一种可抑制黑色素的siRNA分子及其应用制造技术

本发明专利技术涉及化妆品技术领域，尤其涉及一种可抑制黑色素的siRNA分子及其应用。siRNA分子包括：如SEQ ID NO.1所示的正义链和如SEQ ID NO.2所示的反义链；其中至少一条单链上含有硫代磷酸化学修饰或2'甲氧基修饰。本发明专利技术的siRNA分子能够有效靶向降低MITF基因的表达，从而抑制黑色素的合成，同时能够兼顾较好的细胞增殖能力，具有应用于美白产品的重大推广价值。值。

【技术实现步骤摘要】
一种可抑制黑色素的siRNA分子及其应用


[0001]本专利技术涉及化妆品
，尤其涉及一种可抑制黑色素的siRNA分子及其应用。

技术介绍

[0002]随着人们生活理念的更新和进步以及生活水平的不断提高，人们对于化妆品的消费追求也在不断的提升。
[0003]随着科学的进步，证实人类皮肤的颜色的深浅主要取决于黑色素细胞所产生的黑色素的数量和分布。同时，黑色素的形成过程是由多种信号分子共同参与形成的复杂调控过程，而这个过程离不开酪氨酸酶的参与。小眼球相关转录因子(microphthalmia
‑
associated transcription factor,MITF)基因作为一种调控酪氨酸酶表达的关键因子，其活性可以直接影响黑色素的形成。目前，市场上有着众多的美白产品，多是酪氨酸酶的抑制剂，如曲酸、苯二酚等；但是它们往往具有刺激性和细胞毒性，从而损害角质层甚至危害人体健康。
[0004]近些年来出现的小干扰RNA(siRNA)技术，能够与相应的特异mRNA结合，并沉默该mRNA，从而降低基因的表达。但是现有技术中采用小干扰RNA技术对黑色素相关基因进行基因沉默时，对细胞的增殖能力也会产生较大程度的抑制。
[0005]如何提供一种能够有效降低酪氨酸酶表达水平，降低黑色素形成的小干扰RNA分子，同时能够兼顾较好的细胞增殖能力，以实现美白效果，成为本领域亟待解决的技术难题。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了一种siRNA分子，包括：如SEQ ID NO.1所示的正义链和如SEQ ID NO.2所示的反义链；
[0007]其中至少一条单链上含有硫代磷酸化学修饰或2'甲氧基修饰。
[0008]本专利技术发现，采用硫代磷酸化学修饰或2'甲氧基修饰手段对上述siRNA分子进行修饰，能够抵抗核酸酶的降解，增加siRNA分子的疏水性及对某些蛋白质的亲和力，从而显著延长半衰期，有效降低酪氨酸酶表达水平，降低黑色素形成，同时能够较好的兼顾细胞的增殖能力。
[0009]优选地，所述正义链中，第1～3位碱基之间以及第17～20位碱基之间的磷酸酯基为硫代磷酸酯基；
[0010]所述反义链中，第18～20位碱基之间的磷酸酯基为硫代磷酸酯基。
[0011]优选地，所述正义链中，第1～2位的碱基以及第17～19位的碱基为2'甲氧基修饰的碱基；
[0012]所述反义链中，第18～19位的碱基为2'甲氧基修饰的碱基。
[0013]本专利技术进一步发现，在上述位点进行硫代磷酸酯修饰或2'甲氧基修饰，能够使得siRNA分子的稳定性大幅提升，从而显著提升对黑色素合成的抑制效果，同时上述修饰方式
能够进一步降低siRNA分子对细胞增殖能力的影响。
[0014]进一步，本专利技术提供了一种组合物，其中含有上述任一实施方式中的siRNA分子。
[0015]优选地，本专利技术提供了一种药物组合物，其含有上述任一实施方式中的siRNA分子以及药学上可接受的辅料。
[0016]进一步，本专利技术还提供了上述任一实施方式中的siRNA分子、组合物或药物组合物在抑制小眼球相关转录因子基因表达中的应用。
[0017]进一步，本专利技术还提供了上述任一实施方式中的siRNA分子、组合物或药物组合物在降低酪氨酸酶表达水平中的应用。
[0018]进一步，本专利技术还提供了上述任一实施方式中的siRNA分子、组合物或药物组合物在抑制黑色素合成中的应用。
[0019]进一步，本专利技术还提供了上述任一实施方式中的siRNA分子、组合物或药物组合物在制备治疗黑色素瘤药物中的应用。
[0020]进一步，本专利技术还提供了上述任一实施方式中的siRNA分子或组合物在化妆品领域中的应用。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0022]本专利技术的siRNA分子能够有效靶向降低MITF基因的表达，从而抑制黑色素的合成，同时能够降低siRNA分子对细胞增殖能力的影响，具有应用于美白产品的重大推广价值。
附图说明
[0023]图1是本专利技术提供的h
‑
MITF基因表达水平检测结果图。
[0024]图2是本专利技术提供的黑色素检测结果图。
具体实施方式
[0025]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0026]实施例中未注明具体技术或条件者，均为常规方法或者按照本领域的文献所描述的技术或条件进行，或者按照产品说明书进行。所用试剂和仪器等未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
[0027]下述所提到的A375细胞系购自中科院典藏细胞库，使用含10％FBS(BI)的DMEM培养基(SIGMA)(含1.5mM L
‑
Glutamine，100U/ml penicillin,100μg/ml Streptomycin)进行常规培养。下述转染试剂为GP
‑
transfect
‑
Mate(GenePharma)。下述多功能酶标仪为Tecan M1000。
[0028]无修饰的siRNA分子是以小眼球相关转录因子(microphthalmia
‑
associated transcription factor,MITF)基因相对保守的区域为模板，选取23bp的核苷酸序列设计的，由上海吉玛制药技术有限公司合成，包括：如SEQ ID NO.1所示的正义链和如SEQ ID NO.2所示的反义链，命名为siMITF
‑
4；
[0029]SEQ ID NO.1：5
′‑
GCAGUACCUUUCUACCACUTT
‑3′
[0030]SEQ ID NO.2：5
′‑
AGUGGUAGAAAGGUACUGCTT
‑3′
。
[0031]对合成的小干扰RNA序列进行硫代磷酸化学修饰，即在*号标记前后2个碱基之间进行硫代磷酸化学修饰，正义链为：
[0032]5′‑
G*C*AGUACCUUUCUACCA*C*U*TT
‑3′
；反义链为：5
′‑
AGUGGUAGAAAGGUACUG*C*TT
‑3′
，获得硫代磷酸化学修饰的siRNA分子，命名为siMITF
‑
1。
[0033]对合成的小干扰RNA序列进行2'甲氧基修饰，即在m号标记前面的碱基进行二甲氧修饰，正义链为：5
′‑
GmCmAGUACCUUUCUACCAmCmUmTT
‑3′
；反义链为：5
′‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种siRNA分子，其特征在于，包括：如SEQ ID NO.1所示的正义链和如SEQ ID NO.2所示的反义链；其中至少一条单链上含有硫代磷酸化学修饰或2'甲氧基修饰。2.根据权利要求1所述的siRNA分子，其特征在于，所述正义链中，第1～3位碱基之间以及第17～20位碱基之间的磷酸酯基为硫代磷酸酯基；所述反义链中，第18～20位碱基之间的磷酸酯基为硫代磷酸酯基。3.根据权利要求1所述的siRNA分子，其特征在于，所述正义链中，第1～2位的碱基以及第17～19位的碱基为2'甲氧基修饰的碱基；所述反义链中，第18～19位的碱基为2'甲氧基修饰的碱基。4.一种组合物，其特征在于，其含有权利要求1～3中任一项所述的siRNA分子。5.一种药物组合物，其特征在于，其含有权利要求1～3中任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：王昉，陈昊伟，
申请(专利权)人：丁妈给力北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：