具有增强的活性的自然杀伤细胞制造技术

经工程化的免疫细胞，任选地自然杀伤(NK)细胞，其包括内源去整合素和金属蛋白酶17(ADAM 17)基因的失活突变。ADAM17缺陷型免疫细胞，其由干细胞，任选地诱导多能干细胞(iPSC)产生，其具有增强的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。药物组合物，其包括所述经工程化的免疫细胞。提供了用于制备所述经工程化的免疫细胞和所述药物组合物的方法以及使用方法。胞和所述药物组合物的方法以及使用方法。胞和所述药物组合物的方法以及使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有增强的活性的自然杀伤细胞
[0001]相关申请的交叉参考
[0002]本申请要求于2020年10月27日提交的美国临时申请第63/105,978号的优先权权益，所述美国临时申请通过引用并入本文。
[0003]政府赞助
[0004]本专利技术是根据国立卫生研究院(National Institutes of Health)授予的授权第CA203348号在政府支持下进行的。政府拥有本专利技术的某些权利。


[0005]本专利技术总体上涉及具有增强的活性的自然杀伤(NK)细胞。NK细胞可以衍生自干细胞。根据本专利技术的以下详细描述，本专利技术的其它方面和优点将变得显而易见。

技术介绍

[0006]过继性细胞疗法作为用于治疗癌症的有前途的新方法正迅速引起人们的关注。特别是，嵌合抗原受体(CAR)T细胞，即用于治疗最近在2017年批准的癌症的唯一一种美国F.D.A.批准的基于淋巴细胞的过继性癌细胞疗法，在治疗难治性B细胞恶性肿瘤方面已显示出显著功效。CAR
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T细胞疗法的成功为更有效的过继性细胞疗法选项的开发带来了乐观情绪。目前批准的CAR
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T治疗方案依赖于通过白细胞单采从原患者中收获的体外修饰和扩增的T细胞的自体移植。这一过程需要3
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4周，并且从每个个体患者收获的T细胞的质量方面的供体差异可能广泛影响治疗结果。此外，接受CAR
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T细胞疗法的一些患者经历了潜在致命的副作用，特别是细胞因子释放综合征(CRS)和神经毒性。因此，开发具有明确的一致的质量的可以以最小副作用及时施用于患者的标准化的“现成的(off
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the
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shelf)”细胞疗法产品是高度期望的，并且具有巨大的商业益处。
[0007]在这种背景下，将焦点转向到作为“现成”细胞疗法的合适细胞来源的自然杀伤(NK)细胞。与T细胞不同，NK细胞具有杀伤肿瘤和病毒感染的细胞的天然能力，无需事先抗原启动。此外，NK细胞可以施用于跨不同HLA同种异型的患者，这与需要HLA匹配以避免移植物抗宿主病的T细胞不同。利用同种异体NK细胞的过继性转移的许多试验表明对于具有标准化疗来说难治的急性髓性白血病(AML)的患者完全缓解。另一项最近临床研究表明，使用同种异体表达CAR的NK细胞对淋巴恶性肿瘤的有效治疗，副作用最小。因此，NK细胞具有优于T细胞的许多优势，这使得其能够作为安全、有效、“现成”的过继性细胞疗法产物而用于治疗各种恶性肿瘤。
[0008]除了源自供体外周血(PB)、脐带血(CB)和确立的NK肿瘤细胞系的NK细胞外，由诱导多能干细胞(iPSC)生成的NK细胞是同种异体NK细胞的有前途的来源。最值得注意的是，iPSC更容易进行基因修饰，即基因缺失/突变或过表达，所述基因修饰可以用来增强NK细胞的细胞毒活性，以介导经改进的抗肿瘤活性。相比之下，CB和PB源性NK细胞更难以进行基因操纵，产生了更异质的基因修饰细胞群体，并且供体可变性也可能影响下游细胞疗法功效。人iPSC还在培养中在未分化的状态下无限地生长，并且被开创和提炼为从iPSC中衍生出NK
细胞的方法现在允许以临床规模产iPSC衍生的NK细胞。
[0009]因此，iPSC充当用于生成具有增强的细胞毒性的标准化的基因编辑的且均匀的过继性NK细胞疗法的理想模板。因此，几个知名度高的生物技术和制药公司正在积极开发“现成的”iPSC衍生的NK细胞疗法产品，并且一些已经进入临床试验。用于增强NK细胞介导的细胞毒性的鉴定基因修饰策略是非常活跃的研究领域，具有巨大的商业意义，因为这允许产生用于治疗各种恶性肿瘤的更有效的过继性NK细胞疗法产物。
[0010]因此，NK细胞可以用于过继性细胞疗法，然而其用途通常受到生物学制约限制并且导致功效不佳。因此，对包括所述细胞的组合物和其使用方法的需要尚未得到满足。

技术实现思路

[0011]一方面，本公开提供了一种经工程化的免疫细胞，其包括内源去整合素和金属蛋白酶17(A
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Disintegrin
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And
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Metalloproteinase 17；ADAM17)基因的失活突变。
[0012]在一些实施例中，所述经工程化的免疫细胞为诱导多能干细胞(iPSC)衍生的免疫细胞。在一些实施例中，所述经工程化的免疫细胞为外周血(PB)源性免疫细胞。在一些实施例中，所述经工程化的免疫细胞为脐带血(CB)源性免疫细胞。
[0013]在一些实施例中，所述经工程化的免疫细胞为自然杀伤(NK)细胞。
[0014]在一些实施例中，所述ADAM17失活突变为内源ADAM17基因的敲除。在一些实施例中，所述经工程化的免疫细胞为ADAM17
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免疫细胞。在一些实施例中，所述ADAM17失活突变为内源ADAM17基因的敲低。
[0015]在一些实施例中，所述经工程化的免疫细胞为CD56+、CD94+、NKG2D+、NKp44+和NKp46+。
[0016]在一些实施例中，与未经工程化的免疫细胞相比，在用刺激剂刺激后，经工程化的免疫细胞的CD16a、TNF
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α和CD62L(L
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选择素)的表达增加。
[0017]在一些实施例中，CD16a在经工程化的免疫细胞中的表达在培养中的扩增期间稳定地维持至少约6周的时间段。
[0018]在一些实施例中，所述免疫细胞为人免疫细胞。
[0019]一方面，本公开提供了一种经纯化的细胞组合物，其包括本公开的经工程化的免疫细胞中的一种或多种经工程化的免疫细胞。
[0020]在一些实施例中，经工程化的免疫细胞中的至少约71％在用刺激剂刺激后表达肿瘤坏死因子
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α(TNF
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α)。在一些实施例中，经工程化的免疫细胞中的至少约42％在用刺激剂刺激后表达CD62L(L
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选择素)。
[0021]在一些实施例中，与未经工程化的免疫细胞相比，在与疾病细胞系和对所述疾病细胞系具有特异性的抗体共温育后，经工程化的免疫细胞的CD107a和干扰素γ(IFNγ)的表达增加。
[0022]在一些实施例中，疾病细胞系为B
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淋巴瘤细胞系，并且所述对所述疾病细胞系具有特异性的抗体为抗CD20抗体。在一些实施例中，所述抗CD20抗体为利妥昔单抗(rituximab)。在一些实施例中，所述经工程化的免疫细胞表现出CD107a的表达增加至少约45％。在一些实施例中，所述经工程化的免疫细胞表现出IFNγ的表达增加至少约36％。
[0023]在一些实施例中，所述疾病细胞系为鳞状细胞癌细胞系，并且所述对所述疾病细
胞系具有特异性的抗体为抗EGFR抗体。在一些实施例中，所述抗EGFR抗体为西妥昔单抗(cetuximab)。在一些实施例中，所述经工程化的免疫细胞表现出CD107a的表达增加本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种经工程化的免疫细胞，其包括内源去整合素和金属蛋白酶17(A
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Disintegrin
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And
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Metalloproteinase 17；ADAM17)基因的失活突变。2.根据权利要求1所述的经工程化的免疫细胞，其中所述经工程化的免疫细胞为诱导多能干细胞(iPSC)衍生的免疫细胞。3.根据权利要求1所述的经工程化的免疫细胞，其中所述经工程化的免疫细胞为外周血(PB)源性免疫细胞。4.根据权利要求1所述的经工程化的免疫细胞，其中所述经工程化的免疫细胞为脐带血(CB)源性免疫细胞。5.根据权利要求1至4中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述经工程化的免疫细胞为自然杀伤(NK)细胞。6.根据权利要求1至5中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述ADAM17失活突变为内源ADAM17基因的敲除。7.根据权利要求6所述的经工程化的免疫细胞，其中所述经工程化的免疫细胞为ADAM17
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免疫细胞。8.根据权利要求1至5中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述ADAM17失活突变为内源ADAM17基因的敲低。9.根据权利要求1至8中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述经工程化的免疫细胞为CD56+、CD94+、NKG2D+、NKp44+和NKp46+。10.根据权利要求1至9中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中与未经工程化的免疫细胞相比，在用刺激剂刺激后，所述经工程化的免疫细胞的CD16a、TNF
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α和CD62L(L
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选择素)的表达增加。11.根据权利要求1至10中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中CD16a在所述经工程化的免疫细胞中的表达在培养中的扩增期间稳定地维持至少约6周的时间段。12.根据权利要求1至11中任一项所述的经工程化的免疫细胞，其中所述免疫细胞为人免疫细胞。13.一种经纯化的细胞组合物，其包括根据权利要求1至12中任一项所述的经工程化的免疫细胞中的一种或多种经工程化的免疫细胞。14.根据权利要求13所述的经纯化的细胞组合物，其中经工程化的免疫细胞中的至少约71％在用刺激剂刺激后表达肿瘤坏死因子
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α(TNF
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α)。15.根据权利要求13或14所述的经纯化的细胞组合物，其中经工程化的免疫细胞中的至少约42％在用刺激剂刺激后表达CD62L(L
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选择素)。16.根据权利要求13所述的经纯化的细胞组合物，其中与未经工程化的免疫细胞相比，在与疾病细胞系和对所述疾病细胞系具有特异性的抗体共温育后，所述经工程化的免疫细胞的CD107a和干扰素γ(IFNγ)的表达增加。17.根据权利要求16所述的经纯化的细胞组合物，其中所述疾病细胞系为B
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淋巴瘤细胞系，并且所述对所述疾病细胞系具有特异性的抗体为抗CD20抗体。18.根据权利要求17所述的经纯化的细胞组合物，其中所述抗CD20抗体为利妥昔单抗(rituximab)。19.根据权利要求17或18所述的经纯化的细胞组合物，其中所述经工程化的免疫细胞
表现出CD107a的表达增加至少约45％。20.根据权利要求17或18所述的经纯化的细胞组合物，其中所述经工程化的免疫细胞表现出IFNγ的表达增加至少约36％。21.根据权利要求16所述的经纯化的细胞组合物，其中所述疾病细胞系为鳞状细胞癌细胞系，并且所述对所述疾病细胞系具有特异性的抗体为抗EGFR抗体。22.根据权利要求21所述的经纯化的细胞组合物，其中所述抗EGFR抗体为西妥昔单抗(cetuximab)。23.根据权利要求21或22所述的经纯化的细胞组合物，其中所述经工程化的免疫细胞表现出CD107a的表达增加至少约29％。24.根据权利要求21或22所述的经纯化的细胞组合物，其中所述经工程化的免疫细胞表现出IFN...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：