抗CD2抗体制造技术

本文提供了改进的抗CD2抗体及其在治疗和/或预防免疫系统的慢性或急性病症中的使用方法。本文还提供了通过施用抗CD2抗体或其抗原结合片段和CTLA

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CD2抗体
[0001]相关申请案的交叉引用
[0002]本申请要求保护2021年4月30日提交的美国临时申请第63/182,095号、2021年1月8日提交的美国临时申请第63/135,381号以及2020年6月23日提交的美国临时申请第63/042,844号的利益，每个美国临时申请的内容通过引用整体并入本文。
[0003]电子提交的序列表的引用
[0004]本申请通过引用并入随本申请一起作为文本文件提交的序列表，该文本文件标题为“Sequence_Listing_14526
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005
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228.TXT”，创建于2021年6月15日并且大小为33,862字节。
1.

[0005]本申请涉及经改进的抗CD2抗体及其在治疗和/或预防免疫系统的慢性或急性病症中的用途。还公开了这些抗体在免疫耐受的诱导和维持中的用途。本文还提供了通过施用抗CD2抗体或其抗原结合片段和CTLA
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4共刺激阻滞剂来治疗或预防受试者的免疫相关病症或疾病的方法。还公开了与这些方法一起使用的组合物和试剂盒。
2.
技术介绍

[0006]患有免疫系统病症(例如，免疫系统的慢性炎性病症)的患者必须进行长期治疗以管理他们的病状。因此，潜在的治疗方案必须优先将导致器官损伤和其他不利影响的免疫抑制剂的使用减到最少，同时治疗疾病的症状并维持患者的生活质量。因此，迫切需要将标准免疫抑制疗法的不利副作用减到最少的疗法。此外，需要改进的方法和组合物来治疗免疫相关病症，诸如自身免疫性疾病和与器官移植相关的免疫病症，因为器官移植的长期结果仍然不能令人满意。供体移植物的慢性排斥以及与免疫抑制剂长期使用相关的健康问题仍然是手术的严重并发症。迫切需要可以在数月或数年的过程中向患者长期施用而没有标准免疫抑制疗法的不利副作用的疗法。还需要可以治疗免疫相关疾病的急性症状的方法和组合物，例如通过减轻病症的体征和症状，降低病症复发的可能性，预防器官或组织移植排斥，和/或预防在可能发展免疫病症的受试者中发生免疫病症。
[0007]西利珠单抗(siplizumab)是一种针对人CD2糖蛋白的人源化IgG1κ单克隆抗体，CD2糖蛋白是一种在几乎所有成熟人T细胞和绝大多数胸腺细胞上表达的受体(Bierer BE,Burakoff SJ.,Immunol Rev.1989；111:267
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294)。CD2通过它与配体LFA
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3(CD58)的相互作用来促进T细胞附着于抗原呈递细胞(van der Merwe PA,Barclay AN,Mason DW等人，Biochemistry.1994；33(33):10149
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10160)。CD2与LFA
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3的结合也导致T细胞活化所必需的细胞内信号级联，赋予该分子重要的共刺激功能(Bockenstedt LK.等人，J Immunol.1988；141(6):1904
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1911)。
[0008]西利珠单抗已用于造血细胞移植和肾
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骨髓联合移植(CKBMT)的耐受性诱导的预处理方案。西利珠单抗全局耗竭T细胞，同时在移植后早期富集调控性T细胞(Treg)。在进行造血细胞移植以治疗恶性肿瘤的受者(Shaffer J.等人，Exp Hematol.2007；35(7):1140
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1152)和CKBMT受者(Andreola G.等人，Am J Transplant.2011；11(6):1236
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1247)中，在T细胞重建阶段观察到调控性T细胞(Treg)的显著早期富集。
[0009]随着单克隆抗体在各种类型疾病的治疗中变得不可或缺，对这些治疗性抗体的工程改造变得更加复杂，以便设计和产生针对特定目的优化的抗体(Kellner等人，Transfus Med Hemother.2017年9月；44(5):327
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336)。Fc的修饰是此类工程改造的实例。Fc介导的效应子功能，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，是一些治疗方案的重要组成部分，同时也是其他治疗方案的障碍。使Fc信号传导沉默的修饰可有益于ADCC会对其产生进一步并发症的患者。对于需要长期免疫抑制的患者，经工程改造以提供免疫调控活性但缺乏ADCC活性的抗体将是有益的。
[0010]本公开还描述了抗C2抗体或其抗原片段与CTLA
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4共刺激阻滞剂的组合疗法，用于治疗或预防受试者的免疫相关疾病或病症。CLTA4以两种主要方式抑制免疫应答—它与CD28竞争B7配体，从而阻断共刺激，它还进行负信号传导以抑制T细胞活化(Krummel和Allison,1995,J Exp Med 182:459
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465；Walunas等人，1994,Immunity 1:405
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413)。阿巴西普(abatacept)，一种由免疫球蛋白IgG1的Fc区融合到CTLA
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4的胞外结构域组成的融合蛋白，与CD80和CD86分子结合，并防止T细胞被活化。贝拉西普(belatacept)是一种由人IgG1免疫球蛋白的Fc片段连接到CTLA
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4的胞外结构域组成的融合蛋白并且与阿巴西普有两个氨基酸不同。与阿巴西普类似，贝拉西普对CD80抗原和CD86抗原具有特异性并充当外周T细胞功能的负调控剂。本公开提供了(抗C2抗体或其抗原片段和CTLA
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4共刺激阻滞剂的)组合疗法与抗C2抗体或其抗原片段或CTLA
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4共刺激阻滞剂中仅一种而非两者施用于受试者时相比，显示出协同作用。
3.
技术实现思路

[0011]无论说明书在哪里讨论“抗CD2抗体”，相同的公开内容也可以适用于“CD2结合分子”，反之亦然。本文提供了一种重组抗CD2抗体，其中所述抗体是IgG抗体，其中所述抗体介导抗体依赖性细胞毒性的能力降低或消除，而所述抗体的免疫调控活性相对于西利珠单抗得以维持。本文还提供了一种重组抗CD2抗体，其中所述抗体是IgG抗体并且重链的恒定区的至少一个共有N
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糖基化位点未糖基化。在某些实施方案中，所述抗体的至少一个共有序列已经突变，使其不再糖基化。本文还提供了一种重组抗CD2抗体，其中Fc区突变，使得所述抗体缺乏与Fc受体和C1q结合的能力。
[0012]本文公开的“抗CD2抗体”或“CD2结合分子”还可包含扩大的抗CD2变体，其中附加组分被添加到Fc区。这些组分可以包括但不限于scFv、CH2结构域和CH3结构域。
[0013]本文提供了一种重组抗CD2抗体，其中所述抗体是IgG抗体并且所述重链的所述恒定区的至少一个共有N
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连接的糖基化位点携带下列寡糖之一：
[0014][0015]其中符号如下：空白三角形：岩藻糖；空白正方形：N
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乙酰葡糖胺；灰色圆圈：甘露糖；以及空白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组抗CD2抗体，其中所述抗体是IgG抗体，其中所述抗体介导抗体依赖性细胞细胞毒性的能力降低或消除，而所述抗体的免疫调控活性相对于西利珠单抗得以维持。2.一种重组抗CD2抗体，其中所述抗体是IgG抗体并且重链的恒定区的至少一个共有N
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糖基化位点未糖基化。3.如权利要求1所述的抗体，其中至少一个共有序列已经突变，使得它不再糖基化。4.一种重组抗CD2抗体，其中所述抗体是IgG抗体并且所述重链的恒定区的至少一个共有N
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连接的糖基化位点携带下列寡糖之一：其中符号如下：空白三角形：岩藻糖；空白正方形：N
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乙酰葡糖胺；灰色圆圈：甘露糖；以及空白圆圈：半乳糖。5.一种重组抗CD2抗体，其中所述抗体是已经在哺乳动物细胞中表达的IgG抗体并且其中所述抗体已经用糖苷内切酶处理。6.如权利要求5所述的抗体，其中所述哺乳动物细胞是NS0鼠骨髓瘤细胞、人细胞或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。7.如权利要求5所述的抗体，其中所述糖苷内切酶是EndoS2。8.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中人CD2的N18、K55和T59的氨基酸残基决定所述抗体对人CD2的亲和力。9.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体介导抗体依赖性细胞细胞毒性的能力降低或消除，而所述抗体的免疫调控活性得以维持。10.如权利要求9所述的抗体，其中所述免疫调控活性可以包括对CD4+/CD25+T细胞的诱导。11.如权利要求9所述的抗体，其中所述免疫调控活性可以包括增加的FoxP3表达。12.如权利要求9所述的抗体，其中所述免疫调控活性可以包括对CD69+NK细胞的阻抑。13.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体为IgG1。
14.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体为IgG2。15.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体为IgG4。16.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体是人源化的。17.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体是全人源的。18.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体相对于IgG包含附加抗体组分。19.如权利要求18所述的抗体，其中所述附加抗体组分可以是所述重组抗CD2抗体的重复区域。20.如权利要求18所述的抗体，其中附加抗体组分连接到所述重组抗CD2抗体的Fc区的C端。21.如权利要求18所述的抗体，其中所述附加抗体组分可以包含结合CD2、CH2结构域或CH3结构域的scFv。22.如权利要求21所述的抗体，其中所述scFv结构域包含VH和VL，其中所述VH的序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一，并且其中所述VL的序列与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一。23.如权利要求21所述的抗体，其中所述CH2结构域包含与SEQ ID NO:18或19的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一的氨基酸序列。24.如权利要求21所述的抗体，其中所述CH3结构域包含与SEQ ID NO:20或21的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一的氨基酸序列。25.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中a.所述抗体的重链可变区CDR 1包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列；并且b.所述抗体的重链可变区CDR 2包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；并且c.所述抗体的重链可变区CDR 3包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列；并且d.所述抗体的轻链可变区CDR 1包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列；并且e.所述抗体的轻链可变区CDR 2包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；并且f.所述抗体的轻链可变区CDR 3包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。26.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体Fc区具有一个或多于一个引起Fc沉默的点突变。27.如权利要求26所述的抗体，其中所述抗体是IgG1。28.如权利要求26所述的抗体，其中所述抗体是IgG2。29.如权利要求26所述的抗体，其中所述抗体是IgG4。30.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体具有与西利珠单抗不同的天然恒定区。31.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体具有与西利珠单抗不同的天然恒定区和所述Fc区中引起Fc沉默的点突变。32.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述重链可变区包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一的氨基酸序列；并且其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一的氨基酸序列。
33.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述重链恒定区包含SEQ IDNO:9、10、11、12或13的氨基酸序列或与SEQ ID NO:9、10、11、12或13的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一的氨基酸序列；并且其中所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:14或15的氨基酸序列或与SEQ ID NO:14或15的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一的氨基酸序列。34.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述重链包含SEQ ID NO:16的核酸序列或与SEQ ID NO:16至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一的核酸序列；并且其中所述轻链包含SEQ ID NO:17的核酸序列或与SEQ ID NO:17至少80％、85％、90％、95％、98％或99％同一的核酸序列。35.一种重组抗CD2抗体，其包含SEQ ID NO:1的重链可变区；SEQ ID NO:2的轻链可变区；SEQ ID NO:9、10、11、12或13的重链恒定区；和SEQ ID NO:14或15的轻链恒定区。36.一种核酸序列，其包含SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:17。37.一种药物制剂，其包含如前述权利要求中任一项所述的抗体。38.如权利要求36所述的药物制剂，其中所述制剂适合于长期施用。39.一种治疗患者体内免疫系统的慢性病症的方法，其中所述方法包括向所述患者施用如权利要求1至38中任一项所述的抗体。40.如权利要求39所述的方法，其中治疗所述患者持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月，或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19年或至少20年的时间段。41.一种在移植接受者中维持对移植物的免疫耐受的方法，其中所述方法包括向所述移植接受者施用如权利要求1至38中任一项所述的抗体。42.如权利要求41所述的方法，其中向所述移植接受者施用所述抗体持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月，或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19年或至少20年的时间段。43.如权利要求39或40所述的方法，其中所述免疫系统的急性或慢性病症是移植物抗宿主病(GVHD)、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、1型糖尿病、银屑病、溃疡性结肠炎、炎性肠病(克罗恩氏病)、乳糜泻、舍格伦氏病、狼疮、多发性硬化、局灶性节段性肾小球硬化、特应性皮炎、肌萎缩性侧索硬化、原发性胆汁性肝硬化以及原发性硬化性胆管炎和严重哮喘。44.一种在有需要的受试者中治疗或预防免疫相关病症或疾病的方法，所述方法包括：a)向所述受试者施用抗CD2抗体或其抗原结合片段；并且b)向所述受试者施用CTLA
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4共刺激阻滞剂。45.如权利要求44所述的方法，其中所述抗CD2抗体或其抗原结合片段包括Fc沉默抗CD2抗体、BTI
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322、CB.219、LO
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CD2b、西利珠单抗和/或其抗原结合片段中的至少一种。46.如权利要求44所述的方法，其中所述抗CD2抗体或其抗原结合片段包含：a)SEQ ID NO:3的重链可变区CDR 1；b)SEQ ID NO:4的重链可变区CDR 2；c)SEQ ID NO:5的重链可变区CDR 3；d)SEQ ID NO:6的轻链可变区CDR 1；e)SEQ ID NO:7的轻链可变区CDR 2；和
f)SEQ ID NO:8的轻链可变区CDR 3。47.如权利要求44
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47中任一项所述的方法，其中所述抗CD2抗体是人源化抗体。48.如权利要求44
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47中任一项所述的方法，其中所述抗CD2抗体是西利珠单抗或其抗原结合片段。49.如权利要求44
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49中任一项所述的方法，其中所述CTLA
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4共刺激阻滞剂是包含人IgG1免疫球蛋白的Fc片段和CTLA4的胞外结构域的融合蛋白。50.如权利要求44
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49中任一项所述的方法，其中所述CTLA
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4共刺激阻滞剂包含与SEQ ID NO:22约或至少约80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一的序列。51.如权利要求44
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51中任一项所述的方法，其中所述CTLA
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4共刺激阻滞剂包含与SEQ ID NO:22同一的序列。52.如权利要求44
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51中任一项所述的方法，其中所述CTLA
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4共刺激阻滞剂是贝拉西普。53.如权利要求44
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49中任一项所述的方法，其中所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：大卫，
申请(专利权)人：泽拉里翁马耳他有限公司，
类型：发明
国别省市：