本发明专利技术公开了一种同时检测合胞病毒和新型冠状病毒抗原的胶体金层析试纸条，所述试纸条包括底板、样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫，样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫按层析方向顺次搭接粘贴在底板上，结合垫上包被有胶体金标记的合胞病毒检测抗体和新型冠状病毒检测抗体；NC膜上设置有两条检测线和一条质控线，两条检测线分别包被有合胞病毒捕获抗体和新型冠状病毒捕获抗体，质控线上包被有葡萄球菌A蛋白，本申请的一种同时检测合胞病毒和新型冠状病毒抗原的胶体金层析试纸条，仅一次取样，可以同时检测合胞病毒抗原和新型冠状病毒抗原，可以快速鉴别诊断，及时选择有效抗病毒治疗提供依据。据。
【技术实现步骤摘要】
一种同时检测合胞病毒和新型冠状病毒抗原的胶体金层析试纸条
[0001]本专利技术涉及生物医学检测的
，尤其是涉及一种同时检测合胞病毒和新型冠状病毒抗原的胶体金层析试纸条。
技术介绍
[0002]呼吸道合胞病毒是一种高度接触传染的副粘病毒，随着病情的发展，合胞病毒不仅可以引起上呼吸道感染，还有可能导致肺炎、支气管炎等下呼吸道疾病，可引起较高的病死率；快速检测合胞病毒对疾病的及时诊断和预防医院感染有着非常重要的作用。
[0003]引发新型冠状病毒感染的新型冠状病毒属于RNA病毒，属于β属冠状病毒；其存在三大严重性：一是传染不分种属；二是冠状病毒蛋白能进一步复制；三是变异快；此外无症状感染者很难识别。因此，早诊断早发现有着非常重要的作用。
[0004]目前临床检验中应用的针对呼吸道合胞病毒和新型冠状病毒的方法主要有PCR法和胶体金法，为单一病毒检测或者与甲乙流联合检测。如呼吸道合胞病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)、新型冠状病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)、呼吸道合胞病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)、新型冠状病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)；而目前所有的荧光PCR检测方法仍存在样本处理繁琐、检测时间长，对检测人员专业性要求高等缺点，胶体金法也存在联合检测的空白。以上不足，导致目前同时诊断呼吸道合胞病毒和新型冠状病毒在临床检验中的应用受到了限制，无法满足快速鉴别诊断的需求。
技术实现思路
[0005]针对现有技术的不足，本申请提供了一种同时检测合胞病毒和新型冠状病毒抗原的胶体金层析试纸条。
[0006]第一方面，本申请提供一种同时检测合胞病毒和新型冠状病毒抗原的胶体金层析试纸条，采用如下的技术方案：一种同时检测合胞病毒和新型冠状病毒抗原的胶体金层析试纸条，所述试纸条包括底板、样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫，样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫按层析方向顺次搭接粘贴在底板上，结合垫上包被有胶体金标记的合胞病毒检测抗体和新型冠状病毒检测抗体；NC膜上设置有两条检测线和一条质控线，两条检测线分别包被有合胞病毒捕获抗体和新型冠状病毒捕获抗体，质控线上包被有葡萄球菌A蛋白。
[0007]两条检测线和一条质控线之间平行设置、且互相间隔3.5mm，分别为R检测线、N检测线和C质控线；R检测线靠近结合垫，C质控线靠近吸水垫，N检测线位于R检测线和C质控线中间。
[0008]在一个具体的可实施方案中，质控线制备方法，步骤如下：(1)用磷酸二氢钠
‑
β环糊精溶液稀释葡萄球菌A蛋白，得到质控线工作液；(2)将质控线工作液在NC膜上进行划膜；
(3)将带有质控线的NC膜进行干燥，即可得到质控线。
[0009]通过采用上述技术方案，β环糊精是淀粉经酸解环化生成的产物，本申请中加入的β环糊精可以包埋硝酸纤维膜上的部分孔径，减少不同批次硝酸纤维膜的孔径差异，提高试剂盒的精密度；同时β环糊精因特有的圆筒形空间结构，可以给硝酸纤维膜跟蛋白之间搭建稳定的桥梁，保护抗原抗体结合位点，从而可以提高试剂盒的精密度。
[0010]葡萄球菌A蛋白具有和人及许多动物蛋白结合的能力，具有广泛性；本申请中加入葡萄球菌A蛋白后，不需要额外标记质控线蛋白，对标记抗体的动物来源(如鼠抗、兔抗、羊抗等)也没有特定要求。
[0011]优选的，步骤(1)中磷酸二氢钠
‑
β环糊精的浓度为0.01M
‑
0.05M；例如0.01M、0.02M、0.03M、0.04M、0.05M等。
[0012]优选的，步骤(1)中稀释后葡萄球菌A蛋白的浓度为0.25
‑
0.5mg/mL，例如0.25mg/mL、0.35mg/mL、0.45mg/mL、0.5mg/mL等。
[0013]优选的，步骤(3)中干燥的温度为2
‑
30℃，例如2℃、5℃、12℃、14℃、16℃、18℃、20℃、22℃、25℃、28℃、30℃等。
[0014]本申请中采用低温(2
‑
30℃)干燥，低温干燥可降低蛋白干燥过程中的热损耗，提高蛋白与硝酸纤维膜物理结合率，保护蛋白结合位点。
[0015]优选的，步骤(3)中干燥的湿度不大于30％；例如5％、10％、15％、20％、25％、30％等。
[0016]本申请中采用低湿度(不大于30％)干燥，能够缩短干燥时间，保护硝酸纤维膜表面亲水性，提高蛋白与硝酸纤维膜物理结合率，保护蛋白结合位点。
[0017]在一个具体的可实施方案中，质控线制备方法，步骤如下：(1)使用浓度0.01M
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0.05M磷酸二氢钠
‑
β环糊精溶液，稀释葡萄球菌A蛋白至0.25
‑
0.5mg/mL，得到质控线工作液；(2)装有质控线工作液，启动划线仪，设置喷笔喷量1.0ul/cm，X轴位置，Y轴位置，进行划膜，包被质控线；(3)将带有质控线的NC膜在温度为2
‑
30℃，湿度不大于30％，干燥，即可得到质控线。
[0018]在一个具体的可实施方案中，胶体金标记的合胞病毒检测抗体和新型冠状病毒检测抗体的方法，步骤如下：S1、将胶体金溶液，离心，取沉淀；S2、将沉淀用四硼酸钠
‑
氢氧化钠缓冲液复溶至步骤S1胶体金溶液的体积；S3、加入合胞病毒检测抗体进行搅拌后，加入新型冠状病毒检测抗体进行搅拌，再加入BSA和PEG20000进行搅拌；S4、离心，取沉淀，用磷酸保存液复溶至1/10倍的胶体金溶液体积。
[0019]通过采用上述技术方案，本申请通过先对胶体金溶液进行离心，再通过缓冲液进行pH调节，可以去除胶体金制备过程中形状不规则的颗粒，使得胶体金溶液中颗粒大小分布更为均匀。
[0020]本申请中加入四硼酸钠
‑
氢氧化钠缓冲液，提供弱碱环境，胶体金在弱碱环境下带负电荷，同时可以提供稳定体系，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合。
[0021]优选的，步骤S1中胶体金溶液的体积为10mL
‑
40mL，例如10mL、15mL、20mL、25mL、30mL、35mL、40mL。
[0022]优选的，步骤S2中四硼酸钠
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氢氧化钠缓冲液的浓度为0.1M
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0.5M，例如0.1M、0.2M、0.3M、0.4M、0.5M等。
[0023]优选的，步骤S3中合胞病毒检测抗体的加入量为200
‑
300μg；例如200μg、210μg、220μg、230μg、240μg、250μg、260μg、270μg、280μg、290μg、300μg等。
[0024]优选的，步骤S3中新型冠状病毒检测抗体的加入量为200
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300μg；例如200μg、210μg、220μg、230μg、240μg、250μg、260μg、270μg、280μg、290μg、300μg等。
[0025]优选的，步骤本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种同时检测合胞病毒和新型冠状病毒抗原的胶体金层析试纸条，其特征在于：所述试纸条包括底板、样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫，样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫按层析方向顺次搭接粘贴在底板上，结合垫上包被有胶体金标记的合胞病毒检测抗体和新型冠状病毒检测抗体；NC膜上设置有两条检测线和一条质控线，两条检测线分别包被有合胞病毒捕获抗体和新型冠状病毒捕获抗体，质控线上包被有葡萄球菌A蛋白。2.根据权利要求1所述的一种同时检测合胞病毒和新型冠状病毒抗原的胶体金层析试纸条，其特征在于，质控线的制备方法，步骤如下：（1）用磷酸二氢钠
‑
β环糊精溶液稀释葡萄球菌A蛋白，得到质控线工作液；（2）将质控线工作液在NC膜上进行划膜；（3）将带有质控线的NC膜进行干燥，即可得到质控线。3.根据权利要求2所述的一种同时检测合胞病毒和新型冠状病毒抗原的胶体金层析试纸条，其特征在于：步骤（1）中磷酸二氢钠
‑
β环糊精的浓度为0.01M
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0.05M；稀释后葡萄球菌A蛋白的浓度为0.25
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0.5mg/mL。4.根据权利要求2所述的一种同时检测合胞病毒和新型冠状病毒抗原的胶体金层析试纸条，其特征在于：步骤（3）中干燥的温度为2
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30℃，湿度不大于30%。5.根据权利要求1所述的一种同时检测合胞病毒和新型冠状病毒抗原的胶体金层析试纸条，其特征在于，胶体金标记的合胞病毒检测抗体和新型冠状病毒检测抗体的制备方法，步骤如下：S1、将胶体金溶液，离心，取沉淀；S2、将沉淀用四硼酸钠
‑
氢氧化钠缓冲液复溶至步骤S1胶体金溶液的体积；S3、加入合胞病毒检测抗体进行搅拌后，加入新型冠状病毒检测抗体进行...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄磊，周娟，
申请(专利权)人：南京申基医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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