本发明专利技术涉及一种分子标记，尤其是一种快速鉴定早期光唇鱼遗传性别的分子标记及光唇鱼的性别鉴定方法。属于鱼类性别鉴定技术领域。一种快速鉴定光唇鱼遗传性别的方法，包括以下步骤：制备DNA提取液；进行PCR扩增反应，得到PCR产物，引物的核苷酸序列为：GGTCAACAAACAAACTCTCCTCGATT；琼脂糖凝胶电泳，结果判定：如果电泳结果显示有2个条带则为雄性，只有单一条带则为雌性。本发明专利技术提供的分子标记能够用于全雌或高雌性比光唇鱼培育，有助于该产业链的快速发展。助于该产业链的快速发展。助于该产业链的快速发展。
【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴定早期光唇鱼遗传性别的分子标记及其应用
[0001]本专利技术涉及一种分子标记，尤其是一种快速鉴定早期光唇鱼遗传性别的分子标记及其应用。属于鱼类性别鉴定
技术介绍
[0002]光唇鱼(Acrossocheilus fasciatus)俗称淡水石斑，隶属于鲤科(Cyprinidae)、鲃亚科(Barbinae)、光唇鱼属(Acrossocheilus)，自然条件下生活于山涧溪流或江河中上游的急流环境中。目前作为一种具有高经济价值的特色溪鱼地方品种进行推广养殖，近年来已成为浙西山区重点开发的小型经济鱼类。
[0003]光唇鱼存在典型的性别二态性生长特征，即雌鱼的生长速度明显快于雄鱼，因此突破单性育种技术进行全雌或高雌性比苗种培育可能有利于提高养殖产量及经济效益。为此，开发光唇鱼性别紧密连锁的分子标记，是实施全雌单性育种技术的关键因子，也可为揭示光唇鱼性别决定调控机制提供重要信息。申请号为CN1880478A的中国专利技术专利申请公开了一种半滑舌鳎雌性特异AFLP片段及遗传性别鉴定的PCR方法，该法具有快速、准确、灵敏等优点；但是并不适用于光唇鱼的性别鉴定。目前，尚未见到有效的光唇鱼性别连锁分子标记的相关报道。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的在于提供一种适于快速鉴定早期光唇鱼遗传性别的DNA分子标记。为光唇鱼全雌苗种培育和性别调控机制提供重要的数据支撑。
[0005]为实现上述目的，本专利技术具体的技术方案如下所示：
[0006]一种快速鉴定早期光唇鱼遗传性别的分子标记，其核苷酸序列为SEQ ID NO 1：GGTCAACAAACAAACTCTCCTCGATT。
[0007]本专利技术首先提供了一种基于2b
‑
RAD简化基因组高通量测序技术获得的特异性分子标记。为了便于通过PCR手段快速检测光唇鱼幼苗阶段的遗传性别。
[0008]本专利技术的另一个目的是提供用于检测所述分子标记的引物对。
[0009]用于检测上述分子标记的引物对，所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO 2：TTTCAACGTCTTGTGCAAAGAGTC；所述下游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO 3：GCCATTCCTGAAAATCTGCATAAC。
[0010]本专利技术对光唇鱼基因组进行了Survey分析，根据Survey结果获取分子标记的两端序列，同时提供用于检测所述分子标记的引物对，即SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3。
[0011]其次，本专利技术还提供了通过上述特异性标记进行PCR扩增快速鉴定光唇鱼遗传性别的方法。
[0012]一种快速鉴定光唇鱼遗传性别的方法，包括以下步骤：
[0013]a、制备DNA提取液，剪取少量的尾鳍组织，在离心管中进行组织破碎，加入DNA裂解液和Proteinase K，孵育，金属浴加热，降至室温，离心，上清即为DNA粗制提取液；
[0014]b、以提取的上述DNA粗制提取液为模板进行PCR扩增反应，得到PCR产物；引物为权利要求1所述的特异性分子标记；
[0015]c、将上述PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果判定：如果电泳结果显示有2个条带则为雄性，只有单一条带则为雌性。
[0016]作为上述技术方案优选，步骤a)中，利用快速核酸裂解方法制备DNA提取液。
[0017]作为上述技术方案优选，步骤a)中，所述DNA裂解液为universal DNAzol，用量为200μL；Proteinase K的规格为20mg/mL，用量为2μL。
[0018]作为上述技术方案优选，步骤a)中，具体操作为，利用快速核酸裂解方法制备DNA提取液，剪取少量的尾鳍组织，在1.5mL离心管中进行组织破碎，加入universal DNAzol裂解液200μL和20mg/mL的Proteinase K 2μL，55℃孵育30min，随后95℃金属浴加热5min后降至室温，在室温下轻微离心使组织材料沉淀，上清即为DNA粗制提取液。
[0019]作为上述技术方案优选，步骤b)中，PCR反应体系为：DNA模板2μL；2x Super Pfx MasterMix 12.5μL，上下游引物各2μL，灭菌水补足至25μL。
[0020]作为上述技术方案优选，步骤b)中，PCR反应程序为：98℃，1min；98℃，10s；55℃，20s；72℃，30s；35个循环；72℃，5min。
[0021]作为上述技术方案优选，步骤c)中，琼脂糖凝胶浓度为1％。
[0022]作为上述技术方案优选，步骤c)中，结果判定：如果电泳结果显示1条300bp左右的条带和1条和500bp左右的条带，则判定为雄性；如果电泳结果显示1条300bp左右的条带，则判定为雌性。
[0023]综上所述，本专利技术具有以下有益效果：
[0024]1)、本专利技术筛选获得了能用于早期光唇鱼遗传性别鉴定的分子标记，对于后期的单性育种开发具有重要的辅助作用；
[0025]2)、本专利技术实施性别鉴定的方法，无需进行基因组提取，只需要极少量的的组织即可实现性别鉴定，且待测个体还能继续存活；
[0026]3)、通过本专利技术对光唇鱼进行性别鉴定，具有较高的准确性；
[0027]4)、本专利技术提供的分子标记能够用于全雌或高雌性比光唇鱼培育，有助于该产业链的快速发展。
附图说明
[0028]图1是本专利技术实施例1～10的光唇鱼性别特异性标记图；
[0029]图中，M：标准分子量。
具体实施方式
[0030]以下结合附图对本专利技术进行进一步的解释说明。本具体实施方式仅仅是对本专利技术的解释，并不是对本专利技术的限制，本领域技术人员在阅读了本专利技术的说明书之后，所做的任何改变，只要在权利要求书的范围内，都将受到专利法的保护。
[0031]实施例1
[0032]快速鉴定光唇鱼遗传性别的方法，具体步骤如下：
[0033]a、利用快速核酸裂解方法制备DNA提取液，剪取已知雌性光唇鱼(雌性1号)少量的
尾鳍组织，在1.5mL离心管中进行组织破碎，加入universal DNAzol裂解液200μL和20mg/mL的Proteinase K 2μL，55℃孵育30min，随后95℃金属浴加热5min后降至室温，在室温下轻微离心使组织材料沉淀，上清即为DNA粗制提取液；
[0034]b、以提取的上述核酸溶液为模板进行PCR扩增反应，引物为特异性分子标记，PCR反应体系为：DNA模板2μL；2x Super Pfx MasterMix(北京康为)12.5μL，上下游引物各2μL，灭菌水补足至25μL；PCR反应程序为：98℃，1min；98℃，10s；55℃，20s；72℃，30s；35个循环；72℃，5min；
[0035]c、将上述PCR产物进行1％的琼脂糖凝胶电泳，电泳结果：如图1所示，只有300bp左右的单一条带。判本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定早期光唇鱼遗传性别的分子标记，其特征在于：所述分子标记的核苷酸序列为SEQ ID NO 1：GGTCAACAAACAAACTCTCCTCGATT。2.一种用于检测权利要求1所述分子标记的引物对，其特征在于：所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO 2：TTTCAACGTCTTGTGCAAAGAGTC；所述下游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO 3：GCCATTCCTGAAAATCTGCATAAC。3.一种快速鉴定光唇鱼遗传性别的方法，包括以下步骤：a、制备DNA提取液：在离心管中进行组织破碎，加入DNA裂解液和Proteinase K，孵育，金属浴加热，降至室温，离心，上清即为DNA粗制提取液；b、以提取的上述DNA粗制提取液为模板进行PCR扩增反应，得到PCR产物；引物为权利要求1所述的特异性分子标记；c、将上述PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果判定：如果电泳结果显示有2个条带则为雄性，只有单一条带则为雌性。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤a)中，利用快速核酸裂解方法制备DNA提取液。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤a)中，所述DNA裂解液为universal DNAzol，用量为200μL；Prote...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑建波，李飞，姜建湖，郭建林，刘士力，程顺，迟美丽，蒋文枰，刘一诺，
申请(专利权)人：浙江省淡水水产研究所，
类型：发明
国别省市：
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