茶树CsBES基因的应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域；具体涉及茶树CsBES基因的用途

【技术实现步骤摘要】
茶树CsBES基因的应用


[0001]本专利技术属于生物
；具体涉及茶树CsBES基因的用途
‑‑‑
调控茶树叶下垂。

技术介绍

[0002]茶叶是全球三大重要的非酒精饮料之一。我国茶树种质资源丰富，茶产业产值高且规模大。过去，茶叶采收基本依赖人工采摘。现在由于人口老龄化导致的劳动力减少，机械采收(机采)逐渐成为茶叶行业发展的关注点。具有适宜机采性状的茶树成为茶产业发展的重点。而叶下垂正是影响机采芽叶完整率的主要因素。因而如何调控茶树叶下垂成为机采茶树育种关注的重点。植物激素天然无害，利用植物激素响应基因调控机采茶树叶下垂为提高机采适宜性提供可能的技术路线。
[0003]CsBES基因属于bHLH类转录因子，是植物激素油菜素甾醇(Brassinosteroids，BR)信号转导途径的组分之一。过往研究只关注其同源基因BES1在拟南芥中调控细胞伸长和植物抗逆等的功能，其茶树同源基因CsBES(CSS0038858)的功能未见报道。
[0004]目前已知的涉及调控植物叶片叶下垂的基因为鼠尾草LRR受体样激酶基因DPY1，该基因与CsBES基因属于完全不同的基因家族且来源物种完全不一样(茶树为双子叶木本植物，鼠尾草为单子叶植物草本植物)，两者核苷酸序列和氨基酸序列也完全不同，因此两者没有可关联性。
[0005]CsBES基因的序列在TeaGVD(http://www.teaplant.top/teagvd)中已经被公开，该茶树基因没有进行任何研究报道，其用途未知。
专利
技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题是提供CsBES基因在用于调控茶树叶下垂程度的应用。
[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术提供CsBES基因的用途：正向调控叶片下垂，CsBES基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所述。
[0008]CsBES基因编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
[0009]作为本专利技术CsBES基因的用途的改进：所述叶片为茶树叶片。
[0010]CsBES基因用于反义抑制茶树叶片，所述反义抑制茶树叶片下垂受到抑制。即，CsBES基因沉默所得的茶树的叶弯曲度变高，叶下垂程度变低。
[0011]CsBES基因沉默所用反义引物为如下：
[0012]CsBES反义引物
‑
1：5
’‑
CTCTCTCCTCTTGTTGTTCT
‑3’
[0013]CsBES反义引物
‑
2：5
’‑
TTTGATTTGGGGGAGGTCTG
‑3’
[0014]CsBES反义引物
‑
3：5
’‑
GAAAGGCAGAATGTAAGATG
‑3’
[0015]CsBES反义引物
‑
4：5
’‑
TGGCCGGTGTAAGATGGTGG
‑3’
[0016]CsBES反义引物
‑
5：5
’‑
ATTTTGGAGGGAGCTCTGCT
‑3’
。
[0017]本专利技术还同时提供了一种增大茶树叶片叶弯曲度的方法：使得CsBES基因沉默。
[0018]作为上述方法的改进：将上述CsBES反义引物
‑
1、CsBES反义引物
‑
2、CsBES反义引
物
‑
3、CsBES反义引物
‑
4、CsBES反义引物
‑
5等量混合后，加入蒸馏水稀释配制而得反义抑制处理液，所述反义抑制处理液中每种引物浓度为20
±
2uM。
[0019]本专利技术首次构建了茶树CsBES基因反义抑制基因沉默植株，并进行功能研究。通过测定叶弯曲度，发现茶树CsBES基因在叶片开展和下垂中起到正向促进作用。即，使得茶树叶下垂状态向更加弯曲的趋势发展。
附图说明
[0020]为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。
[0021]图1是用于测序CsBES基因编码区全长的载体图谱。
[0022]图2是CsBES基因反义抑制基因沉默茶树叶片中CsBES基因的表达量；
[0023]图3是CsBES基因反义抑制基因沉默茶树叶片的叶下垂弯曲度；
[0024]上述图中：
[0025]Blank为空白对照组、28nBL为诱导组、AS+28nBL为反义抑制处理组，S+28nBL为阴性对照组。不同字母代表不同组间具有显著差异(p<0.05)。
具体实施方式
[0026]下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：
[0027]一、获得茶树CsBES基因全长序列：
[0028]用Primer Premier 6.0设计全基因扩增引物，取种植在中国农业科学院茶叶研究所的茶树品种龙井43的一芽一叶的cDNA为模版(cDNA的提取方式为常规技术，例如可参照CN104561025A)，设计特异性引物CsBES
‑
F和CsBES
‑
R，用KOD
‑
plus
‑
NEO高保真酶PCR扩增CsBES片段。
[0029]引物序列为：CsBES
‑
F：5
’‑
ATGACTGCCGGCGGATC
‑3’
[0030]CsBES
‑
R：5
’‑
TTAAGTGTGGGCTTTTCCAC
‑3’
[0031]PCR扩增反应体系：10xPCR Buffer 5ul、2mM dNTP 5ul、25mM MgSO
4 3ul、KOD
‑
plus
‑
NEO1ul、ddH2O 32ul、cDNA1ul、上下游引物各1.5ul，共50ul。PCR反应程序为：94℃预变性2分钟；98℃变性10秒，53℃退火30秒，68℃延伸2分钟，35个循环；最后68℃终延伸5分钟，将获得的PCR产物用1％琼脂糖凝胶电泳鉴定，然后将扩增条带用Axygen DNA凝胶试剂盒回收纯化，将回收产物构建到pEASY
‑
Blunt
‑
Zero载体上(载体图谱见图1)，将上述重组质粒送到有康公司测序确认。
[0032]所得基因CsBES的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示；该基因编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。
[0033]二、CsBES基因反义抑制引物和阴性对照正义引物的设计和合成
[0034]使用Soligo在线设计软件，提交已获得的SEQ ID No：1核苷酸序列，根据软件依据核苷酸碱基互补配对的结合能量值计算的结果获得SE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CsBES基因在调控茶树叶片形态中的应用，其特征是：正向调控叶片的叶下垂，CsBES基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所述。2.根据权利要求1所述的应用，其特征是：所述叶片为茶树叶片。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征是：CsBES基因沉默所得的茶树的叶弯曲度变高，叶下垂程度变低。4.根据权利要求3所述的CsBES基因的应用，其特征是CsBES基因沉默所用反义引物为如下：CsBES反义引物
‑
1：5
’‑
CTCTCTCCTCTTGTTGTTCT
‑3’
CsBES反义引物
‑
2：5
’‑
TTTGATTTGGGGGAGGTCTG
‑3’
CsBES反义引物
‑
3：5
’‑
GAAAGGCAGAATGTAAGATG
‑3’

【专利技术属性】
技术研发人员：刘浩然，陈亮，陈杰丹，马建强，段凌霄，金基强，
申请(专利权)人：中国农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：