结直肠癌类器官的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了结直肠癌类器官的构建方法及其应用，提供了一种结直肠癌类器官培养基、结直肠癌类器官的构建方法以及构建的类器官在预测药物敏感性及在结直肠癌发病机理或致病因素研究中的应用。本发明专利技术提供的类器官培养基及构建方法成功率高，类器官生长状态良好，能够很好的预测患者对药物的敏感性，为结直肠癌精准医疗的实现搭建了技术平台，具有广阔的应用前景。应用前景。应用前景。

【技术实现步骤摘要】
结直肠癌类器官的构建方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及结直肠癌类器官的构建方法及其应用。

技术介绍

[0002]结直肠癌(Colorectal cancer，CRC)的高发病率和高死亡率严重威胁人类健康，对我国2015年到2020年癌症数据统计分析发现，2015年CRC发病率为38.8％，2020年升高到55.5％，其死亡率也由2015年的18.7％升高至28.6％。CRC在世界各国都有发生，但在发达国家最为常见，且随着饮食习惯逐渐西方化和中国等人口稠密国家的经济水平快速发展，CRC的发病率预计还会逐年上升。可见，CRC防治形势十分严峻，深入研究CRC的发生发展，探索有效治疗方案具有重要意义。
[0003]随着技术的发展，类器官作为一种新兴的体外疾病研究模型逐渐被人们熟知。类器官是一种更加接近体内生理或病理状态的3D细胞培养模型。类器官不仅可以作为更广泛癌症研究的临床前模型，还可以为晚期疾病患者提供个性化的治疗建议。
[0004]因此，构建CRC类器官，对于实现CRC的精准有效治疗具有重大意义。

技术实现思路

[0005]为弥补现有技术的不足，本专利技术提供了一种结直肠癌类器官培养基及构建结直肠癌类器官的方法。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]本专利技术的第一方面提供了一种结直肠癌类器官培养基，所述培养基包括BMP抑制剂、Prostaglandin E2、Wnt激动剂、TGF
‑
β抑制剂、Gastrin I、p38抑制剂。
[0008]进一步，所述BMP抑制剂包括Noggin、Gremlin、Chordin、Follistatin、Sclerostin、Decorin。
[0009]进一步，所述BMP抑制剂选自Noggin。
[0010]进一步，所述Wnt激动剂包括Wnt蛋白、R
‑
spondin。
[0011]进一步，所述Wnt激动剂选自R
‑
spondin。
[0012]进一步，所述R
‑
spondin包括R
‑
spondin1、R
‑
spondin2、R
‑
spondin3、R
‑
spondin4。
[0013]进一步，所述R
‑
spondin选自R
‑
spondin1。
[0014]进一步，所述TGF
‑
β抑制剂包括A8301、SB431542、SB505124、SB525334、SD208、LY36494、及SJN2511。
[0015]进一步，所述TGF
‑
β抑制剂选自A8301。
[0016]进一步，所述p38抑制剂包括SB202190、SB203580、VX702、VX745、PD169316、RO4402257、BIRB796。
[0017]进一步，所述p38抑制剂选自SB
‑
202190。
[0018]进一步，所述培养基还包括抗生素。
[0019]进一步，所述抗生素包括Primocin、青霉素链霉素、甲硝唑。
[0020]进一步，所述抗生素选自Primocin。
[0021]进一步，所述培养基还包括营养添加剂。
[0022]进一步，所述营养添加剂包括Gluta Max、B27和N2。
[0023]进一步，所述营养添加剂选自Gluta Max。
[0024]进一步，所述培养基还包括促分裂增殖因子、FGF
‑
basic、N
‑
acetyl
‑
L
‑
cysteine、Rock抑制剂。
[0025]进一步，所述促分裂增殖因子包括EGF、BDNF、KGF。
[0026]进一步，所述促分裂增殖因子选自EGF。
[0027]进一步，所述Rock抑制剂包括Y
‑
27632、HA1077、H
‑
1152。
[0028]进一步，所述Rock抑制剂选自Y
‑
27632。
[0029]本专利技术的第二方面提供了一种结直肠癌类器官的培养方法，所述方法包括使用本专利技术第一方面所述的培养基对结直肠癌细胞进行培养。
[0030]进一步，所述方法还包括加入ECM与结直肠癌细胞共培养。进一步，所述ECM包括BME和基质胶。
[0031]进一步，所述ECM选自基质胶。
[0032]进一步，所述结直肠癌细胞通过消化结直肠癌组织得到。
[0033]进一步，使用组织消化液消化结直肠癌组织。
[0034]进一步，所述组织消化液的母液包括Tryple和/或胶原酶。
[0035]进一步，所述组织消化液的母液选自Tryple。
[0036]进一步，所述Tryple的浓度为2
×
Tryple
‑
10
×
Tryple。
[0037]进一步，所述Tryple的浓度为5
×
Tryple。
[0038]进一步，组织的消化时间为30min
‑
12h。
[0039]进一步，组织的消化时间为30min。
[0040]进一步，使用PBS溶液或培养基终止消化。
[0041]进一步，使用PBS溶液终止消化。
[0042]进一步，所述方法还包括在消化组织前清洗组织。
[0043]进一步，使用PBS清洗组织。
[0044]进一步，所述方法还包括扩增类器官。
[0045]进一步，类器官扩增包括消化类器官。
[0046]进一步，使用Tryple消化类器官。
[0047]进一步，Tryple的浓度为2
×
Tryple。
[0048]进一步，消化的时间为5min
‑
30min。
[0049]进一步，消化的时间为20min。
[0050]进一步，所述方法还包括传代类器官。
[0051]进一步，所述传代类器官包括消化类器官。
[0052]进一步，使用传代消化液消化类器官。
[0053]进一步，所述传代消化液的母液包括Tryple和/或胶原酶。
[0054]进一步，所述传代消化液的母液选自Tryple。
[0055]进一步，使用HBSS终止消化。
[0056]进一步，消化液：HBSS＝1：2。
[0057]本专利技术的第三方面提供了一种结直肠癌类器官，所述类器官使用本专利技术第一方面所述的培养基培养或通过本专利技术第二方面所述的方法获得。
[0058]本专利技术的第四方面提供了如下任一项所述的应用：
[0059](1)本专利技术第一方面所述的培养基在培养结直肠癌类本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结直肠癌类器官培养基，其特征在于，所述培养基包括BMP抑制剂、Prostaglandin E2、Wnt激动剂、TGF
‑
β抑制剂、Gastrin I、p38抑制剂；优选的，所述BMP抑制剂包括Noggin、Gremlin、Chordin、Follistatin、Sclerostin、Decorin；优选的，所述BMP抑制剂选自Noggin；优选的，所述Wnt激动剂包括Wnt蛋白、R
‑
spondin；优选的，所述Wnt激动剂选自R
‑
spondin；优选的，所述R
‑
spondin包括R
‑
spondin1、R
‑
spondin2、R
‑
spondin3、R
‑
spondin4；优选的，所述R
‑
spondin选自R
‑
spondin1；优选的，所述TGF
‑
β抑制剂包括A8301、SB431542、SB505124、SB525334、SD208、LY36494、及SJN2511；优选的，所述TGF
‑
β抑制剂选自A8301；优选的，所述p38抑制剂包括SB202190、SB203580、VX702、VX745、PD169316、RO4402257、BIRB796；优选的，所述p38抑制剂选自SB
‑
202190。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基还包括抗生素；优选的，所述抗生素包括Primocin、青霉素链霉素、甲硝唑；优选的，所述抗生素选自Primocin；优选的，所述培养基还包括营养添加剂；优选的，所述营养添加剂包括Gluta Max、B27和N2；优选的，所述营养添加剂选自Gluta Max；优选的，所述培养基还包括促分裂增殖因子、FGF
‑
basic、N
‑
acetyl
‑
L
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cysteine、Rock抑制剂；优选的，所述促分裂增殖因子包括EGF、BDNF、KGF；优选的，所述促分裂增殖因子选自EGF；优选的，所述Rock抑制剂包括Y
‑
27632、HA1077、H
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1152；优选的，所述Rock抑制剂选自Y
‑
27632。3.一种结直肠癌类器官的培养方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：余佳，王芳，陈益莹，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：