葡萄酒中花青素的液相色谱-串联质谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种葡萄酒中花青素的液相色谱

【技术实现步骤摘要】
葡萄酒中花青素的液相色谱
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串联质谱检测方法


[0001]本专利技术涉及食品安全检测领域，具体涉及一种葡萄酒中花青素的液相色谱
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串联质谱检测方法。

技术介绍

[0002]花青素是自然界中广泛存在于植物中的水溶性天然色素，属于类黄酮化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。红葡萄酒中的花青素是从红色或黑色葡萄果皮中浸提出来的，通常以单葡糖糖苷、双葡萄糖苷和酰基等衍生物的形式存在。但是，目前还没有一个高效便捷的方法对葡萄酒中花青素进行定性定量分析，检测效率低下，难以有效监控葡萄酒的产品质量。

技术实现思路

[0003]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种葡萄酒中花青素的液相色谱
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串联质谱检测方法，该方法具有前处理简单快速、抗基质干扰强、确证准确、灵敏度高的优点，为葡萄酒中花青素的快速、准确检测提供了可靠的分析方法。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供了一种葡萄酒中花青素的液相色谱
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串联质谱检测方法，包括以下步骤，步骤一，葡萄酒样品用水直接稀释1000倍，过0.22μm微孔滤膜后，供UPLC
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MS/MS测定；
[0005]步骤二，标准曲线的配制，取四种花青素的标准品各10mg，四种花青素分别是矢车菊素
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葡萄糖苷、氯化葡萄糖苷芍药素、飞燕草素葡萄糖苷和氯化锦葵色素
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葡糖苷，用甲醇溶解并转移至100mL容量瓶中，用乙腈定容，制得4种100μg/mL花青素标准储备液；分别取100μg/mL的4种花青素标准储备液0.1mL，分别用甲醇稀释定容至10mL，配制成4种1.0μg/mL的花青素标准工作液；制作校准曲线用工作溶液的制备：从4种花青素标准工作液中各取1、2、5、20、50、100μL，并对应加入979、978、975、960、930、880μL甲醇，制得1、2、5、20、50、100μg/L的系列浓度梯度的4种青花素标准曲线溶液；
[0006]步骤三，待测样品溶液的检测：将步骤一中制备的待测样品溶液和步骤二中制备的基质标准曲线溶液在液相色谱
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串联质谱仪上分别进样，根据基质标准曲线对定量离子进行内标法定量计算，获得待测样品溶液中四种花青素的浓度，继而获得葡萄酒中花青素的含量。
[0007]作为本专利技术的进一步设置，所述步骤三中液相色谱
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串联质谱仪中色谱条件为：色谱柱：Merck ZIC HILIC柱(150
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2.1mm，3.5μm)；流动相：A为乙腈，B为20mmol/L乙酸铵溶液；梯度洗脱程序：0～1min，95％～50％A；1
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10min，50％A；10
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20min，95％A；流速：250μL/min，柱温：30℃，进样量：10μL；
[0008]所述步骤三中液相色谱
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串联质谱仪中质谱条件为：电喷雾离子源：正离子扫描；离子源温度：450℃；电喷雾电压：4500V；雾化气(GS1)压力:344.5kPa；辅助气压力(GS2):275.6kPa；气帘气压力：68.9kPa；碰撞气CAD压力：137.8kPa；监测模式：多反应监测(MRM)，
针对矢车菊素
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葡萄糖苷时，MRM母离子：449.1m/z；MRM子离子287.2m/z；针对氯化葡萄糖苷芍药素时，MRM母离子：463.1m/z；MRM子离子301.2m/z；针对飞燕草素葡萄糖苷时，MRM母离子：465.1m/z；MRM子离子303.1m/z；针对氯化锦葵色素
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葡糖苷时，MRM母离子：493.1m/z；MRM子离子331.2m/z；去簇电压DP：
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60V，碰撞能量CE：
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22eV，
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28eV。
[0009]这样设置的有益效果是，采用上述方案，通过对葡萄酒样品的直接稀释，并将稀释液进液相色谱
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串联质谱进行检测。第一步稀释：先将样品用甲醇进行稀释；第二步进液相色谱
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串联质谱仪分析：将第一步稀释液，经0.22μm微孔滤膜过滤，得到净化的待检液。该净化后的待检液则不会对检测仪器造成污染。其次，本专利技术对于葡萄酒中花青素的定性定量检测分析是通过液相色谱
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串联质谱仪分析。先配置一组阶梯形的标准曲线溶液，然后将标准曲线溶液和待检液在液相色谱
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串联质谱仪上分别进样。待检液中出现的色谱峰保留时间与标准工作溶液一致，允许偏差小于
±
2.5％，该色谱峰所对应的质谱定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，而且相对丰度偏差不超过规定，则可确定该待检液中花青素含量。另外，在质谱定量分析中，采用内标法，内标法是将一定量的同位素标记物质作内标物，加入到准确称量的试样中，根据被测试样和内标物的质量比及其相应的色谱峰面积之比，来计算被测组分的含量。由于内标法是通过测量内标物及被测组分的峰面积的相对值来进行计算的，因而在一定程度上消除了操作条件等的变化所引起的误差，其测定结果较为准确。本方法直接对葡萄酒样品用甲醇稀释、溶剂使用量少、重现性好、提取效率高、更安全的特点。
附图说明
[0010]图1为本专利技术具体实施例中矢车菊素
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葡萄糖苷的化学结构式；
[0011]图2为本专利技术具体实施例中氯化葡萄糖苷芍药素的化学结构式；
[0012]图3为本专利技术具体实施例中飞燕草素葡萄糖苷的化学结构式；
[0013]图4为本专利技术具体实施例中氯化锦葵色素
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葡糖苷的化学结构式；
[0014]图5为本专利技术具体实施例中花青素标准溶液的离子对449.1
→
287.2的谱图；
[0015]图6为本专利技术具体实施例中花青素标准溶液的离子对463.1
→
301.2的谱图；
[0016]图7为本专利技术具体实施例中花青素标准溶液的离子对465.1
→
303.1的谱图；
[0017]图8为本专利技术具体实施例中花青素标准溶液的离子对493.1
→
331.2的谱图；
[0018]图9为本专利技术具体实施例中花青素扫描离子对的二级质谱图；
[0019]图10为本专利技术具体实施例中的标准工作曲线。
具体实施方式
[0020]本专利技术一种葡萄酒中花青素的液相色谱
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串联质谱检测方法的实施例如图1至图3所示：包括以下步骤：
[0021]步骤一：葡萄酒样品用水直接稀释1000倍，过0.22μm微孔滤膜后，供UPLC
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MS/MS测定。
[0022]步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种葡萄酒中花青素的液相色谱
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串联质谱检测方法，其特征在于：包括以下步骤，步骤一，葡萄酒样品用水直接稀释1000倍，过0.22μm微孔滤膜后，供UPLC
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MS/MS测定；步骤二，标准曲线的配制，取四种花青素的标准品各10mg，四种花青素分别是矢车菊素
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葡萄糖苷、氯化葡萄糖苷芍药素、飞燕草素葡萄糖苷和氯化锦葵色素
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葡糖苷，用甲醇溶解并转移至100mL容量瓶中，用乙腈定容，制得4种100μg/mL花青素标准储备液；分别取100μg/mL的4种花青素标准储备液0.1mL，分别用甲醇稀释定容至10mL，配制成4种1.0μg/mL的花青素标准工作液；制作校准曲线用工作溶液的制备：从4种花青素标准工作液中各取1、2、5、20、50、100μL，并对应加入979、978、975、960、930、880μL甲醇，制得1、2、5、20、50、100μg/L的系列浓度梯度的4种青花素标准曲线溶液；步骤三，待测样品溶液的检测：将步骤一中制备的待测样品溶液和步骤二中制备的基质标准曲线溶液在液相色谱
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串联质谱仪上分别进样，根据基质标准曲线对定量离子进行内标法定量计算，获得待测样品溶液中四种花青素的浓度，继而获得葡萄酒中花青素的含量。2.根据权利要求1所述的葡萄酒中花青素的液相色谱
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串联质谱检测方法，其特征在于：所述步骤三中液相色谱

【专利技术属性】
技术研发人员：陈祥准，程洁，刘俊，戴伟婷，张莎莎，韩超，
申请(专利权)人：温州海关综合技术服务中心，
类型：发明
国别省市：