一种蛭弧菌饲料及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种蛭弧菌饲料及其制备方法。该蛭弧菌饲料的制备方法是由经过特制培养基培育的大肠埃希氏菌组成，将大肠埃希氏菌接种到所述特制培养基中并将所述特制培养基置于摇床中；所述特制培养基中添加乳酸/功能化乳酸有效促进蛭弧菌的繁殖，进一步改善蛭弧菌的产率。的产率。

【技术实现步骤摘要】
一种蛭弧菌饲料及其制备方法


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种蛭弧菌饲料及其制备方法。

技术介绍

[0002]目前在生产养殖中，主要使用化学制剂，易造成药物残留、污染环境、抑制有益菌群等，进而使得微生物制剂的应用受到广泛关注。
[0003]其中，蛭弧菌是微生物菌剂中被广泛应用的一种。蛭弧菌是一类可以很快侵入宿主细胞并将其裂解的一类细菌，对池塘水体中致病弧菌的抑制具有良好的效果。但是蛭弧菌扩培方法以及活菌计数方法一直阻碍蛭弧菌的应用及发展，目前国内蛭弧菌的扩培方法主要是以大肠杆菌作为宿主菌培养蛭弧菌，造成培养出来的蛭弧菌活力严重下降，特异性识别弧菌能力差，产生的噬菌斑数较少，菌数不够稳定，应用效果大打折扣。
[0004]中国专利201610513338.6公开了一中噬菌蛭弧菌制剂的生产方法中采用、浑球红假单胞菌P4或沼泽红假单胞菌101，作为宿主，提高了噬菌蛭弧菌的裂解活性和稳定性，提高了防治病害效果。但是以经过筛选纯化后的单一的、或人工复配的多株纯化后的蛭弧菌来生产，其工艺较为繁复，批次生产周期长、成本大，同时产生的噬菌斑数较少，菌数不够稳定。

技术实现思路

[0005]针对上述现有技术中存在的不足，本专利技术提供了一种饲料的制备方法。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：
[0007]一种饲料的制备方法，包括以下步骤：
⑴
将大肠埃希氏菌接种到所述特制培养基中；
⑵
将所述特制培养基置于摇床中；
⑶
在恒温条件下将所述大肠埃希氏菌培养增殖。
[0008]所述步骤
⑴
中的接种温度为35
‑
38℃；所述步骤
⑶
中的培养温度为35
‑
38℃；所述步骤
⑴
中所述大肠埃希氏菌的接种量为106‑
107CFU/mL；所述步骤
⑵
中摇床的转速为60
‑
90rpm；所述步骤
⑶
中当大肠埃希氏菌的浓度达到109‑
10
10
CFU/mL时完成培养。
[0009]所述特制培养基的制备方法为：在24
‑
27℃，将30
‑
36重量份鱼糜、30
‑
38重量份氯化钠、0.2
‑
4.2重量份磷酸氢二钾、0.1
‑
1.7重量份磷酸二氢钾、850
‑
1200重量份蒸馏水、2.5
‑
3.5重量份菇提取物混合并以180
‑
300rpm的转速搅拌15
‑
25min，得到所述特制培养基。
[0010]所述菇提取物的制备方法为：将新鲜的菇以质量比(0.8
‑
1.3):(2.7
‑
3.5)浸泡在
‑
147℃、3.4
‑
3.6MPa条件的液氮中3.5
‑
5h，浸泡完毕后取出所述菇；将经过液氮处理的菇粉碎后过50
‑
80目筛，再加入到蒸馏水中，在82
‑
90℃以540
‑
660rpm的转速搅拌1.5
‑
3h，在搅拌的同时采用功率360
‑
450w、频率37
‑
43kHz的超声波处理，搅拌完毕后趁热过滤并收集滤液，所述菇和蒸馏水的质量比为(0.8
‑
1.3):(8
‑
12)；在3
‑
5℃以540
‑
660rpm的转速搅拌8
‑
12h所述滤液，收集析出物；将所述析出物、透明质酸、一乙酸甘油酯、油茶籽油、绿豆淀粉、持效剂按质量比(13
‑
17):(18
‑
21):(7
‑
13):(47
‑
53):(12
‑
17):(3
‑
7)混合并在23
‑
27℃以360
‑
480rpm的转速搅拌0.5
‑
2h得到所述菇提取物；所述菇由蟹味菇、鸡腿菇、平菇、杏鲍菇按质
量比(1
‑
5):(1
‑
5):(1
‑
5):(1
‑
5)组成；所述持效剂为鹰嘴豆提取物、虾壳提取物按质量比(1
‑
3):(1
‑
3)的混合物。
[0011]所述鹰嘴豆提取物的制备方法为：将鹰嘴豆粉碎后过10
‑
30目筛，采用CO2临界萃取，萃取压力24
‑
26MPa，萃取温度48
‑
53℃，解析压力4
‑
6MPa，解析温度12
‑
16℃，CO2流量为4
‑
5L/h，萃取时间3
‑
5h；萃取完毕后收集解析釜中的萃取物，在24
‑
26℃将所述萃取物和蒸馏水、田菁胶、β
‑
生育三烯酚、抗坏血酸葡糖苷、磷酸二氢钾混合并以120
‑
240rpm的转速搅拌25
‑
45min，得到所述鹰嘴豆提取物；所述萃取物、蒸馏水、田菁胶、β
‑
生育三烯酚、抗坏血酸葡糖苷、磷酸二氢钾的质量比为(85
‑
120):(75
‑
125):(18
‑
22):(0.8
‑
1.3):(1.2
‑
1.7):(0.9
‑
1.3)。
[0012]所述虾壳提取物的制备方法为：将虾壳粉碎后过10
‑
20目筛，加入到橄榄油中并在61
‑
64℃以540
‑
660rpm的转速搅拌4
‑
6h，过滤后得到油相物；所述虾壳、橄榄油的质量比为(0.8
‑
1.3):(3.7
‑
4.8)；将所述油相物、3
‑
O
‑
乙基抗坏血酸醚、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯混合并在24
‑
27℃以120
‑
300rpm的转速搅拌25
‑
40min得到所述虾壳提取物；所述油相物、3
‑
O
‑
乙基抗坏血酸醚、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯的质量比为(90
‑
110):(0.8
‑
1.3):(1.5
‑
2.5)。
[0013]鹰嘴豆提取物中含有抗氧化多肽等抗氧化物质，虾壳提取物中含有虾青素等抗氧化物质，可以对菇的析出物中各种菇类总黄酮、菇类多糖等活性成分起到有效的保护作用，从而增长菇提取物中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛭弧菌饲料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
⑴
将大肠埃希氏菌接种到特制培养基中；
⑵
将所述特制培养基置于摇床中；
⑶
在恒温条件下将所述大肠埃希氏菌培养增殖。所述特制培养基的制备方法为：将鱼糜、氯化钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、蒸馏水、菇提取物、乳酸/功能化乳酸混合并搅拌，得到所述特制培养基。2.如权利要求1所述蛭弧菌饲料的制备方法，其特征在于，所述功能化乳酸的制备方法，包括以下步骤：将羧甲基纤维素、乳酸、甘露醇、十六烷加入蒸馏水中混合均匀，加热反应，得到混合液；将吐温60、六聚甘油单油酸酯加入混合液中，然后再加入正丁醇，加热反应，反应结束后，抽滤取沉淀、洗涤、冷冻干燥，得到改性乳酸；将改性乳酸、牛胰腺RNaseA加入磷酸盐缓冲液中混合均匀，置于振荡器中振荡，过滤取沉淀、洗涤至中性，得到功能化乳酸，最后将功能化乳酸置于磷酸盐缓冲液中，储存备用。3.如权利要求1所述蛭弧菌饲料的制备方法，其特征在于，所述菇提取物的制备方法为：将新鲜的菇浸泡在液氮中，浸泡完毕后取出所述菇；将经过液氮处理的菇粉碎后过筛，再加入到蒸馏水中搅拌，在搅拌的同时采用超声波处理，搅拌完毕后趁热过滤并收集滤液；搅拌所述滤液，收集析出物；将所述析出物、透明质酸、一乙酸甘油酯、油茶籽油、绿豆淀粉、持效剂混合并搅拌得到所述菇提取物。4.如权利要求3所述蛭弧菌饲料的制备方法，其特征在于：所述菇由蟹味菇、鸡腿菇、平菇、杏鲍菇中的一种或者多种组成。5.如权利要求3所述蛭弧菌饲料的制备方法，其特征在于：所述持效剂为鹰嘴豆...

【专利技术属性】
技术研发人员：林江一，
申请(专利权)人：上海乾界生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：