一种植物启动子活性筛选系统及其构建方法和应用技术方案

本发明专利技术公开了一种植物启动子活性筛选系统及其构建方法和应用，涉及基因工程领域，包括CYP76AD1、DODA和5GT基因的表达盒载体；CYP76AD1包含SEQ IDNO.1，DODA包含SEQ ID NO.2，5GT包含SEQ ID NO.3。其表达载体由基因表达盒通过Goldengate方式连接，得到的对照组和待筛选表达载体。该筛选系统的应用。本发明专利技术将待筛选植物启动子驱动5GT基因的表达，通过甜菜红素色素的颜色深浅来反推5GT的表达情况，进而可以快速获知待筛选启动子的活性高低。能够在不使用仪器的条件下，通过肉眼观察，快速获得启动子活性的定性比较；也能够仅需常用仪器进行定量分析。用仪器进行定量分析。用仪器进行定量分析。

【技术实现步骤摘要】
一种植物启动子活性筛选系统及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程领域，尤其涉及一种植物启动子活性筛选系统及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]启动子位于基因转录起始位点上游，通过与RNA聚合酶、转录因子等结合形，从而启动其下游基因的转录，并且控制着转录的时间、空间和表达强度。近年来，将整个合成途径构建在一个多基因载体上成为可能。在多基因载体构建过程中，每个基因都需要自己的启动子与终止子，使得构建过程多次使用同一启动子，然而启动子区的同源性可能引发基因沉默，或基因间的相互抑制。此外在构建多基因表达载体时，随着基因数量的增加，载体过于庞大将影响载体的构建效率、转化效率等，因此使用短小且表达高效的启动子是压缩多基因表达载体大小的主要方法。基于启动子的重要作用，筛选具有相同表达模式、不同活性强度的启动子对合成生物学的发展具有重要意义。
[0003]目前植物启动子的活性一般通过报告基因来检测，常用的筛选报告基因有以下3种：荧光蛋白(GFP、RFP等)、荧光素酶基因(luc)、糖苷酶基因(GUS、lacZ等)等。荧光蛋白在紫外本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物启动子活性筛选系统，其特征在于，包括3个基因的表达盒载体，所述3个基因为：CYP76AD1基因、DODA基因和5GT基因；所述CYP76AD1基因的核苷酸序列包含如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，所述DODA基因的核苷酸序列包含如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述5GT基因的核苷酸序列包含如SEQ IDNO.3所示的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的植物启动子活性筛选系统，其特征在于，所述表达盒载体包括启动子、基因序列和终止子；所述启动子为35S组成型启动子，所述终止子为NOS终止子。3.如权利要求2所述的植物启动子活性筛选系统，其特征在于，所述表达盒载体包括对照组表达载体和启动子活性待筛选表达载体；其中，所述3个基因均为35S组成型启动子驱动，形成的所述植物表达载体为所述对照组表达载体；所述CYP76AD1基因和所述DODA基因为所述35S组成型启动子驱动，所述5GT基因的启动子为待筛选启动子，形成的所述植物表达载体为所述启动子活性待筛选表达载体。4.如权利要求1
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3任一项所述的植物启动子活性筛选系统的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1、采用Goldengate方法分别构建CYP76AD1基因表达盒，DODA基因表达盒和5GT基因表达盒；步骤2、采用Goldengate法构建对照组表达载体：将步骤1得到的CYP76AD1基因表达盒，DODA基因表达盒和5GT基因表达盒中所述CYP76AD1，DODA和5GT基因采用35S组成型启动子驱动，构建对照组表达载体；步骤3、采用所述Goldengate法构建启动子活性待筛选表达载体：将步骤1得到的CYP76AD1基因表达盒和DODA基因表达盒中所述CYP76AD1和DODA基因采用35S组成型启动子驱动，将步骤1得到的5GT基因表达盒中所述5GT基因采用待筛选启动子驱动，构建启动子活性待筛选表达载体。5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述表达载体均含有Bsa I和Bpi I限制性内切酶的酶切位点。6.如权利要求1
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3任一项所述的植物启动子活性筛选系统在植物启动子活性的筛选中应用，...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈乾，费晨欢，刘雪婷，宋文然，付营，李蒙，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：