一种基于乳胶法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体的试剂盒及其制备方法技术

本申请公开了一种基于乳胶法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体的试剂盒及其制备方法，一种基于乳胶法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体的试纸条，试纸条包括底板、样品垫、乳胶垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品垫、乳胶垫、硝酸纤维素膜和吸水垫按层析方向顺次搭接粘贴在底板上，硝酸纤维素膜上包被有一条质控线以及三条检测线，质控线包被有羊抗鼠IgG，三条检测线分别包被有GP36抗原、GP41抗原、P24单克隆抗体2；乳胶垫上包被有乳胶标记的GP41、GP36、GP120混合抗原和P24单克隆抗体1；本申请提供的人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体检测试纸条，可实现1份样本同时检测HIV抗体和P24抗原，并可区分HIV抗体为1型或2型。并可区分HIV抗体为1型或2型。

【技术实现步骤摘要】
一种基于乳胶法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体的试剂盒及其制备方法


[0001]本申请涉及生物医学检测的
，尤其是涉及一种基于乳胶法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体的试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]人类免疫缺陷病毒(human immune deficiency virus，HIV)俗称艾滋病病毒，其感染是由两种逆转录病毒HIV
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1和HIV
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2中的一种所导致的感染。HIV
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1在全球造成了大多数HIV感染，但是HIV
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2在西非引起了许多HIV感染。到目前为止医学界尚无艾滋病的有效治疗方案以及防控疫苗，因此，艾滋病防治工作依赖感染初期的准确识别与诊断。
[0003]HIV血清学检测的发展历经第1代HIV抗体检测试剂时窗口期6
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8周，到第4代HIV P24抗原及抗体检测试剂的窗口期2周，对HIV早期诊断的效果优势显著。
[0004]目前国内已有部分厂家采用化学发光法和酶联免疫法成功研制出人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体检测试剂盒，但这两种方法学操作步骤复杂、耗时长、必须借助相关仪器设备，并且操作人员必须经过专业培训才能胜任，从而限制了普通用户的使用。
[0005]雅培采用胶体硒技术成功研制出人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体检测试剂盒，操作简单便捷。但胶体硒技术目前尚未普及，限制了该种方法学的推广；P24抗原的检测采用了生物素亲和素技术，检测结果会受到外源性生物素的干扰，一些服用生物素日剂的患者其检测结果出现偏差的风险增加；另外HIV抗体检测结果阳性不能区分患者是HIV
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1型感染还是HIV
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2型感染。
[0006]因此，研发一种可同时区别HIV
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1型感染还是HIV
‑
2型感染的试剂盒迫在眉睫。

技术实现思路

[0007]针对现有技术的不足，本申请提供一种基于乳胶法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体的试剂盒及其制备方法，具有使用方便、操作简单、便于推广的优点，且检测结果不受外源性生物素的干扰，并且能区分HIV
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1型/HIV
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2型感染。
[0008]第一方面，本申请提供一种基于乳胶法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体的试纸条，采用如下的技术方案：一种基于乳胶法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体的试纸条，所述试纸条包括底板、样品垫、乳胶垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品垫、乳胶垫、硝酸纤维素膜和吸水垫按层析方向顺次搭接粘贴在底板上，硝酸纤维素膜上包被有一条质控线以及三条检测线，质控线包被有羊抗鼠IgG，三条检测线分别包被有GP36抗原、GP41抗原、P24单克隆抗体2；乳胶垫上包被有乳胶标记的GP41、GP36、GP120混合抗原和P24单克隆抗体1。
[0009]优选的，硝酸纤维素膜上包被有一条质控线以及三条检测线，按照层析方向，硝酸纤维素膜膜上依次包被有检测线T3(P24单克隆抗体2)、检测线T2(GP41抗原)、检测线T1(GP36抗原)、质控线(羊抗鼠IgG)。
[0010]本申请的反应原理如下：本申请采用双抗体夹心法及双抗原夹心原理定性检测血样中游P24抗原以及HIV
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1抗体、HIV
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2抗体。
[0011]检测时当样本中存在P24抗原时，样本中P24抗原与乳胶垫上的乳胶标记抗体中的P24单克隆抗体1相互反应，形成标记抗体
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抗原复合物，复合物通过毛细作用向上层析，被包被在硝酸纤维素膜上的检测线T3(P24单克隆抗体2)捕获，出现红色条带。复合物继续向上层析，被包被在硝酸纤维素膜上的质控线(C线)抗体(羊抗鼠IgG)捕获，出现红色条带。当样本中待测物含量低于最低检测限时，检测线T3不显色。
[0012]检测时当样本中存在HIV1/HIV2抗体时，样本中HIV1/HIV2抗体与乳胶垫上的乳胶标记抗原中的GP41、GP36、GP120混合抗原相互反应，形成标记抗原
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抗体复合物，复合物通过毛细作用向上层析，被包被在硝酸纤维素膜上的检测线T2(GP41抗原)/检测线T1(GP36抗原)捕获，出现红色条带。复合物继续向上层析，被包被在硝酸纤维素膜上的质控线(C线)抗体(羊抗鼠IgG)捕获，出现红色条带。当样本中待测物含量低于最低检测限时，检测线T2/T1不显色。
[0013]在一个具体的可实施方案中，乳胶标记的GP41、GP36、GP120混合抗原和P24单克隆抗体1的制备方法如下：(1)将GP41、GP36、GP120混合抗原、P24单克隆抗体1以及磷酰胆碱加入至乳胶溶液中，进行偶联反应；(2)加入封闭液进行反应后，离心，得到乳胶标记的GP41、GP36、GP120混合抗原和P24单克隆抗体1。
[0014]通过采用上述技术方案，磷酰胆碱因其具有分散、乳化、抗静电等功能，加入磷酰胆碱可以使两种不同的标记蛋白在乳胶溶液中分散的更均匀、与乳胶微球结合更充分，使得乳胶偶联物的显色更明显，灵敏度更高。
[0015]本申请中将GP41、GP36、GP120混合抗原、P24单克隆抗体1放在同一管乳胶溶液中同时标记，较两种标记蛋白分开标记省时省力；且在加入标记蛋白偶联时，同步加入磷酰胆碱，可以提高产品的灵敏度以及阳性显色强度。
[0016]优选的，步骤(1)中GP41、GP36、GP120混合抗原的加入量120
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200μg；例如120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg。
[0017]优选的，步骤(1)中P24单克隆抗体1的加入量120
‑
200μg；例如120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg。
[0018]优选的，步骤(1)中磷酰胆碱的加入量600
‑
2000μg；例如600μg、720μg、1000μg、1200μg、2000μg。
[0019]优选的，步骤(1)中乳胶溶液的加入量为80
‑
120μL，例如80μL、90μL、100μL、110μL、120μL。
[0020]优选的，步骤(1)中偶联反应的温度为15
‑
37℃，例如15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、37℃。
[0021]优选的，步骤(1)中偶联反应的时间为1
‑
3h，例如1h、1.5h、2h、2.5h、3h。
[0022]优选的，步骤(2)中封闭液的加入量为50
‑
200μL；例如50μL、100μL、150μL、200μL。
[0023]优选的，步骤(2)中加入封闭液进行反应的时间为0.5
‑
1h，例如0.5h、0.6h、0.7h、...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于乳胶法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体的试纸条，其特征在于：所述试纸条包括底板、样品垫、乳胶垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，样品垫、乳胶垫、硝酸纤维素膜和吸水垫按层析方向顺次搭接粘贴在底板上，硝酸纤维素膜上包被有一条质控线以及三条检测线，质控线包被有羊抗鼠IgG，三条检测线分别包被有GP36抗原、GP41抗原、P24单克隆抗体2；乳胶垫上包被有乳胶标记的GP41、GP36、GP120混合抗原和P24单克隆抗体1。2.根据权利要求1所述的一种基于乳胶法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体的试纸条，其特征在于，乳胶标记的GP41、GP36、GP120混合抗原和P24单克隆抗体1的制备方法如下：（1）将GP41、GP36、GP120混合抗原、P24单克隆抗体1、磷酰胆碱加入至乳胶溶液中，进行偶联反应；（2）加入封闭液进行反应，得到乳胶标记的GP41、GP36、GP120混合抗原和P24单克隆抗体1。3.根据权利要求2所述的一种基于乳胶法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体的试纸条，其特征在于：步骤（1）中GP41、GP36、GP120混合抗原的加入量120
‑
200μg，P24单克隆抗体1的加入量120
‑
200μg，磷酰胆碱的加入量600
‑
2000μg，乳胶溶液的加入量为80
‑
120μL。4.根据权利要求2所述的一种基于乳胶法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体的试纸条，其特征在于：步骤（1）中偶联反应的温度为15
‑
37℃，偶联反应的时间为1
‑
3h。5.根据权利要求2所述的一种基于乳胶法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原及抗体的试纸条，其特征在于：步骤（2）中封闭液的加入量为50
‑
2...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈峰，黄磊，肖潇，
申请(专利权)人：南京申基医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：