基于蒴果内酶处理的兰花种子萌发方法技术

本发明专利技术提供了一种基于蒴果内酶处理的兰花种子萌发方法，包括兰花蒴果的清洗、消毒，酶液的配制；然后利用注射器将酶液注入蒴果内进行酶解，后更换培养液对蒴果内进行清洗，最后取出蒴果内的种子接种涂布在培养基上进行萌发培养，使得兰花种子萌发。采用本发明专利技术提供的萌发方法，具有原材料易得、操作处理方便，兰花种子萌发率高，萌发时间短等特点，能够实现兰花种子的快速萌发。花种子的快速萌发。花种子的快速萌发。

【技术实现步骤摘要】
基于蒴果内酶处理的兰花种子萌发方法


[0001]本专利技术属于兰花繁殖
，涉及兰花种子萌发，具体涉及一种基于蒴果内酶处理的兰花种子萌发方法。

技术介绍

[0002]兰花是中国传统名花，我国栽培兰花约有两千多年的历史。兰花常采取分株、播种及组织培养繁殖。虽然一个兰花蒴果中有几万到上百万粒种子，但兰花种子非常小，仅有发育不完全的胚细胞，又无胚乳，萌发力极低，加之种皮不易吸收水分，用常规方法播种不易萌发。在自然界中兰花种子的萌发一般都需要依靠菌根真菌为其提供养分，且萌发时间非常长。目前兰花繁殖方式仍是传统的分株繁殖，数量少，时间长，萌发率低，无法达到规模化生产。随着兰花市场需求的不断增长，兰花传统的繁殖方式已不能满足规模化产业发展的需求。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供一种基于蒴果内酶处理的兰花种子萌发方法，可以方便、高效地促进兰花种子萌发。
[0004]本专利技术的技术方案是，一种基于蒴果内酶处理的兰花种子萌发方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、对兰花的蒴果进行表面清洗及消毒，晾干备用；配制酶液备用；S2、在蒴果茎节一端依次连接第一针头、第一针头过滤器和第一注射器，第一注射器内吸取有S1配制的酶液；蒴果另一端蕊柱处依次连接第二针头和第二针头过滤器，通过第一注射器将酶液推入蒴果内，至第二针头过滤器有液体流出时停止；将蒴果及其连接的结构置于45℃
‑
55℃环境中酶解反应4~6小时；S3、用第二注射器吸取液体MS培养基20
‑
30mL，在第一针头处替换下第一注射器，将第二注射器中的MS培养基注入兰花蒴果内，直至MS培养基从第二针头滤器流出10
‑
12ml为止；将将蒴果及其连接的结构置于25℃
‑
28℃环境中暗培养5
‑
7天；S4、去除蒴果两端的连接的结构，后取出蒴果内的种子接种涂布在培养基上进行萌发培养，使得兰花种子萌发。
[0005]进一步地，S1中兰花蒴果表面清洗时采用无菌水摇洗后捞出，消毒时采用75%的酒精擦洗蒴果表皮多次。
[0006]进一步地，S1中的酶液为木质素过氧化物酶、纤维素酶、中性蛋白酶、糖化酶中的一种或几种；加水配成溶液，质量浓度为0.05%
‑
0.08%。
[0007]进一步地，所述酶液中木质素过氧化物酶、纤维素酶、蛋白酶和糖化酶的质量比为1~2:1~2:1:1。
[0008]进一步地，S2中第一针头过滤器和第二针头过滤器的孔径为0.25μm。
[0009]进一步地，S2中酶解反应时，蒴果及其连接的结构放入培养皿，培养皿放入培养箱
中进行酶解；每隔30分钟将第一注射器中的酶液推出0.5~1mL。
[0010]进一步地，S3中暗培养时，每隔1天将第二注射器中的MS培养基推出1~2mL。
[0011]进一步地，S4中的培养基为MS培养基，其中含有8~10wt%椰乳。
[0012]进一步地，S4中的培养条件为25℃~28℃，日光灯照明光照强度1500lx每天10~12h光照。
[0013]进一步地，该方法操作过程均为无菌操作，所用器具、水和培养基均进行无菌处理。
[0014]本专利技术具有以下有益效果：1、根据兰花种皮的成分，采用复合酶处理专一性强，作用时间短，可以快速有效地去除种胚周围的种皮，且不会损坏兰花的种胚，安全高效；2、采用兰花蒴果内进行酶处理可有效避免环境中杂菌的污染，更有益于兰花种子萌发；3、采用兰花蒴果内进行酶处理，结合种子在蒴果内进行短期的暗培养，可较好地模拟自然环境中兰花种子萌发中共生菌的作用效果，有益于兰花种子萌发；4、采用兰花蒴果连接针头、针头滤器、注射器进行酶液注入及清洗的结构方便处理流程与操作，并且接针头、双针头滤器、注射器均经过无菌处理，复合酶液经过针头滤器后也实现了过滤除菌，避免了杂菌的污染。
[0015]5、通过在兰花蒴果内进行酶处理，兰花种子的破壁率可达90%以上，兰花种子的萌发率可达60%以上，萌发时间缩短1/5
‑
1/4，萌发效果良好。
附图说明
[0016]图1 为兰花蒴果内酶处理的照片。
[0017]图2为未经酶处理的兰花种子照片（放大倍率30X）。
[0018]图3 实施例3 经酶处理后的兰花种子照片（放大倍率30X ）。
[0019]图4是 MRS培养基上的兰花种子照片。
[0020]图5 为MRS+椰乳培养基上的兰花种子照片。
[0021]图6为实施例2种子萌发后的照片。
具体实施方式
[0022]下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。
[0023]实施例1：取多个8分成熟完整的兰花蒴果依次放入3只装有无菌水的培养瓶中充分摇洗后捞出，再用75%的酒精擦洗蒴果表皮3次，晾干备用。
[0024]按木质素过氧化物酶、纤维素酶、中性蛋白酶与糖化酶按质量比2:2:1:1比例，用纯净水配制成质量百分浓度为0.05%复合酶液，再用第一注射器吸取复合酶液10ml，然后依次在第一注射器乳头处连接0.25μm的第一针头滤器，第一针头滤器的另一端连接第一针头；将上述连接有第一注射器的第一针头从茎节一端插入兰花蒴果内，同时在兰花蒴果的另一端蕊柱处插入另一个在针栓连接有0.25μm的第二针头滤器的第二针头，连接结构可参
见图1。从第一注射器中将复合酶液缓慢注入兰花蒴果内，当蕊柱端的第二针头滤器有液体流出时即停止注入复合酶液；将连接有第一注射器、第二针头的兰花蒴果放入培养皿中，盖好皿盖，将培养皿放入45℃的培养箱中进行4小时的兰花种子果荚内酶水解，其中每隔30分钟将注射器1中的酶液推出约0.5ml。
[0025]上述处理前后分别取兰花蒴果，用刀片划开蒴果外皮，用镊子夹取兰花种子放于载玻片上，用牙签在载玻片上均匀涂布，再在体视显微镜下观察，拍照，得到图2和图3中的显微照片，可以看出图3中经过酶处理的种子已经脱离了种皮。
[0026]用第二注射器吸取液体MS培养基30ml，在第一针头处替换下第一注射器，并连接上第二注射器，然后将第二注射器中的MS培养基缓慢注入兰花蒴果内，直至MS培养基从第二针头滤器流出10ml为止。
[0027]将上述清洗好的兰花蒴果连同第二注射器、第二针头一起放入培养皿中，盖好皿盖，将培养皿放入26℃的培养箱中暗培养5天，其中每隔1天将第二注射器中的MS培养基推出约2ml。
[0028]将上述经过暗培养后的兰花蒴果所连接的第二注射器、第二针头去掉，用常规方法取出兰花蒴果内的种子接种涂布到含有10%椰乳的MS培养基上培养（如图5）,同时做空白对照（MS培养基直接培养，如图4），培养条件为 28℃，日光灯照明光照强度约为1500lx每天10h光照。
[0029]所用器具、纯净水、培养基均需无菌处理，所有操作均为无菌操作。
[0030本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于蒴果内酶处理的兰花种子萌发方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、对兰花的蒴果进行表面清洗及消毒，晾干备用；配制酶液备用；S2、在蒴果茎节一端依次连接第一针头、第一针头过滤器和第一注射器，第一注射器内吸取有S1配制的酶液；蒴果另一端蕊柱处依次连接第二针头和第二针头过滤器，通过第一注射器将酶液推入蒴果内，至第二针头过滤器有液体流出时停止；将蒴果及其连接的结构置于45℃
‑
55℃环境中酶解反应4~6小时；S3、用第二注射器吸取液体MS培养基20
‑
30mL，在第一针头处替换下第一注射器，将第二注射器中的MS培养基注入兰花蒴果内，直至MS培养基从第二针头滤器流出10
‑
12ml为止；将将蒴果及其连接的结构置于25℃
‑
28℃环境中暗培养5
‑
7天；S4、去除蒴果两端的连接的结构，后取出蒴果内的种子接种涂布在培养基上进行萌发培养，使得兰花种子萌发。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：S1中兰花蒴果表面清洗时采用无菌水摇洗后捞出，消毒时采用75%的酒精擦洗蒴果表皮多次。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：S1中的酶液为木质素过氧化物酶、纤...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵伟，林直，熊泽，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：