一种二氢高红霉素中基因毒性杂质的定量检测方法技术

本申请提供一种二氢高红霉素中基因毒性杂质的定量检测方法，属于糖类及其衍生物技术领域。在二氢高红霉素中加入二氯甲烷，超声处理后，得供试品溶液；对供试品溶液进行基因毒性杂质的测定，所述基因毒性杂质包括甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯。本方案具有检测灵敏度高、定性定量进行测定等优点。性定量进行测定等优点。性定量进行测定等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种二氢高红霉素中基因毒性杂质的定量检测方法


[0001]本申请涉及一种二氢高红霉素中基因毒性杂质的定量检测方法，属于糖类及其衍生物


技术介绍

[0002]基因毒性杂质又称遗传毒性杂质，是指在药物中以痕量水平存在，能直接或间接损伤DNA，导致基因突变或体内诱变并有可能致癌的杂质。在制药行业中，磺酸或磺酰卤类试剂常被作为用作烷基化试剂和催化剂，还常应用于药物化学合成的纯化或成盐步骤。合成反应或重结晶步骤中任何残留醇的存在都可能导致形成磺酸酯。其中甲磺酸甲酯以及甲磺酸乙酯已被临床研究证明具有基因毒性，因此利用各种分析技术手段研究检测甲磺酸酯是非常必要的，对于此类基因毒性杂质的测定，除了需要克服灵敏度、选择性以及样品基质干扰等挑战外，磺酸酯的高反应活性也为分析方法的开发带来了难度。
[0003]大环内酯类化合物作为链霉菌产生的广谱抗生素，具有抑菌、高浓度杀菌等特点，且其毒性低，副作用小，安全性高，在临床治疗中具有重要作用，目前已经成为临床应用仅次于β
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内酰胺类抗生素的第二大类抗感染药物。大环内酯产品的一个关键中间体是二氢高红霉素，是合成阿奇霉素、泰拉霉素等15元环的大环内酯药物的重要原料。因此在二氢高红霉素中能够定性并且定量检测出其中的甲磺酸酯类基因毒性杂质，可以有效的防范甲磺酸酯类基因毒性杂质在前期合成大环内酯类产品的引入，对于所有大环内脂类产品是至关重要的。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本申请提供一种二氢高红霉素中基因毒性杂质特别是甲磺酸酯类基因毒性杂质的检测方法，能够对二氢高红霉素中的甲磺酸甲酯以及甲磺酸乙酯在微量水平上进行定性以及定量的测定。
[0005]具体地，本申请是通过以下方案实现的：
[0006]一种二氢高红霉素中基因毒性杂质的定量检测方法，包括以下步骤：
[0007]1)在二氢高红霉素中加入二氯甲烷，进行超声后得供试品溶液。
[0008]2)检测条件：采用GC
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MS/MS作为检测仪器对基因毒性杂质进行测定，所述基因毒性杂质包括甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯。
[0009]步骤1)中，称取二氢高红霉素100mg置于螺口瓶中，加入二氯甲烷2.0ml超声使供试品完全溶解。
[0010]步骤2)中，气相色谱测定条件为：
[0011]色谱柱为VF
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624ms；柱长为30m，直径为0.25mm，膜厚为1.4μm；
[0012]进样器温度为220℃；
[0013]柱温：初温40℃，保持1min，然后以20℃/min升温至200℃，保持1min。
[0014]进样模式：恒流直接进样载气：氦气柱流速：1.0ml/min
[0015]进样口分流比：5:1进样体积：1.0μlMS传输线温度：230℃
[0016]步骤2)中，采用的质谱测定条件为：
[0017]电离能：70eV离子源温度：250℃四级杆温度：150℃/150℃
[0018]采集信息：
[0019]扫描模式扫描时间(min)增益因子MRM7.3～7.91MRM7.9～8.53
[0020]步骤2)中，驻留时间为100ms～150ms
[0021]步骤2)中，定性定量的离子对和碰撞能如下：
[0022]采集段一：
[0023]化合物前级离子产物离子碰撞能MMS804840eVMMS80655eV
[0024]采集段二：
[0025]化合物前级离子产物离子碰撞能EMS804840eVEMS10945.12eV
[0026]本申请具有以下优点：
[0027]本申请提供的检测方法具有操作简单、抗杂质干扰能力强和灵敏度高等优点。经方法学验证；甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的检测限均为0.94ng/ml；定量限为1.88ng/ml，在3.75ng/ml～150ng/ml表现出良好的线性，线性相关性均在0.9995以上。该方法的平均回收率均在85％～105％之间，RSD均小于3.2％，充分表明其准确度高。
[0028]本申请检测方法采用的MRM模式(multiplereactionmonitoring，质谱多反应监测)，选择各待测成分特异性较高的离子对进行监测分析，与GC
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MS方法比较通过对比定量离子与定性离子比值对目标杂质进行定性其专属性更好，抗干扰能力更强。
[0029]本申请可以很好的应用于二氢高红霉素中甲磺酸甲酯以及甲磺酸乙酯的日常检测。对大环内脂类药品日常监督检验具有十分重要的意义，同时有助于提升该药品的质量，进一步降低临床用药风险，保证患者用药安全。
附图说明
[0030]图1实施例1中空白溶剂(二氯甲烷)色谱图；
[0031]图2实施例1中甲磺酸甲酯标准溶液色谱图；
[0032]图3实施例1中甲磺酸乙酯标准溶液色谱图；
[0033]图4实施例1中对照品溶液的色谱图；
[0034]图5实施例1中甲磺酸甲酯线性关系试验结果；
[0035]图6实施例1中甲磺酸乙酯线性关系试验结果；
[0036]图7实施例1的定量限色谱图；
[0037]图8实施例1检出限色谱图。
具体实施方式
[0038]下面结合具体实施例进一步阐述本专利技术，但不限于本实施的范围。在以下各实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法，所用试剂未标明来源和规格的均为市售分析纯或色谱纯。
[0039]实施例1
[0040]本实施例检测方法和检测所用设备如下：
[0041]1)仪器和试剂
[0042]仪器：Agilent 8890B
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7000D气相色谱
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串联质谱仪；电子天平，梅特勒XS105。
[0043]试剂：二氯甲烷(分析纯)，国药集团。
[0044]对照品来源：甲磺酸甲酯，SIGMA，批号：102531869；甲磺酸乙酯，SIGMA，批号：102474759。
[0045]供试品溶液配制方法：称取二氢高红霉素供试品约100mg置于螺口瓶中，加入2.0ml稀释剂溶解。
[0046]2)色谱与质谱条件
[0047]气相色谱条件：
[0048]使用色谱柱为VF
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624ms；柱长为30m，直径为0.25mm，膜厚为1.4μm；
[0049]柱温：初温40℃，保持1min，然后以20℃/min升温至200℃，保持1min；
[0050]进样器温度为220℃；进样口分流比：5:1；进样体积：1.0μl；
[0051]柱流速：1.0ml/min；进样模式：恒流直接进样；MS传输线温度：230℃
[0052]载气：氦气；碰撞气：氮气
[0053]质谱条件：电离能：70eV；离子源温度：250℃；四级杆温度：150℃/150℃。
[0054]表1：质谱信息
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种二氢高红霉素中基因毒性杂质的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)在二氢高红霉素中加入二氯甲烷，超声处理后，得供试品溶液；2)检测条件：以GC
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MS/MS作为检测仪器，对供试品溶液进行基因毒性杂质的测定，所述基因毒性杂质包括甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯。2.根据权利要求1所述的一种二氢高红霉素中基因毒性杂质的定量检测方法，其特征在于：步骤1)中，每2.0ml二氯甲烷中对应的二氢高红霉素质量为100～300mg。3.根据权利要求1所述的一种二氢高红霉素中基因毒性杂质的定量检测方法，其特征在于，步骤2)中，检测仪器的气相色谱测定条件如下：色谱柱为VF
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624ms；柱长为30m，直径为0.25mm，膜厚为1.4μm；进样器温度为220℃；柱温：初温40℃，保持1min，然后以20℃/min升温至200℃，保持1min；进样模式：恒流直接进样载气：氦气柱流速：0.9～1.1ml/min；进样口分流比：5:1进样体积：1.0μl MS传输线温度：230℃。4.根据权利要求1所述的一种二氢高红霉素中基因毒性杂质的定量检测方法，其特征在于，步骤2)中，检测仪器的质谱测定条件为：...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭晶，王霞，周志奎，郭建颖，索喆丹，罗敏，
申请(专利权)人：浙江国邦药业有限公司，
类型：发明
国别省市：