人TIGIT抗体及其应用制造技术

本发明专利技术属于抗体技术领域，公开了人TIGIT抗体及其应用。该人TIGIT抗体或其抗原结合片段与hTIGIT具有很强的结合能力，可以诱导B

【技术实现步骤摘要】
人TIGIT抗体及其应用


[0001]本专利技术属于抗体
，具体涉及人TIGIT抗体及其应用。

技术介绍

[0002]hTIGIT分子是近年新发现的一种具有免疫抑制作用的协同刺激分子。研究人员对活化的人类T细胞进行了测序，并对一些具有免疫调节样结构域的蛋白质分子进行了进一步的研究，结果发现T细胞和自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)均表达hTIGIT，该分子具有免疫球蛋白样结构域、跨膜区和免疫受体蛋白酪氨酸抑制模体(ITIM)，因此命名为hTIGIT(T cell immunoglobulin and ITIM domain)。hTIGIT基因位于人类第16号染色体，编码由244个氨基酸组成的I型跨膜蛋白。其序列较为保守，在多种哺乳动物中都发现了其同源分子，人类hTIGIT分子与猴、狗和小鼠的hTIGIT分子分别具有88％、67％和58％的同源性。
[0003]在hTIGIT的配体当中，经过生物信息学分析和体外实验发现hTIGIT与CD155结合的亲和力最高，与CD113的结合能力次之，与CD112结合的亲和力较低。研究表明hTIGIT与上述配体结合活化后，可以通过下调TCR活化通路上游的三个重要分子TCRα、CD3ε和PLC
‑
γ1来抑制T细胞的活化，但同时也上调了IL
‑
2Rγ、CD25和BCL
‑
XL这些维持T细胞存活的分子，从而使T细胞避免被清除。NK细胞是机体内重要的一种免疫细胞，在抗肿瘤、抗病毒和胞内寄生菌方面发挥重要作用。Stanietsky等人发现hTIGIT不但表达于T细胞表面，其在NK细胞表面也有高水平的表达，可通过其胞内的ITIM基序传递抑制性信号，抑制NK细胞的杀伤功能，从而对NK细胞发挥直接抑制作用(图27)。
[0004]以往的研究发现，在肿瘤的进展过程中，T细胞表面的hTIGIT表达是升高的，并且与肿瘤周边的NK细胞相比，肿瘤内的NK细胞表面的hTIGIT表达更多。在肿瘤免疫循环过程中，hTIGIT可以通过多个步骤阻断免疫细胞对肿瘤的杀伤，首先，hTIGIT可以通过阻止肿瘤细胞的初始死亡和释放肿瘤抗原来抑制NK细胞效应；hTIGIT还可抑制树突细胞协同刺激能力，导致癌抗原呈递减少和抗炎细胞因子如IL
‑
10增加，并可以诱导其他细胞如肿瘤细胞的PVR信号传导；另外hTIGIT可以抑制CD8+T细胞效应或偏斜CD4+T细胞的极化；最后，hTIGIT可以直接抑制CD8+T细胞效应，防止癌细胞的清除(图27)。
[0005]可见，hTIGIT具有明显的抑制免疫细胞杀伤肿瘤的作用，因此，抑制该分子有可能成为有效的抗肿瘤靶点。研究显示靶向小鼠hTIGIT的高亲和力、阻断型单克隆抗体，在体外试验中证实其对hTIGIT受配体结合的强效阻断效应及其对NK细胞的功能提升作用，并证实基于hTIGIT的卡控点免疫治疗能够逆转NK细胞的功能耗竭，增强NK细胞介导的抗肿瘤免疫应答，有效抑制小鼠肿瘤的增长，显著延长荷瘤小鼠的生存；此外该研究还证实NK细胞是其它卡控点免疫治疗方案(例如抗PD
‑
L1)取得疗效的前提，采用该hTIGIT单克隆抗体治疗成功的小鼠具有近乎终生的强效抗肿瘤免疫记忆，在无任何治疗的情况下，对再次荷瘤具有强大的抵抗力。综上所述，靶向抑制性受体hTIGIT的单克隆抗体具有巨大的成药潜力，治疗实体瘤具有非常大的开发前景。
[0006]截止到2021年8月，根据Biotech gate数据库的检索信息，可以看出针对TIGIT靶点的临床研究已经在积极地推进当中。国内进展最快的是百济神州公司的BMS
‑
986207，国外以罗氏的Tiragolumab(4.1D4，为本申请的参比抗体)已经进入到临床研究3期。以上研究均以实体瘤为适应症。各制药公司关于TIGIT靶点的临床试验研究情况如表1所示。
[0007]表1人TIGIT靶点的临床研究主要情况汇总(截止2021年8月)
[0008]
技术实现思路

[0009]本专利技术第一方面的目的，在于提供人TIGIT抗体或其抗原结合片段。
[0010]本专利技术第二方面的目的，在于提供编码本专利技术第一方面的人TIGIT抗体或其抗原结合片段的核酸分子。
[0011]本专利技术第三方面的目的，在于提供包含本专利技术第二方面的核酸分子的表达盒、重组载体或转基因细胞系。本专利技术第四方面的目的，在于提供一种免疫偶联物。
[0012]本专利技术第五方面的目的，在于提供本专利技术第一方面的人TIGIT抗体或其抗原结合片段、本专利技术第二方面的核酸分子、本专利技术第三方面的表达盒、重组载体或转基因细胞系和/或本专利技术第四方面的免疫偶联物的应用。
[0013]本专利技术第六方面的目的，在于提供一种产品。
[0014]本专利技术第七方面的目的，在于提供一种药物组合物。
[0015]本专利技术第八方面的目的，在于提供一种治疗肿瘤的方法。
[0016]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0017]本专利技术的第一个方面，提供人TIGIT抗体或其抗原结合片段，为60H5或51C1；
[0018]所述60H5包含60H5重链可变区和60H5轻链可变区；
[0019]所述60H5重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
[0020]所述60H5重链可变区CDR1的氨基酸序列为：
[0021]a)GYTFTEYT(SEQ ID NO.2)；或
[0022]b)与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同
一性的序列；
[0023]所述60H5重链可变区CDR2的氨基酸序列为：
[0024]a)INPNNGGT(SEQ ID NO.3)；或
[0025]b)与SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；
[0026]所述60H5重链可变区CDR3的氨基酸序列为：
[0027]a)ARSGNWDYAMDY(SEQ ID NO.4)；或
[0028]b)与SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；
[0029]所述60H5轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；
[0030]所述60H5轻链可变区CDR1的氨基酸序列为：
[0031]a)QHVSTA(SEQ ID NO.7)；或
[0032]b)与SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；
[0033]所述60H5轻链可变区CDR2的氨基酸序列为：
[0034]a)SAS(SEQ ID NO.8)；或
[0035]b)与SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.人TIGIT抗体或其抗原结合片段，为60H5或51C1；所述60H5包含60H5重链可变区和60H5轻链可变区；所述60H5重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；所述60H5重链可变区CDR1的氨基酸序列为：a)GYTFTEYT(SEQ ID NO.2)；或b)与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；所述60H5重链可变区CDR2的氨基酸序列为：a)INPNNGGT(SEQ ID NO.3)；或b)与SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；所述60H5重链可变区CDR3的氨基酸序列为：a)ARSGNWDYAMDY(SEQ ID NO.4)；或b)与SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；所述60H5轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；所述60H5轻链可变区CDR1的氨基酸序列为：a)QHVSTA(SEQ ID NO.7)；或b)与SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；所述60H5轻链可变区CDR2的氨基酸序列为：a)SAS(SEQ ID NO.8)；或b)与SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；所述60H5轻链可变区CDR3的氨基酸序列为：a)QQHYITPWT(SEQ ID NO.9)；或b)与SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；所述51C1包含51C1重链可变区和51C1轻链可变区；所述51C1重链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；所述51C1重链可变区CDR1的氨基酸序列为：a)GYTFTEYF(SEQ ID NO.12)；或b)与SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；所述51C1重链可变区CDR2的氨基酸序列为：a)FYPGSGSI(SEQ ID NO.13)；或b)与SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；所述51C1重链可变区CDR3的氨基酸序列为：
a)ARHEMRYGNYVLDY(SEQ ID NO.14)；或b)与SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；所述51C1轻链可变区包含CDR1、CDR2、CDR3；所述51C1轻链可变区CDR1的氨基酸序列为：a)TGAVTTRNY(SEQ ID NO.17)；或b)与SEQ ID NO.17所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；所述51C1轻链可变区CDR2的氨基酸序列为：a)GTN(SEQ ID NO.18)；或b)与SEQ ID NO.18所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；所述51C1轻链可变区CDR3的氨基酸序列为：a)GLWYSNHLV(SEQ ID NO.19)；或b)与SEQ ID NO.19所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列。2.根据权利要求1所述的人TIGIT抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述60H5重链可变区的氨基酸序列包含：a)EVQLQQSGPELVKPGASLKISCKTSGYTFTEYTMHWVKQSHGKSLEWIGGINPNNGGTKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARSGNWDYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO.1)；或b)与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；或c)QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKTSGYTFTEYTMHWVRQAPGQRLEWIGGINPNNGGTSYNQKFQGRVTITVDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGNWDYAMDYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO.21)；或d)与SEQ ID NO.21所示的氨基酸序列具有95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列；所述60H5轻链可变区的氨基酸序列包含：a)DIVMTQSHKFMST...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶才果，王笑非，陆惠娟，叶雨晴，
申请(专利权)人：广东安普泽生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：