对粘蛋白-1特异的抗体及其使用方法技术

本公开提供了对粘蛋白1特异的抗体。还提供了编码本公开的抗体的一个或两个可变链的核酸，以及包括此类核酸的细胞。还提供了包括本公开的抗体的组合物，在一些情况下，包括药物组合物。还提供了制备和使用本公开的抗体的方法。在某些方面，提供了包括向患有细胞增殖性病症的个体施用治疗有效量的本公开的抗体的方法，其中向个体施用抗体以增强对细胞增殖性病症的异常增殖细胞的免疫反应，例如T细胞反应。抗体在各种诊断和监测应用中是有用的，其也被提供。其也被提供。其也被提供。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对粘蛋白
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1特异的抗体及其使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年7月31日提交的美国临时申请号63/059,497的优先权权益，其公开内容通过引用并入本文。
[0003]通过引用并入以文本文件提供的序列表
[0004]本文以文本文件“RDWD
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035WO SEQ LIST_ST25.txt”提供序列表，该文件创建于2021年7月27日，并且具有29KB的大小。该文本文件的内容通过引用以其整体并入本文。
[0005]介绍
[0006]粘蛋白
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1(也被称为粘蛋白1或MUC1)是粘蛋白家族的成员。粘蛋白是在上皮表面形成保护性粘液屏障中发挥重要作用的O
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糖基化蛋白质。MUC1在上皮细胞的顶面表达，这些上皮细胞排列在许多不同组织(包括肺部、乳房、胃和胰腺)的粘膜表面。该蛋白被蛋白水解裂解为形成异二聚体复合物的α和β亚基。N
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末端α亚基在细胞粘附中发挥作用，并且C
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末端β亚基参与细胞信号传导。该蛋白的过度表达、异常的细胞内定位和糖基化的变化与癌相关。
[0007]本领域需要安全且有效的靶向MUC1的剂，用于诊断和治疗MUC1相关的病况，诸如癌症。
[0008]概要
[0009]本公开提供了对MUC1特异的抗体。还提供了编码本公开的抗体的一个或两个可变链多肽的核酸，以及包括此类核酸的细胞。还提供了包括本公开的抗体的组合物，在一些情况下，包括药物组合物。还提供了制备和使用本公开的抗体的方法。在某些方面，提供了包括向患有细胞增殖性病症的个体施用治疗有效量的本公开的抗体的方法，其中向个体施用抗体以增强对细胞增殖性病症的异常增殖细胞的免疫反应，例如T细胞反应。抗体在各种诊断和监测应用中是有用的，其也被提供。
附图说明
[0010]图1显示根据尺寸排阻色谱法(SEC)所确定的，抗MUC1抗体、MUC1gB06、MUC1 G12和MUC1 H02分别超过99％、超过99％和超过98％是单体的。
[0011]图2A
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2C显示根据ELISA所评估的，抗MUC1抗体、MUC1gB06、MUC1 G12和MUC1 H02结合至重组20mer MUC1糖基化生物素，但不结合至重组60mer MUC1非糖基化生物素或糖基化诱饵肽根据。
[0012]图3A
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3B显示通过抗MUC1抗体、MUC1gB06、MUC1 G12和MUC1H02与未涂覆的链亲和素或Maxisorp板的结合水平。
[0013]图4显示叠加直方图，其显示了一式三份测试的指示抗体与指定细胞系的结合。
[0014]图5显示交错直方图(staggered histograms)，其显示了指示抗体与指定细胞系的结合。
[0015]图6显示通过差示扫描荧光法确定的B06、G12和H02抗MUC1抗体的CH2和Fab区的熔解温度。
[0016]图7显示抗MUC1抗体B06针对T47D异种移植的体内功效。n＝10只小鼠/组；箭头表示施用抗体或媒介物的天数。
[0017]定义
[0018]术语“抗体”和“免疫球蛋白”包括任何同种型的抗体或免疫球蛋白(例如IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)、IgE、IgD、IgA、IgM等)；整个抗体(例如包括四聚体，四聚体又包括重链和轻链多肽的两个二聚体的抗体)；单链抗体(例如scFv)；保留与抗原特异性结合的抗体片段(例如整个链或单链抗体的片段)，包括但不限于Fab、Fv、scFv和Fd片段；嵌合抗体；人源化抗体；单链抗体以及包含抗体的抗原结合部分和非抗体蛋白的融合蛋白。抗体可以是例如用放射性同位素、产生可检测产物的酶、荧光蛋白等可检测标记的。抗体可以进一步与其他部分诸如特异结合对的成员，例如生物素(生物素
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亲和素特异结合对的成员)等共轭。抗体也可以与固体支持物，包括但不限于聚苯乙烯板或珠子等结合。该术语还包括Fab
’
、Fv、F(ab
’
)2和或其他保留与抗原特异性结合的抗体片段以及单克隆抗体。抗体可以是单价的或双价的。
[0019]“抗体片段”包括完整抗体的一部分，例如完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2和Fv片段；双抗体；线性抗体(Zapata等，Protein Eng.8(10):1057
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1062(1995))；单链抗体分子；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段，每个片段具有单个抗原结合位点以及残留的“Fc”片段，名称反映了容易结晶的能力。胃蛋白酶处理产生具有两个抗原结合位点并且仍然能够交联抗原的F(ab
’
)2片段。
[0020]“Fv”是最小的含有完整抗原识别和结合位点的抗体片段。该区域由紧密地、非共价缔合的一个重链和一个轻链可变结构域的二聚体组成。在该构造中，每个可变结构域的三个CDR相互作用以在VH
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VL二聚体的表面上确定抗原结合位点。共同地，六个CDR将抗原结合特异性赋予抗体。然而，即使单一的可变结构域(或仅包括三个对抗原特异的CDR的Fv的一半)，尽管亲和力低于整个结合位点，也具有识别和结合抗原的能力。
[0021]“Fab”片段还含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(CH1)。Fab片段通过在重链CH1结构域的羧基末端处添加几个残基(包括一个或多个来自抗体铰链区的半胱氨酸)而区别于Fab
’
片段。Fab
’‑
SH是本文对其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离巯基的Fab
’
的命名。F(ab
’
)2抗体片段最初是作为成对的Fab
’
片段产生的，在它们之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其他化学连接也是已知的。
[0022]任何脊椎动物物种的抗体(免疫球蛋白)的“轻链”可以基于它们的恒定结构域的氨基酸序列被分配为两个明显不同的类型(称为κ和λ)之一。基于它们重链的恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白可以被分配为不同的类别。有五个主要的免疫球蛋白类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，这些的几个可以被进一步划分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。
[0023]“单链Fv”或“sFv”抗体片段包括抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单一多肽链中。在一些方面，Fv多肽进一步包括在VH和VL结构域之间的多肽连接子(linker)，这使得sFv能够形成期望的用于抗原结合的结构。
[0024]术语“双抗体”指的是具有两个抗原结合位点的小抗体片段，该片段包括与同一多肽链(V
H
‑
V
L...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种特异地结合至粘蛋白
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1(MUC
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1)的抗体，所述抗体包括：可变重(VH)链，其包括具有下述序列的VH链的重链CDR1
‑
3(HCDR1
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3)：EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKVSGYTFTDHTMHWIKQRPGKGLEWMGYFYPRDDSTNYNEKFKGRVTLTADKSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGLRYALDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:1)；以及可变轻(VL)链，其包括具有下述序列的VL链的轻链CDR1
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3(LCDR1
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3)：EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVSSSYLYWYQQKPGQAPRLWIYGTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYAWSPPTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:2)；EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVGSSNLYWYQQKPGQAPRLWIYRSTKLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYRWSPPTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:3)；或EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVSSSYLYWYQQKPGQAPRLWIIGTSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDAAVYYCHQYSWSPPTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:4)。2.根据权利要求1所述的抗体，其中VH链包括与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的抗体，其中VL链包括与SEQ ID NO:2、3或4所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的抗体，其中，根据Kabat定义：HCDR1包括氨基酸序列DHTMH(SEQ ID NO:17)；HCDR2包括氨基酸序列YFYPRDDSTNYNEKFKG(SEQ ID NO:18)；HCDR3包括氨基酸序列GLRYALDY(SEQ ID NO:9)；LCDR1包括氨基酸序列RASSSVSSSYLY(SEQ ID NO:10)；LCDR2包括氨基酸序列GTSNLAS(SEQ ID NO:11)；以及LCDR3包括氨基酸序列HQYAWSPPT(SEQ ID NO:12)。5.根据权利要求1
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3中任一项所述的抗体，其中，根据Kabat定义：HCDR1包括氨基酸序列DHTMH(SEQ ID NO:17)；HCDR2包括氨基酸序列YFYPRDDSTNYNEKFKG(SEQ ID NO:18)；HCDR3包括氨基酸序列GLRYALDY(SEQ ID NO:9)；LCDR1包括氨基酸序列RASSSVGSSNLY(SEQ ID NO:13)；LCDR2包括氨基酸序列RSTKLAS(SEQ ID NO:14)；以及LCDR3包括氨基酸序列HQYRWSPPT(SEQ ID NO:15)。6.根据权利要求1
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3中任一项所述的抗体，其中，根据Kabat定义：HCDR1包括氨基酸序列DHTMH(SEQ ID NO:17)；HCDR2包括氨基酸序列YFYPRDDSTNYNEKFKG(SEQ ID NO:18)；HCDR3包括氨基酸序列GLRYALDY(SEQ ID NO:9)；LCDR1包括氨基酸序列RASSSVSSSYLY(SEQ ID NO:10)；LCDR2包括氨基酸序列GTSNLAS(SEQ ID NO:11)；以及LCDR3包括氨基酸序列HQYSWSPPT(SEQ ID NO:16)。7.根据权利要求1
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3中任一项所述的抗体，其中抗体是人源化抗体或嵌合抗体。8.根据权利要求1
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3中任一项所述的抗体，其中抗体选自由下述组成的组：IgG、Fv、单链抗体、scFv、Fab、F(ab
’
)2或Fab
’
。
9.根据权利要求1
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3中任一项所述的抗体，其中抗体是结合至MUC1的抗体片段。10.根据权利要求1

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：R，
类型：发明
国别省市：