靶向BCMA的P329G抗体及其与嵌合抗原受体细胞的组合和应用制造技术

本发明专利技术涉及包含P329G突变的特异性结合B细胞成熟抗原蛋白(BCMA)的抗体，以及药物组合，所述药物组合包含(i)选自表达分子开关调控型CAR多肽的免疫效应细胞(例如，T细胞、NK细胞)、编码所述CAR多肽的核酸分子、包含所述核酸分子的载体和它们的任意组合；和(ii)所述包含P329G突变的特异性结合BCMA的抗体。本发明专利技术还涉及包含所述药物组合的成套药盒、以及所述药物组合在受试者中治疗与BCMA相关的疾病的用途。用途。

【技术实现步骤摘要】
靶向BCMA的P329G抗体及其与嵌合抗原受体细胞的组合和应用


[0001]本专利技术总体上涉及抗体工程和细胞免疫学领域，具体地，本专利技术涉及包含P329G突变的 特异性结合B细胞成熟抗原蛋白(B
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cell maturation antigen，BCMA)的抗体与经工程化以表达分 子开关调控型嵌合抗原受体的免疫效应细胞(例如，T细胞、NK细胞)的组合，并涉及所述组 合用于治疗与BCMA的表达相关的疾病，例如表达或过表达BCMA的癌症。

技术介绍

[0002]B细胞成熟抗原(BCMA，即CD269，TNFRSF17)是肿瘤坏死因子受体超家族成员 (TNFRSF)。BCMA是III型跨膜蛋白，在胞外结构域(ECD)中具有TNFR家族成员特征性 的富半胱氨酸结构域(CRD)，该结构域形成配体结合基序。BCMA的配体包括B细胞激活因 子(BAFF)和B细胞增殖诱导配体(APRIL)，其中B细胞增殖诱导配体(APRIL)与BCMA 以更高的亲和力结合，促进肿瘤细胞增殖。
[0003]BCMA主要表达在成熟B细胞即浆细胞表面，在正常造血干细胞和非血源组织中不表达， BCMA信号对于长效骨髓浆细胞的生存不可或缺，但非总体B细胞稳态所必需。膜表面BCMA 能够被γ分泌酶酶切而脱落，产生的可溶性BCMA(sBCMA)可能通过封闭BAFF/APRIL 配体结合来降低膜表面BCMA信号传导。临床前模型以及人体肿瘤中发现BCMA在多发性 骨髓瘤(Multiple Myeloma，MM)细胞中过表达，其上调经典以及非经典NF
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κB信号，促进 MM细胞生长、生存、粘附，诱导破骨细胞激活、血管生产、转移及免疫抑制等，BCMA表 达已经成为诊断MM的重要标志物。此外，MM患者血清中sBCMA水平升高，与骨髓中 MM细胞数量呈正比例相关，且其浓度变化与MM预后及治疗应答密切相关。
[0004]鉴于BCMA仅限于表达在浆细胞中，在天然和记忆性B细胞中不表达的特性，BCMA 成为治疗MM的热门靶点，目前已开发了多种靶向药物，包括嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T) 免疫疗法，其中蓝鸟(Bluebird)公司的Abecma(idecabtagene vicleucel，ide
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cel)已于2021年 3月份获得FDA批准，用于4线及以上复发难治性MM(RRMM)的治疗，强生(Johnson& Johnson)和南京传奇联合开发的Ciltacabtagene autoleucel(Cilta
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cel)也已递交生物制品许可申 请(BLA)。
[0005]Abecma作为首个靶向BCMA的CAR
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T细胞疗法，其通过识别并结合多发性骨髓瘤癌细 胞上的BCMA蛋白，导致表达BCMA蛋白的癌细胞死亡。即，其是通过CAR
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T细胞上的嵌 合抗原受体(CAR)直接靶向肿瘤细胞的表面抗原BCMA蛋白，从而达到识别和杀伤肿瘤细 胞的目的。该传统嵌合抗原受体T细胞的不足之处在于，对于回输体内后的CAR
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T细胞活性 缺乏控制，这些CAR
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T细胞在体内激活后会持续识别和杀伤表达其靶向抗原的细胞，在某些 情况下(例如肿瘤患者负荷的肿瘤大)，大量快速激活的CAR
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T细胞会释放海量炎性细胞因 子，使患者产生细胞因子释放综合征(CRS)、神经毒性(NT)等严重毒副反应。一项统计 84个临床试验含有2592例患者的荟萃研究显示，接受传统CAR
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T细胞治疗后3级以上CRS 和NT发生率分别为29％和28％。虽然大量临床试验发现，发生毒性反应的多数患者在接受 相应处
理后能够快速恢复，也未显著影响抗肿瘤疗效，但毒副反应的处理占用大量临床资源， 增加患者身心负担和经济负担。
[0006]由于绝大部分CAR
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T细胞(例如，Abecma)靶向的抗原是肿瘤相关抗原(TAA)而非 肿瘤特异性抗原(TSA)，这些TAA除了在肿瘤细胞上表达之外，在很多正常组织尤其是重 要组织器官往往也存在低水平表达，CAR
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T细胞对于所述正常组织的识别杀伤导致“在靶/ 脱肿瘤(On
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target/off tumor)”毒性，机体短期内可能能够耐受，但如果长期不能恢复或者缓 解，可能导致严重副作用。例如，临床使用靶向CD19的CAR
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T细胞治疗CD19阳性血液肿 瘤，CD19CAR
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T细胞除了清除肿瘤细胞，它们也杀伤正常B细胞，CAR
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T细胞在体内持续 存在虽然与患者长期无复发地生存密切相关，但也同时导致机体长期B细胞发育不良，体液 免疫缺失，容易引起感染。临床试验表明，接受CD19CAR
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T细胞治疗后30天内27
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36％淋 巴瘤患者发生细菌感染，9.2
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28％患者在一个月后发生病毒感染，需要中位时间6.7个月B细 胞才能恢复，31
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64％患者需要接受丙种球蛋白替代治疗。此外，CAR
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T细胞在体内持续激活 容易导致功能耗竭，损害其抗肿瘤效应，减少其在体内的存续性，从而降低长期治疗效应。
[0007]为了降低CAR
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T细胞存在的“在靶/脱肿瘤(On
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target/off tumor)”毒性，现有技术中 通常采用以下策略。一种策略是在CAR设计时，将CAR中包含的抗原结合结构域设计为靶 向肿瘤表面高表达而正常组织不表达或低表达的靶抗原。另一种策略是，严格控制施用的T 细胞剂量，因为过多的CAR
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T细胞受抗原刺激后会呈指数级递增，更易引起在靶/脱肿瘤效 应。还有一种策略是，在构建CAR时引入诱导型自杀基因，如诱导型Caspase
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9(iCasp9)自杀 基因，当观察到患者发生在靶/脱肿瘤毒性时，施用AP1903(一种能够激活iCasp9的二聚化 化学诱导剂)使CAR
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T细胞发生凋亡，减轻毒性(张慧慧等人，自杀基因作为一种“安全性开 关”控制CAR
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T细胞毒性的临床前研究，中国肿瘤生物治疗杂志，2021，28(3)：225
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231)；也 有利用单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV
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TK)基因作为自杀基因，通过施用更昔洛韦治疗诱导 CAR
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T细胞发生凋亡的报导。另外，也有报导使用电穿孔转染方法使T细胞瞬时表达CAR， 通过一过性杀伤功能来发挥治疗作用(Kenderian SS等人，CD33
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specific chimeric antigenreceptor T cells exhibit potent preclinical activity against human acute myelo本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.特异性结合BCMA分子的抗体或抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：(a)所述重链可变区包含根据Kabat编号的氨基酸序列SSSYYWT(SEQ ID NO：25)所示的CDR H1或由所述氨基酸序列组成、或所述CDR H1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；氨基酸序列SISIAGSTYYNPSLKS(SEQ ID NO：26)所示的CDR H2或由所述氨基酸序列组成、或所述CDR H2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和氨基酸序列DRGDQILDV(SEQ ID NO∶27)所示的CDR H3或由所述氨基酸序列组成、或所述CDR H3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；所述轻链可变区包含根据Kabat编号的氨基酸序列RASQSISRYLN(SEQ ID NO：28)所示的CDR L1或由所述氨基酸序列组成、或所述CDR L1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO：29)所示的CDR L2或由所述氨基酸序列组成、或所述CDR L2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和氨基酸序列QQKYFDIT(SEQ ID NO：30)所示的CDRL3或由所述氨基酸序列组成、或所述CDRL3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；(b)所述重链可变区包含根据Kabat编号的氨基酸序列NDVIS(SEQ ID NO：31)所示的CDR H1或由所述氨基酸序列组成、或所述CDR H1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；氨基酸序列VIIPIFGIANYAQKFQG(SEQ ID NO：32)所示的CDR H2或由所述氨基酸序列组成、或所述CDR H2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和氨基酸序列GRGYYSSWLHDI(SEQ ID NO：33)所示的CDR H3或由所述氨基酸序列组成、或所述CDR H3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；所述轻链可变区包含根据Kabat编号的氨基酸序列QASQDITNYLN(SEQ ID NO：34)所示的CDR L1或由所述氨基酸序列组成、或所述CDR L1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；氨基酸序列DASNLET(SEQ ID NO：35)所示的CDR L2或由所述氨基酸序列组成、或所述CDR L2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和氨基酸序列QQAFDLIT(SEQ ID NO：36)所示的CDR L3或由所述氨基酸序列组成、或所述CDR L3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；其中所述氨基酸变化是氨基酸的添加、缺失或取代；例如，其中：(a)所述重链可变区包含根据Kabat编号的氨基酸序列SSSYYWT(SEQ ID NO：25)所示的CDR H1；氨基酸序列SISIAGSTYYNPSLKS(SEQ ID NO：26)所示的CDR H2；和氨基酸序列DRGDQILDV(SEQ ID NO：27)所示的CDR H3；所述轻链可变区包含根据Kabat编号的氨基酸序列RASQSISRYLN(SEQ ID NO：28)所示的CDR L1；氨基酸序列AASSLQS(SEQ ID NO：29)所示的CDR L2；和氨基酸序列QQKYFDIT(SEQ ID NO：30)所示的CDR L3；(b)所述重链可变区包含根据Kabat编号的氨基酸序列NDVIS(SEQ ID NO：31)所示的CDR H1；氨基酸序列VIIPIFGIANYAQKFQG(SEQ ID NO：32)所示的CDR H2；和氨基酸序列GRGYYSSWLHDI(SEQ ID NO：33)所示的CDR H3；所述轻链可变区包含根据Kabat编号的氨基酸序列QASQDITNYLN(SEQ ID NO：34)所示的CDR L1；氨基酸序列DASNLET(SEQ ID NO：35)所示的CDR L2；和氨基酸序列QQAFDLIT(SEQ ID NO：36)所示的CDR L3；例如，其中：
(a)重链可变区包含SEQ ID NO：2的序列或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，且轻链可变区包含SEQ ID NO：3的序列或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；(b)重链可变区包含SEQ ID NO：9的序列或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，且轻链可变区包含SEQ ID NO∶10的序列或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；例如，其中：(a)重链可变区包含SEQ ID NO：2的序列，且轻链可变区包含SEQ ID NO：3的序列；(b)重链可变区包含SEQ ID NO：9的序列，且轻链可变区包含SEQ ID NO：10的序列；例如，所述抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体；优选地，其是IgG1或IgG4抗体；更优选地，其是IgG1抗体；例如，所述抗原结合片段是Fab、Fab
’
、F(ab
’
)2、Fv、单链Fv、单链Fab、双体抗体(diabody)。2.根据权利要求1所述的特异性结合BCMA分子的抗体或抗原结合片段，其还包含突变Fc结构域，其中根据EU编号的P329位置处的氨基酸突变为甘氨酸(G)，与未突变的亲本抗体Fc结构域的Fcγ受体结合相比，突变Fc结构域的Fcγ受体结合降低；例如，所述突变Fc结构域是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的突变Fc结构域，优选地，所述突变Fc结构域是IgG1或IgG4抗体的突变Fc结构域；更优选地，所述突变Fc结构域是IgG1抗体的突变Fc结构域；例如，所述抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：5所示的重链恒定区序列或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列且其中根据EU编号的P329位置处的氨基酸突变为G；例如，所述抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：5所示的重链恒定区序列或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列且其中根据EU编号的P329位置处的氨基酸突变为G；和SEQ ID NO：6所示的轻链恒定区序列或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；例如，所述抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：5所示的重链恒定区序列和SEQ ID NO：6所示的轻链恒定区序列。3.分离的核酸，其编码权利要求1或2所述的特异性结合BCMA分子的抗体或抗原结合片段。4.包含权利要求3的核酸的载体，优选地所述载体是表达载体。5.包含权利要求3的核酸或权利要求4的载体的宿主细胞，优选地，所述宿主细胞是原核的或真核的，更优选的选自大肠杆菌细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞或适用于制备抗体或其抗原结合片段的其它细胞，最优选地，所述宿主细胞是HEK293细胞或CHO细胞。6.制备权利要求1或2所述的特异性结合BCMA分子的抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括在适于表达编码权利要求1或2所述的特异性结合BCMA分子的抗体或抗原结合片段的核酸的条件下，培养导入有编码权利要求1或2所述的特异性结合BCMA分子的抗体或抗原结合片段的核酸的表达载体的宿主细胞，分离所述特异性结合BCMA分子的抗体或抗原结合片段，任选地所述方法还包括从所述宿主细胞回收所述特异性结合BCMA分子的抗体或抗原结合片段。
7.药物组合，其包含(i)选自表达分子开关调控型CAR多肽的免疫效应细胞(例如，T细胞、NK细胞)、编码所述CAR多肽的核酸分子、包含所述核酸分子的载体、和它们的任意组合；和(ii)包含P329G突变的特异性结合BCMA分子的抗体或抗原结合片段(也称为P329G突变抗体)，例如，权利要求2的P329G突变抗体；以及任选地可药用辅料；其中，所述分子开关调控型CAR多肽包含(1)人源化抗P329G突变scFv序列，其中所述scFv序列包含能够特异性结合包含P329G突变的抗体Fc结构域，但不能特异性结合未突变的亲本抗体Fc结构域的如下序列：(i)重链可变区，其包含根据Kabat编号的(a)氨基酸序列RYWMN(SEQ ID NO：19)所示的重链互补决定区CDR H1、或所述CDR H1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；(b)氨基酸序列EITPDSSTINYAPSLKG(SEQ ID NO：20)所示的CDR H2、或所述CDR H2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和(c)氨基酸序列PYDYGAWFAS(SEQ ID NO：21)所示的CDR H3、或所述CDR H3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和(ii)轻链可变区，其包含根据Kabat编号的(d)氨基酸序列RSSTGAVTTSNYAN(SEQ ID NO：22)所示的轻链互补决定区(CDR L)1、或所述CDR L1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；(e)氨基酸序列GTNKRAP(SEQ ID NO：23)所示的CDR...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐伟，危华锋，D，
申请(专利权)人：信达细胞制药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：