NK细胞制备方法及其用途技术

本公开提供了治疗受试者中的前列腺癌的方法，其包括向受试者施用自然杀伤(NK)细胞的步骤。本公开还提供了NK细胞在制备治疗受试者中的前列腺癌的药物中的用途。在另一方面，本公开提供了预防受试者中的前列腺癌术后复发的方法，其包括向受试者施用NK细胞的步骤。还提供了NK细胞在制备用于预防受试者中的前列腺癌术后复发的药物中的用途。本公开还提供了制备NK细胞的方法。制备NK细胞的方法。

【技术实现步骤摘要】
NK细胞制备方法及其用途


[0001]本公开涉及细胞生物学和细胞治疗领域，具体涉及NK细胞的制备方法及其用途，例如在治疗前列腺癌中的用途。

技术介绍

[0002]前列腺癌是全球第二大最常见的癌症，也是全球男性癌症死亡的第五大原因。尽管具有局部前列腺癌的患者通常接受根治性前列腺切除术(RP)或放疗，但多达40％的接受RP的受试者和多达50％的接受放疗的患者会出现疾病复发。因此，许多患者将发展为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)，其至今仍然不可治愈。在过去十年中，免疫检查点抑制剂(ICI)改变了几种恶性肿瘤的治疗格局。不幸的是，最近评估ICI在前列腺癌和CRPC中作用的试验显示出令人失望的结果。迄今为止，只有一种抗PD
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1药物派姆单抗获批用于具有高卫星不稳定性(MSI
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H)的mCRPC患者亚组。ICI对前列腺癌缺乏疗效可能是由于免疫上“冷”肿瘤微环境(TME)造成的，其显著特点为T细胞浸润少，程序性死亡配体
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1(PD
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L1)表达低，新抗原表达低且HLA I类分子表达丧失或减少。
[0003]与CD8
+
T细胞不同，自然杀伤(NK)细胞在发育过程中不经历体细胞DNA重排和受体亲和力筛选，而是通过一系列种系列抑制性和激活性受体来获取和调节其功能，它们是T细胞介导的细胞毒性作用的重要补充细胞。然而，获得用于过继细胞疗法的NK细胞受到细胞数量和质量的限制。离体扩增NK细胞是开发NK细胞疗法的最关键步骤。人外周血单个核细胞(PBMC)为临床应用NK细胞的来源之一，并且已有使用NK细胞扩增方案来开发NK细胞疗法。滋养层细胞的使用一直是扩增NK细胞的基本方法。然而，使用滋养层细胞可能会引发传染病问题和制药产品制造中的监管障碍。

技术实现思路

[0004]本专利技术人发现，NK细胞输注是用于治疗前列腺癌例如去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的有效免疫疗法。CRPC通常具有HLA I类分子表达低或丧失HLA I分子表达的特性，其很难被T细胞所识别，代表了免疫上“冷”肿瘤微环境(TME)。NK细胞具有将上述“冷”TME转为“热”TME的多种优势，包括：1.输注的NK细胞能够到达前列腺癌肿瘤部位，并直接裂解前列腺癌细胞；2.NK细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素
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γ(IFN
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γ)等炎性细胞因子来募集CD8
+
T细胞并促进其细胞毒性；3.肿瘤部位的NK细胞通过释放细胞因子Flt3配体、趋化因子CCL5和XCL1来募集树突状细胞(DC)，从而可以有效地摄取肿瘤细胞抗原并引发CD8
+
T细胞。
[0005]在本公开中，还开发了一种稳健而高效的制造系统，在不使用滋养层细胞的情况下使用新的细胞因子组合来扩增大量且有效的NK细胞。在CRPC的临床前小鼠模型中，本公开获得的NK细胞显示出对前列腺癌细胞系的细胞毒性并控制前列腺癌的生长的特性。
[0006]相应地，在本公开的第一方面，提供了一种治疗受试者中前列腺癌的方法，所述方法包括对所述受试者施用自然杀伤(NK)细胞的步骤。
[0007]在第二方面，本公开提供了NK细胞在制备用于治疗受试者中的前列腺癌的药物中
的用途。
[0008]在第三方面，本公开提供了一种预防受试者中的前列腺癌术后复发的方法，所述方法包括对所述受试者施用NK细胞的步骤。
[0009]在第四方面，本公开提供了NK细胞在制备用于预防受试者中的前列腺癌术后复发的药物中的用途。
[0010]在第三方面和第四方面的一些实施方案中，所述受试者在术前已经使用NK细胞治疗。
[0011]在本公开的上述方面的方法和用途的一些实施方案中，前列腺癌可以是难治性前列腺癌。在一些实施方案中，前列腺癌可以是雄激素非依赖性前列腺癌或去势抵抗性前列腺癌。
[0012]在本公开的上述方面的方法和用途的一些实施方案中，所述NK细胞可以通过从外周血单个核细胞(PBMC)诱导产生，例如新鲜分离的PBMC或冷冻保存的PBMC。在一些实施方案中，所述PBMC分离自所述受试者。在另一些实施方案中，所述PBMC分离自与所述受试者不同的另一供体。
[0013]在一些实施方案中，NK细胞通过在包含选自下组的一种或多种细胞因子的培养基中培养PMBC诱导产生：白介素(IL)
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2和IL
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15。在一些实施方案中，培养基包含IL
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2和IL
‑
15两者。
[0014]在一些实施方案中，PBMC在所述培养基中培养之前预先使用抗CD16单克隆抗体激活，例如通过在包被有抗CD16单克隆抗体的培养容器中进行预培养来激活。
[0015]在一些实施方案中，培养持续1
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4周，例如2
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3周。
[0016]在一些实施方案中，在所述PBMC经诱导后产生的细胞群体中，NK细胞(通过CD3
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CD56
+
表征)的比例为75％或更高，例如80％或更高，例如85％或更高，例如90％或更高。
[0017]在本公开第一方面和第二方面的一些实施方案中，所述方法包括以两个或更多个治疗周期通过每天对所述受试者注射NK细胞进行治疗，或者所述药物配制成以两个或更多个治疗周期通过每天对所述受试者注射NK细胞进行施用，在两个治疗周期之间是不对所述受试者注射NK细胞的间歇期。
[0018]在一些实施方案中，两个或更多个治疗周期中的每一个持续2
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5天，例如3
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4天，例如3天。在一些实施方案中，间歇期持续1
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5天，例如2
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3天，例如2天。
[0019]在本公开的第三方面和第四方面的一些实施方案中，在术后通过每天对所述受试者注射NK细胞预防前列腺癌术后复发，持续2
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5天，例如3
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4天，例如3天。
[0020]在本公开的上述方面的一些实施方案中，所述方法还包括施用第二治疗剂，或者所述药物还包含第二治疗剂。在一些实施方案中，第二治疗剂选自免疫调节剂、放射性化合物、酶、化学治疗剂和细胞毒素。
[0021]在一些实施方案中，第二治疗剂为雄激素受体信号传导抑制剂。在一些实施方案中，第二治疗剂为顺铂、卡铂、紫杉醇、吉西他滨、多柔比星、喜树碱、托泊替康或其任意组合。在一些实施方案中，第二治疗剂为抗PD
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L1剂或抗PD1剂。
[0022]在一些实施方案中，所述第二治疗剂与NK细胞同时施用。在一些实施方案中，所述第二治疗剂与NK细胞依次施用。
[0023]在第五方面，本公开提供了一种制备NK细胞的方法，所述方法包括：
[0024]a.在初始培养中预激活PBMC；以及
[0025]b.将PBMC转移至诱导培养基中进行培养，以诱导产生NK细胞，
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.自然杀伤(NK)细胞在制备治疗受试者中的前列腺癌的药物中的用途。2.NK细胞在制备用于预防受试者中的前列腺癌术后复发的药物中的用途。3.权利要求2的用途，其中所述受试者在术前已经使用NK细胞治疗。4.权利要求1
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3中任一项的用途，其中所述前列腺癌为难治性前列腺癌。5.权利要求1
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3中任一项的用途，其中所述前列腺癌为雄激素非依赖性前列腺癌或去势抵抗性前列腺癌。6.权利要求1
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5中任一项的用途，其中所述NK细胞通过从外周血单个核细胞(PBMC)诱导产生。7.权利要求6的用途，其中所述PBMC分离自所述受试者。8.权利要求6的用途，其中所述PBMC分离自与所述受试者不同的另一供体。9.权利要求6
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8中任一项的用途，其中所述NK细胞通过在包含选自下组的一种或多种细胞因子的培养基中培养PMBC诱导产生：白介素(IL)
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2和IL
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15。10.权利要求9的用途，其中所述培养基包含IL
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2和IL
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15。11.权利要求9或10的用途，其中所述PBMC在所述培养基中培养之...

【专利技术属性】
技术研发人员：常德华，董雪姣，刘东华，王静，马建林，刘帅，
申请(专利权)人：京东方科技集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：