一种提高人类免疫缺陷病毒HIV1/2尿液胶体金层析检测试剂盒灵敏度的方法技术

本发明专利技术属于胶体金层析试纸条检测灵敏度的技术领域，具体涉及一种提高人类免疫缺陷病毒HIV1/2尿液胶体金层析检测试剂盒灵敏度的方法。本发明专利技术基于侧向胶体金免疫层析原理，以乙醇、异丙醇及磷酸盐缓冲液作为信号增强试剂的配方组分，配制出信号增强试剂；然后，将其与人类免疫缺陷病毒的抗原或抗体按比例混匀包被于层析膜上，并组装成免疫层析试纸条。本发明专利技术的有益效果在于，信号增强试剂的使用，突出了检测线与背景的差异，使得检测线清晰可见，大大降低了HIV病毒的最低检测限；此外，本发明专利技术处理的试纸条用于HIV病毒检测时，直接将样品滴于试纸条加样孔即可，无需额外添加其他助剂，操作过程简单，对进一步改善胶体金免疫层析试纸条的灵敏度有重要意义。析试纸条的灵敏度有重要意义。析试纸条的灵敏度有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种提高人类免疫缺陷病毒HIV1/2尿液胶体金层析检测试剂盒灵敏度的方法


[0001]本专利技术属于层析检测试剂盒灵敏度检测的
，具体涉及一种提高人类免疫缺陷病毒HIV1/2尿液胶体金层析检测试剂盒灵敏度的方法。

技术介绍

[0002]人类免疫缺陷病毒（HIV）是一种感染人类免疫系统细胞，主要是T淋巴细胞的慢性病毒。目前，由人类免疫缺陷病毒所引起的人类免疫缺陷病症，在世界范围内已呈现出由高危人群向一般人群扩散的趋势，因此，对HIV病毒的常规检测和筛查已成为公共卫生领域的重要工作，而采用有效的指标和方法实现对HIV病毒的早期诊断和病情监测对于HIV病毒的传播控制、判断预后、指导用药具有重要意义。
[0003]现阶段，作为诊断手段使用的HIV病毒的检测方法，主要是通过检测受试者体液中的病毒抗原或抗体实现的，其中，较为常见的检测方法包括Western blot(WB)检测法与免疫荧光
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试验(IFA)法，但这些检测方法的操作过程需要昂贵的检测仪器和有经验的专业人员操作，检测的成本较高，难度较大，所以，借助免疫层析试纸条实现对HIV病毒的检测成为当前HIV自测和初步筛查检测的重要方法。
[0004]免疫层析试纸条检测技术是一种广泛应用于食品、农产品、防疫等领域的检测技术，特别是，胶体金免疫层析试纸条，其成本低，操作方便，无需特殊设备和专业人员，能够适用于现场的快速检测，因而被广泛应用于各种检测领域。
[0005]然而，胶体金的光学信号有限，所以，胶体金免疫层析试纸条的检测灵敏度较低，推广受限制。在现有技术中，可以采用多种方法提高胶体金免疫层析试纸检测的灵敏度，主要包括：研发信号放大系统、浓缩样品等，但是，这些方法对于其灵敏度的提高程度有限。
[0006]如专利CN109342715A中通过使胶体金颗粒表面形成镀银颗粒来增强胶体金信号的灵敏性；专利CN101934380A中采用氯金酸和抗坏血酸作为增敏剂以提高检测灵敏度。
[0007]以上的技术中均采用配制增敏剂的方法对胶体金层析试纸条进行增敏处理，但其披露的这些增敏剂成本较高，且操作过程复杂繁琐，不利于推广，甚至，即便是经增敏处理后，试纸条的检测灵敏度提高并不显著。
[0008]另外，专利CN201210507386中，披露了一种在检测样品添加后再滴加透明化试剂的方法，虽然有一定效果，但是样品检测的操作过程繁琐，耗时长，且其透明化试剂的原料为甲醇和苯甲醇，毒性较大，成本较高。
[0009]除此之外，当然也可以借助胶体金免疫层析试纸条读条仪等设备实现对试纸检测条灵敏度的提高，但是其在提高检测灵敏度的同时，也提高了检测成本，且需要专业人员操作，况且，这种结合光学的检测技术易受试纸条本身背景的干扰，适用场景有限。
[0010]此外，到目前为止，并没有关于胶体金免疫层析试纸条应用于人类免疫缺陷病毒HIV1/2尿液检测方面提高灵敏度的研究。
[0011]因此，需要开发一种用于提高人类免疫缺陷病毒HIV1/2尿液检测胶体金免疫层析
试纸条灵敏度的方法，该方法不增加层析试纸条检测的操作过程，试纸条整体的制备成本控制在较低水平，同时能够极大地提高检测的灵敏度。

技术实现思路

[0012]为了解决上述的技术问题，本专利技术针对人类免疫缺陷病毒（HIV1/2）尿液检测的胶体金层析检测方法，提供了一种提高胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的方法。
[0013]本专利技术所提供的方法，具体是通过采用信号增强试剂，即乙醇、异丙醇及磷酸盐缓冲液（PBS缓冲液）混合体系，来突出检测线信号以及扩大检测线信号与背景的差别化实现的。
[0014]胶体金免疫层析试纸，正是借助胶体金颗粒具有高电子密度的特性，可以吸附目标抗体或抗原形成金标复合物，在金标复合物与抗原或捕获抗体的结合处，显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些胶体金标记物在相应的抗体或抗原处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点或线条，但是这些斑点或线条只有金标复合物大量聚集时才能较为明显可见，一旦待检测病毒的含量较低，仅肉眼是无法识别出来的，因此也就会出现“假阴性”的现象。
[0015]而本专利技术通过添加信号增强试剂，提高检测线上金标复合物的聚集程度以增强检测线信号，同时能够使层析膜上T线附近的背景变弱，增加T线信号与背景之间的对比度，给人们呈现出明显的视觉差，从而提高胶体金免疫层析试纸对HIV1/2病毒尿液检测的灵敏度的。
[0016]本专利技术提高人类免疫缺陷病毒HIV1/2尿液胶体金层析检测试剂盒灵敏度的方法，具体包括以下的技术方案：（1）配制信号增强试剂；（2）试纸条处理：将步骤（1）中配制好的信号增强试剂与人类免疫缺陷病毒HIV1/2的抗原或抗体按比例混匀，包被于层析膜上；（3）层析试纸条组装，将步骤（2）中处理好的层析膜组装成免疫层析试纸条。
[0017]其中，上述步骤（1）中，所述的信号增强试剂是采用醇类物质与磷酸盐缓冲溶液来配制的。
[0018]优选的，醇类物质选自乙醇、异丙醇中的至少一种。
[0019]优选的，配制步骤（1）中的信号增强试剂所采用的醇类物质为乙醇及异丙醇。
[0020]优选的，步骤（1）中所述的信号增强试剂，采用乙醇、异丙醇及磷酸盐缓冲液来配制。
[0021]优选的，步骤（1）中所述的信号增强试剂，采用乙醇、异丙醇及磷酸盐缓冲液，三者的体积比依次为0.3～3：0.3～5：99.4～92来配制。
[0022]优选的，步骤（1）中的信号增强试剂采用乙醇、异丙醇及磷酸盐缓冲液来配制，其中，所采用的磷酸盐缓冲溶液的浓度为5～50 mM，pH为6～9。
[0023]上述步骤（2）的试纸条处理过程中，所述的信号增强试剂与人类免疫缺陷病毒HIV1/2的抗原或抗体的比例为12~1：1。
[0024]更具体的，本专利技术所提供的一种提高人类免疫缺陷病毒HIV1/2尿液胶体金层析检测试剂盒灵敏度的方法，包括以下步骤：（1）配制信号增强试剂：选取乙醇、异丙醇与pH为6~9、浓度为5～50 mM的磷酸盐缓
冲溶液作为配方组分来配制信号增强试剂，其中乙醇、异丙醇与磷酸缓冲液的体积比依次为0.3～3：0.3～5：99.4～92；（2）试纸条处理：将步骤（1）中配制好的信号增强试剂与HIV1/2的抗原或抗体按12~1：1比例混匀，包被于层析膜上；（3）层析试纸条组装，将步骤（2）中处理好的层析膜组装成免疫层析试纸条，并将其应用于人类免疫缺陷病毒的尿液检测。
[0025]本专利技术的有益效果在于：（1）本专利技术所提供了一种提高胶体金免疫层析试纸条检测灵敏度的方法，经本专利技术的方法处理后所获得的试纸条，应用于人类免疫缺陷病毒HIV1/2病毒的尿液检测过程中，检测线与质控线的颜色均可加深，且两条线与周围的对比效果更显著，进一步降低了层析试纸条对于HIV病毒的检测限，即便是将抗体稀释到万分之一时，测出的结果也很准确，灵敏度得到很大程度的提高；（2）本专利技术中的信号增强试剂，以乙醇，异丙醇和浓度为5～50 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高人类免疫缺陷病毒HIV1/2尿液胶体金层析检测试剂盒灵敏度的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）配制信号增强试剂；（2）试纸条处理：将步骤（1）中配制好的信号增强试剂与人类免疫缺陷病毒HIV1/2的抗原或抗体按比例混匀，包被于层析膜上；（3）层析试纸条组装：将步骤（2）中处理好的层析膜组装成免疫层析试纸条。2.如权利要求1所述的一种提高人类免疫缺陷病毒HIV1/2尿液胶体金层析检测试剂盒灵敏度的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的信号增强试剂，采用醇类物质及磷酸盐缓冲溶液来配制；其中，醇类物质选自乙醇、异丙醇中的至少一种。3.如权利要求1所述的一种提高人类免疫缺陷病毒HIV1/2尿液胶体金层析检测试剂盒灵敏度的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的信号增强试剂，是采用乙醇、异丙醇及磷酸盐缓冲液来配制的。4.如权利要求1所述的一种提高人类免疫缺陷病毒HIV1/2尿液胶体金层析检测试剂盒灵敏度的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的信号增强试剂，是采用乙醇、异丙醇及磷酸盐缓冲液来配制的，乙醇、异丙醇及磷酸盐缓冲液的体积比依次为0.3～3：0.3～5：99.4～92的比例配制的。5.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：王居亮，徐杰，
申请(专利权)人：济南玖方生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：