涤所述沉淀；所述洗涤液的组份包括：20mMTris，2M尿素，0.15M氯化钠，20％蔗糖，pH＝7.0～8.0；每克所述沉淀中加入20ml所述洗涤液。5.根据权利要求4所述的重组猪胃蛋白酶的纯化制备方法，其特征在于，洗涤液洗涤所述沉淀包括：按比例将洗涤液加入至所述沉淀中；室温条件下：采用磁力搅拌器对沉淀与洗涤液的混合液进行搅拌；其中，磁力搅拌器的转速为：520rpm、搅拌时长为30min；对搅拌后的混合液进行离心处理；其中，离心转速为：12000rpm、离心温度为：4℃；离心时长为30min；重复上述步骤至少两次，即完成洗涤，获得包涵体。6.根据权利要求1所述的重组猪胃蛋白酶的纯化制备方法，其特征在于，步骤包涵体变性后进一步复性，得到复性液中，采用变性缓冲液对所述包涵体进行变性；其中，所述变性缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵江峰，李艳霞，孟苗，秦奇鹏，张江凡，杨小静，
申请(专利权)人：西安麦博泰克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：