一种骨髓组织的预处理方法及应用技术

本发明专利技术提出了一种骨髓组织的预处理方法及应用；所述预处理方法通过浸泡在EDTA脱钙液实现第一次骨髓组织完全裸露脱钙，通过盐酸脱钙液进行第二次骨髓组织表面脱钙，既能够实现好的的脱钙效果，又能够不影响切片的同时不破坏抗原，预处理后的骨髓组织可以进行FISH检测，可有效避免假阴性。可有效避免假阴性。可有效避免假阴性。

【技术实现步骤摘要】
一种骨髓组织的预处理方法及应用


[0001]本专利技术属于活检组织处理
，具体涉及一种骨髓组织的预处理方法及应用。

技术介绍

[0002]荧光原位杂交技术(FISH)是一种利用非放射性的英光信号对样本进行原位杂交的检测技术。FISH可辅助诊断具有特征性遗传学血液疾病，临床与血液肿瘤相关的FISH探针接近100种，经常用的60种左右。应用范围越来越多，包括急性白血病、慢性白血病、骨髓增生异常综合症(MDS)、多发性骨髓瘤(MM)、淋巴瘤等多种血液肿瘤。FISH检测的样本来源广泛，包括血液、骨髓液、组织、脱落细胞、羊水、腹水等。由于骨髓活检的组织切片之前需要固定脱钙预处理，而脱钙会对DNA破坏，从而影响FISH检测的结果，出现假阴性，所以一般脱钙预处理过的骨髓组织不适用FISH检测。

技术实现思路

[0003]本专利技术提出一种骨髓组织的预处理方法及应用，用于解决现有技术骨髓组织脱钙预处理破坏DNA，导致假阴性的缺陷。
[0004]基于此，本专利技术的技术方案如下：
[0005]本专利技术的第一个目的在于提出一种骨髓组织的预处理方法，包括如下步骤：
[0006]S1.将穿刺组织放入固定液中固定16
‑
24h，第一次流水冲洗；
[0007]S2.组织继续用EDTA脱钙液脱钙7
‑
8h，第二次流水冲洗；
[0008]S3.对组织进行梯度脱水、石蜡包埋后粗修；
[0009]S4.对包埋后的组织用含甲醛的盐酸溶液浸泡15r/>‑
30min。
[0010]在一个实施例中，所述含甲醛的盐酸溶液按体积比由盐酸10％、甲醛5％、蒸馏水85％配制而成。
[0011]在一个实施例中，所述EDTA脱钙液浓度为0.5mol/L，PH为8.0。
[0012]在一个实施例中，步骤S1中所述固定液用于保存细胞和组织的原有形态结构，包括但不限于Bouin氏固定液或甲醛固定液。
[0013]在一个实施例中，步骤S3中所述梯度脱水步骤为：10％福尔马林浸泡1h后，依次经75％酒精浸泡1h，95％酒精浸泡1h、重复2次，无水酒精浸泡1h、重复3次，二甲苯浸泡40min、重复3次，石蜡浸泡1h、重复3次。
[0014]本专利技术的第二个目在于，提出以上所述预处理方法中的试剂在制备骨髓组织预处理试剂盒中的应用。
[0015]本专利技术的第三个目在于，提出一种骨髓组织石蜡切片的制作方法，包含以上所述的骨髓组织预处理方法。
[0016]在一个实施例中，所述骨髓组织石蜡切片的制作方法还包括对预处理后的组织进行切片的步骤。
[0017]本专利技术的第四个目在于，提出以上所述骨髓组织石蜡切片的制作方法得到的石蜡切片。
[0018]本专利技术的第五个目在于，提出所述石蜡切片在制备荧光原位杂交检测组织样本中的应用。
[0019]相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：
[0020]本专利技术的预处理方法通过浸泡在EDTA脱钙液实现骨髓组织完全裸露脱钙，通过盐酸脱钙液进行第二次骨髓组织表面脱钙，脱钙效率高且可以实现好的脱钙效果；在不影响切片的同时也不破坏抗原，预处理后的骨髓组织可以进行FISH检测，可有效避免假阴性。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0022]图1为本专利技术实施例1组织切片进行HE染色、FISH检测信号结果。
[0023]图2为本专利技术实施例2组织切片进行HE染色、FISH检测信号结果。
[0024]图3为本专利技术实施例3组织切片进行HE染色、FISH检测信号结果。
[0025]图4为本专利技术实施例3组织切片进行HE染色、FISH检测信号结果。
[0026]图5为本专利技术实施例3组织切片进行HE染色、FISH检测信号结果。
[0027]图6为本专利技术对比例1组织切片进行HE染色、FISH检测信号结果。
[0028]图7为本专利技术对比例2组织切片进行HE染色、FISH检测信号结果。
[0029]图8为本专利技术对比例3组织切片进行HE染色、FISH检测信号结果。
[0030]图9为本专利技术对比例4组织切片进行HE染色、FISH检测信号结果。
[0031]图10为本专利技术对比例5组织切片进行HE染色、FISH检测信号结果。
具体实施方式
[0032]下面将结合本专利技术实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0033]以下实施例中使用的脱钙液成分如下：
[0034]EDTA脱钙液组成：浓度为0.5mol/L，用氢氧化钠调节PH至8.0。
[0035]盐酸脱钙液组成：盐酸(市售，含量36
‑
38％)100ml+甲醛50ml+蒸馏水850ml。
[0036]若未特别指明，实施例中所用的操作手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0037]实施例1
[0038]1.1骨髓组织预处理方法：
[0039]骨髓组织固定
‑
脱钙
‑
脱水
‑
包埋：穿刺后立即将穿刺组织放入Bouin's固定液固定20h
→
取材
→
流水冲洗20min
→
EDTA脱钙液脱钙7h(完全脱钙)
→
流水冲洗15min
→
梯度脱水
→
石蜡包埋
→
粗修
→
盐酸脱钙液中浸泡20min(表面脱钙)
→
切片。
[0040]梯度脱水程序为：10％福尔马林1h
→
75％酒精1h
→
95％酒精1h*2
→
无水酒精1h*3
→
二甲苯40min*3
→
石蜡1h*3。
[0041]1.2HE染色程序：3μm切片80℃烤片半小时
→
脱蜡剂10min*3
→
无水乙醇3min*3
→
95％乙醇3min*2
→
75％乙醇3min
→
流水冲洗2min
→
苏木素6min，流水冲洗2min
→
4％盐酸酒精分化3～5s，流水冲洗2min
→
1％氨水返蓝10s，流水冲洗2min
→
伊红3～5s，流水冲洗
→
梯度酒精脱水，吹干封片，待本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种骨髓组织的预处理方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.将穿刺组织放入固定液中固定16
‑
24h，第一次流水冲洗；S2.组织继续用EDTA脱钙液脱钙7
‑
8h，第二次流水冲洗；S3.对组织进行梯度脱水、石蜡包埋后粗修；S4.对包埋后的组织用含甲醛的盐酸溶液浸泡15
‑
30min。2.根据权利要求1所述的骨髓组织预处理方法，其特征在于，所述含甲醛的盐酸溶液按体积比由盐酸10％、甲醛5％、蒸馏水85％配制而成。3.根据权利要求1所述的骨髓组织预处理方法，其特征在于，所述EDTA脱钙液浓度为0.5mol/L，PH为8.0。4.根据权利要求1所述的骨髓组织预处理方法，其特征在于，步骤S1中所述固定液为Bouin氏固定液或甲醛固定液。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱雪冰，李鸿瑞，郑金娥，张平，贺艳丽，邱学奎，陈芳，张玉，钟剑平，
申请(专利权)人：武汉益特医疗技术咨询有限公司，
类型：发明
国别省市：