一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法技术

本申请公开了一种高效液相色谱法(HPLC)测定尿素含量的方法，色谱条件为：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB

【技术实现步骤摘要】
一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法


[0001]本申请涉及化学分析
，具体而言，涉及一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法。

技术介绍

[0002]目前尿素的检测以总氮含量为标准，此方法操作繁琐且所得结果不能代表尿素的真实含量。液相色谱通常以不同比例的甲醇
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水溶液或者乙腈
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水溶液为流动相，而在此条件下尿素色谱峰形差，且尿素和杂质峰重叠、分离度差。另外，也有相关文献采用柱前衍生
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液相色谱法或柱后衍生
‑
液相色谱法来检测尿素含量，但上述方法存在一定的技术缺陷，例如，衍生剂适配难、尿素与衍生剂是否反应完全、检测器昂贵等。
[0003]尿素中存在杂质较多，对下游产品的质量影响较高。因此，如何提供一个既能简单、准确检测尿素真实含量，又能使杂质和尿素达到充分分离的一种检测方法是研发分析人员亟待解决的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法，色谱条件为：
[0005]色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB
‑
C18；
[0006]流动相：流动相A与流动相B体积比为95:5；所述流动相A为含0.8g/L庚烷磺酸钠和体积百分比0.05％磷酸的水溶液，所述流动相B为乙腈；
[0007]流速：0.8mL/min；
[0008]柱温：35.0℃；
[0009]检测波长：205nm。
[0010]所述色谱柱长度250mm，内径为4.6mm，填料粒径为5.0μm。
[0011]所述流动相A的配制方法如下：
[0012]每0.8000g庚烷磺酸钠加纯化水1000mL溶解，再加磷酸0.5mL混匀，用0.45μm滤膜滤过，超声3min。
[0013]进一步的，所述高效液相色谱法测定尿素含量的方法，包括如下步骤：
[0014](1)配制流动相、尿素标准品溶液和供试品溶液；
[0015](2)调节高效液相色谱仪条件，平衡色谱柱；
[0016](3)将尿素标准品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积；
[0017](4)采用外标法或标准曲线法计算尿素的含量；
[0018]将尿素标准品和供试品溶于水获得所述尿素标准品溶液和供试品溶液。
[0019]其中，采用外标法计算尿素含量时，尿素含量(％)＝(供试样峰面积
×
标样质量
×
标样含量)/(标样峰面积
×
供试样质量)
×
100％。
[0020]采用标准曲线法计算尿素含量时，以尿素标准品溶液的峰面积为纵坐标，以尿素标准品溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线，根据标准曲线计算供试品中尿素的含量。绘制
标准曲线时，所述尿素标准品溶液的最低浓度不低于69μg/mL。
[0021]所述高效液相色谱法测定尿素含量的方法还可以包括利用面积归一法测定杂质含量。
[0022]本专利技术的有益效果包括：
[0023]本专利技术通过对流动相和色谱柱的改进，实现了采用液相色谱法直接、准确的检测尿素含量以及使尿素与杂质充分分离的技术效果。流动相的制备上加入庚烷磺酸钠能够改善峰形、增加保留；加入磷酸可以调节尿素和杂质的分离效果，防止出现峰拖尾。尿素属于弱碱性化合物，在色谱柱的选择上选用Agilent ZORBAX Eclipse XDB
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C18，4.6
×
250mm，粒径5.0μm色谱柱，该色谱柱通过超密键合和双封端，可覆盖尽可能多的活性硅醇基，使尿素具有出色的峰形和保留。
附图说明
[0024]图1为本专利技术实施例获得的标准曲线；
[0025]图2为本专利技术实施例获得的检测限色谱图；
[0026]图3为本专利技术实施例获得的定量限色谱图；
[0027]图4为本专利技术实施例获得的标准品色谱图；
[0028]图5为本专利技术实施例获得的供试品色谱图。
具体实施方式
[0029]下面结合实施例对本专利技术进行进一步说明和描述，但所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术和实施例中，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他专利技术和实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0030]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0031]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0032]实施例1、一种高效快速测定复杂组份中尿素含量的色谱分析方法
[0033]包括以下操作步骤：
[0034]第一步、流动相溶液的制备
[0035]流动相A：精密称取庚烷磺酸钠(分析纯)0.8000g，加纯化水1000mL，搅拌溶解；加磷酸(分析纯)0.5mL，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，超声3min；流动相B：乙腈(色谱纯)1000mL，用0.45μm滤膜滤过，超声3min。
[0036]第二步、标准品溶液的配制
[0037]精密称取尿素标准品0.1500g(
±
0.0002g)至100mL容量瓶中，加纯化水超声溶解，降至室温，加纯化水定容至刻度，摇匀得尿素标准品溶液。
[0038]第三步、供试品溶液的配制
[0039]精密称取尿素供试品0.1500g(
±
0.0002g)至100ml容量瓶中，加纯化水超声溶解，降至室温，加纯化水定容至刻度，摇匀得尿素供试品溶液。
[0040]第四步、HPLC色谱条件
[0041]色谱柱：安捷伦ZORBAX Eclipse XDB
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C18，4.6
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250mm，粒径5.0μm；
[0042]流动相：流动相A：流动相B(体积比)＝95:5；
[0043]流速：0.8mL/min；
[0044]柱温：35.0℃；
[0045]波长：205nm；
[0046]进样量：20μL。
[0047]第五步、外标法或标准曲线法计算尿素含量
[0048]采用外标法计算尿素含量时，尿素含量(％)＝(供试样峰面积
×
标样质量
×
标样含量)/(标样峰面积
×
供试样质量)
×
100％。
[0049]采用标准曲线法计算尿素含量时，以尿素标准品溶液的峰面积为纵坐标，以尿素标准品溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线，根据标准曲线计算供试品中尿素的含量。所述尿素标准品溶液的最低浓度不低于69μg/mL。
[0050]实施例2、本专利技术提供的色谱方法效果验证
[0051]1)检测限、定量限：检测限是方法和仪器灵敏度体现的重要指标之一，是指检出该物质的最低浓度；定量限体现了分析方法是否具备灵敏的定量检测能力，是本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法，其特征在于，色谱条件为：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB
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C18；流动相：流动相A与流动相B体积比为95:5；所述流动相A为含0.8g/L庚烷磺酸钠和体积百分比0.05％磷酸的水溶液，所述流动相B为乙腈；流速：0.8mL/min；柱温：35.0℃；检测波长：205nm。2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定尿素含量的方法，其特征在于，所述色谱柱长度250mm，内径为4.6mm，填料粒径为5.0μm。3.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定尿素含量的方法，其特征在于，所述流动相A的配制方法如下：每0.8000g庚烷磺酸钠加纯化水1000mL溶解，再加磷酸0.5mL混匀，用0.45μm滤膜滤过，超声3min。4.根据权利要求1
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3任一项所述的高效液相色谱法测定尿素含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)配制流动相、尿素标准品溶液和供试品溶液；(2)调节高效液相色谱仪条件，平衡色谱柱；(3)将尿素标...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玉忠，闫黎明，马建生，王新维，宋国强，李锋，李小露，张建荣，王学文，
申请(专利权)人：宁夏绿色氰胺化学新材料研究院宁夏贝利特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：