葡萄酒中芦丁的液相色谱-串联质谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种葡萄酒中芦丁的液相色谱

【技术实现步骤摘要】
葡萄酒中芦丁的液相色谱
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串联质谱检测方法


[0001]本专利技术涉及食品安全检测领域，具体涉及一种葡萄酒中芦丁的液相色谱
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串联质谱检测方法。

技术介绍

[0002]芦丁，又称为芸香苷、维生素P，分子式为C27H30O16，是一种天然的黄酮苷，属于广泛存在于植物中的黄酮醇配糖体，两个配糖体为葡萄糖和鼠李糖。不同葡萄酒中黄酮醇的种类和含量有很大的差异。葡萄品种对葡萄酒中黄酮醇含量及组成有较大的影响，黄酮醇是葡萄酒中重要的酚类物质，多以糖苷态的形式存在，虽然自身不表现红色，却能够与葡萄酒中的花色苷类物质发生辅色作用，对维持葡萄酒颜色的鲜艳饱满有重要的作用。葡萄酒中芦丁含量的高低，一定程度上从决定了葡萄酒的成色与质量，目前为判断葡萄酒的质量，会从多个方面出发，但是目前对葡萄酒中的芦丁含量分析，较为困难，难以有效定性定量分析，不能有效为葡萄酒产品质量监控提供技术支持。

技术实现思路

[0003]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种葡萄酒中芦丁的液相色谱
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串联质谱检测方法，其操作便捷，处理简单，检测选择性好，灵敏度高，有效实现定性定量分析，具有良好的检测效果。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供了一种葡萄酒中芦丁的液相色谱
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串联质谱检测方法，包括以下步骤，步骤一，葡萄酒样品用水直接稀释1000倍，过0.22μm微孔滤膜后，供UPLC
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MS/MS测定；
[0005]步骤二，标准曲线的配制，取芦丁的标准品10mg，用甲醇溶解并转移至100mL容量瓶中，用甲醇定容，制得100μg/mL芦丁标准储备液；取100μg/mL的芦丁标准储备液0.1mL，分别用水稀释定容至10mL，配制成1.0μg/mL的芦丁标准工作液；制作校准曲线用工作溶液的制备：各取1、2、5、20、50、100μL的1.0μg/mL芦丁标准工作液，各加入979、978、975、960、930、880μL空白基质，制得1、2、5、20、50、100μg/L的系列浓度基质标准曲线溶液；
[0006]步骤三，待测样品溶液的检测：将步骤一中制备的待测样品溶液和步骤二中制备的基质标准曲线溶液在液相色谱
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串联质谱仪上分别进样，根据基质标准曲线对定量离子进行外标法定量计算，获得待测样品溶液中芦丁的浓度，继而获得葡萄酒中芦丁的含量。
[0007]作为本专利技术的进一步设置，所述步骤三中液相色谱
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串联质谱仪中色谱条件为：所述步骤三中液相色谱
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串联质谱仪中色谱条件为：色谱柱：C18柱(150
×
2.1mm，3.5μm)；流动相：A为乙腈，B为5mmol/L乙酸铵溶液；梯度洗脱程序：0～1min，5％A；1
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3min，5％
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90％A；4
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6min，90％A；流速：400μL/min，柱温：30℃，进样量：5μL；
[0008]所述步骤三中液相色谱
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串联质谱仪中质谱条件为：电喷雾离子源：负离子扫描；离子源温度：500℃；电喷雾电压：4500V；雾化气(GS1)压力：344.5kPa；辅助气压力(GS2)：275.6kPa；气帘气压力：68.9kPa；碰撞气CAD压力：137.8kPa；监测模式：多反应监测(MRM)，
MRM母离子：609.1m/z；MRM子离子300.1m/z，271.1m/z，保留时间4.24min，去簇电压DP：
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90V，碰撞能量CE：
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28eV，
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32eV。
[0009]这样设置的有益效果是，采用上述方案，通过对葡萄酒样品的直接稀释，并将稀释液进液相色谱
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串联质谱进行检测。第一步稀释：先将样品用水进行稀释；第二步进液相色谱
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串联质谱仪分析：将第一步稀释液，经0.22μm微孔滤膜过滤，得到净化的待检液。该净化后的待检液则不会对检测仪器造成污染。其次，本方法对于葡萄酒中花青素的定性定量检测分析是通过液相色谱
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串联质谱仪分析。先配置一组阶梯形的标准曲线溶液，然后将标准曲线溶液和待检液在液相色谱
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串联质谱仪上分别进样。待检液中出现的色谱峰保留时间与标准工作溶液一致，允许偏差小于
±
2.5％，该色谱峰所对应的质谱定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，而且相对丰度偏差不超过规定，则可确定该待检液中花青素含量。本方法直接对葡萄酒样品用水稀释、溶剂使用量少、重现性好、提取效率高、更安全的特点。
附图说明
[0010]图1为本专利技术具体实施例中的芦丁化学结构式；
[0011]图2为芦丁标准溶液的提取离子对谱图；
[0012]图3为本专利技术具体实施例中芦丁扫描离子对的二级质谱图。
具体实施方式
[0013]本专利技术一种葡萄酒中芦丁的液相色谱
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串联质谱检测方法的实施例如图1至图3所示：包括以下步骤：
[0014]步骤一，葡萄酒样品用水直接稀释1000倍，过0.22μm微孔滤膜后，供UPLC
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MS/MS测定；
[0015]步骤二，标准曲线的配制，取芦丁的标准品10mg，用甲醇溶解并转移至100mL容量瓶中，用甲醇定容，制得100μg/mL芦丁标准储备液；取100μg/mL的芦丁标准储备液0.1mL，分别用水稀释定容至10mL，配制成1.0μg/mL的芦丁标准工作液；制作校准曲线用工作溶液的制备：各取1、2、5、20、50、100μL的1.0μg/mL芦丁标准工作液，各加入979、978、975、960、930、880μL空白基质，制得1、2、5、20、50、100μg/L的系列浓度基质标准曲线溶液；
[0016]步骤三，待测样品溶液的检测：将步骤一中制备的待测样品溶液和步骤二中制备的基质标准曲线溶液在液相色谱
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串联质谱仪上分别进样，根据基质标准曲线对定量离子进行外标法定量计算，获得待测样品溶液中芦丁的浓度，继而获得葡萄酒中芦丁的含量。
[0017]步骤三中液相色谱
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串联质谱的参数条件如下：
[0018]色谱条件：色谱柱：C18柱(150
×
2.1mm，3.5μm)；流动相：A为乙腈，B为5mmol/L乙酸铵溶液；梯度洗脱程序：0～1min，5％A；1
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3min，5％
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90％A；4
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6min，90％A；流速：400μL/min，柱温：30℃，进样量：5μL；
[0019]质谱条件：电喷雾离子源：负离子扫描；离子源温度：500℃；电喷雾电压：4500V；雾化气(GS1)压力：344.5kPa；辅助气压力(GS2)：275.6kPa；气帘气压力：68.9kPa；碰撞气CAD压力：137.8k本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种葡萄酒中芦丁的液相色谱
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串联质谱检测方法，其特征在于：包括以下步骤，步骤一，葡萄酒样品用水直接稀释1000倍，过0.22μm微孔滤膜后，供UPLC
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MS/MS测定；步骤二，标准曲线的配制，取芦丁的标准品10mg，用甲醇溶解并转移至100mL容量瓶中，用甲醇定容，制得100μg/mL芦丁标准储备液；取100μg/mL的芦丁标准储备液0.1mL，分别用水稀释定容至10mL，配制成1.0μg/mL的芦丁标准工作液；制作校准曲线用工作溶液的制备：各取1、2、5、20、50、100μL的1.0μg/mL芦丁标准工作液，各加入979、978、975、960、930、880μL空白基质，制得1、2、5、20、50、100μg/L的系列浓度基质标准曲线溶液；步骤三，待测样品溶液的检测：将步骤一中制备的待测样品溶液和步骤二中制备的基质标准曲线溶液在液相色谱
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串联质谱仪上分别进样，根据基质标准曲线对定量离子进行外标法定量计算，获得待测样品溶液中芦丁的浓度，继而获得葡萄酒中芦丁的含量。2.根据权利要求1所述的葡萄酒中芦丁的液相色谱
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串...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈祥准，刘俊，程洁，张凯，戴伟婷，张莎莎，韩超，
申请(专利权)人：温州海关综合技术服务中心，
类型：发明
国别省市：