本发明专利技术公开了一种与小麦籽粒硬度相关的遗传信息识别方法，属于小麦籽粒硬度KASP标记技术领域。同时，本发明专利技术还公开了一组与该KASP标记相关的KASP引物组及其应用，所述KASP引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物1，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的引物2，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的引物3，其中引物3为共用引物；以该KASP引物组为引物，以待测小麦基因组DNA为模板进行PCR扩增，当小麦两条染色体对应位点碱基均为C时，小麦籽粒属于低硬度籽粒表型的CC基因型小麦品种，可用于培育软质小麦新品种；当小麦两条染色体对应位点碱基均为T时，小麦籽粒属于高硬度籽粒表型的TT基因型小麦品种，可用于培育硬质小麦新品种。可用于培育硬质小麦新品种。可用于培育硬质小麦新品种。
【技术实现步骤摘要】
一种与小麦籽粒硬度相关的遗传信息识别方法
[0001]本专利技术涉及一种与小麦籽粒硬度相关的遗传信息识别方法，属于小麦籽粒硬度KASP标记
技术介绍
[0002]小麦籽粒硬度是小麦加工质量的最重要技术指标之一，也是国内外小麦市场分类和定价的重要指标之一，也是不同国家育种的重要指标。通常而言，硬质小麦的胚乳中的淀粉颗粒密集地包裹着蛋白质基质，使得胚乳颗粒很难在磨粉机加工小麦籽粒过程中被精细研磨，但同时使得胚乳很容易与麸皮和面粉分离，表现为：小麦麸皮大而矮、颜色好、灰分低，总体加工表现为：面粉提取率相对较低，但具有较大的颗粒、更规则的形状和良好的筛分效果。而软质小麦加工所得面粉则粒径相对较小、面粉整体蓬松，致密性低，柔滑性差，同时由于粒径较小，使得加工过程中筛网效率较差。
[0003]总之，由于小麦硬度指标与小麦面粉加工(小麦制粉)过程中面粉出粉率、加工效率、面粉质量、加工动力消耗等具有直接关系，因此，小麦籽粒硬度对于小麦产业化加工具有十分重要的技术意义。
[0004]通过对我国不同小麦品种籽粒硬度的初步统计，结果表明，我国现有小麦品种硬度指标普遍偏高。而随着近年来小麦基因组测序工作完成，如何结合相关基因测序工作，挖掘小麦籽粒硬度控制基因，对于改良小麦品种硬度指标、以及培育新的软质小麦新品种具有十分重要的技术理论意义。
技术实现思路
[0005]为了克服现有技术中存在的缺陷，本专利技术结合现有技术中常用的小麦籽粒硬度测量方法(单籽粒谷物特性测定仪法，single kernel characterization system,SKCS)，通过对我国不同小麦品种的小麦籽粒硬度测定和统计，结合小麦全基因组关联分析(GWAS)鉴定结果，筛选鉴定到一个影响小麦籽粒硬度的显著位点8108，并结合KASP技术原理，进一步开发了鉴定该位点的特异性引物组合在小麦籽粒硬度性状筛选中的应用。
[0006]本专利技术第一方面提供了一种检测小麦籽粒硬度关联基因的成套KASP引物，所述成套KASP引物包含引物A、引物B和引物C；所述引物A为SEQ ID No.1的第22
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45位所示的单链DNA或其衍生物；所述引物B为SEQ ID No.2的第22
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45位所示的单链DNA或其衍生物；所述引物C为SEQ ID No.3的单链DNA。
[0007]在一种实施方式中，所述SEQ ID No.1的第22
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45位所示的单链DNA的衍生物为SEQ IDNo.1的第22
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45位所示的单链DNA的5'端连接特异荧光标签序列A；所述SEQ ID No.2的第22
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45位所示的单链DNA的衍生物为SEQ ID No.2的第22
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45位所示的单链DNA的5'端连接特异荧光标签序列B。
[0008]在一种实施方式中，所述特异荧光标签序列A和特异荧光标签序列B为不同的荧光报告基因，分别选自FAM、TET、VIC、JOE、HEX。
[0009]在一种实施方式中，所述特异荧光标签序列A为荧光标签序列FAM，所述特异荧光标签序列B为荧光标签序列HEX。
[0010]在一种实施方式中，所述荧光标签序列FAM的核苷酸序列为SEQ ID No.1的第1
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21位，所述荧光标签序列HEX的核苷酸序列为SEQ ID No.2的第1
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21位。
[0011]本专利技术的第二个目的是提供一种用于检测小麦籽粒硬度关联基因的试剂盒，所述试剂盒含有所述成套KASP引物。
[0012]在一种实施方式中，所述试剂盒还含有MgCl2。
[0013]本专利技术的第三个目的是提供一种检测小麦籽粒硬度关联基因的基因型的方法，包括如下步骤：以所述待测小麦的基因组DNA为模板，采用所述成套KASP引物或所述试剂盒进行PCR扩增，将所得扩增产物进行荧光信号扫描，对扫描数据进行分析，根据分析结果确定所述待测小麦的籽粒硬度关联基因的基因型：
[0014]若扩增产物的荧光信号数据显示为蓝色，则所述待测小麦基因组中籽粒硬度关联基因的基因型是CC；
[0015]若扩增产物的荧光信号数据显示为黄色，则所述待测小麦基因组中籽粒硬度关联基因的基因型是TT；
[0016]若扩增产物的荧光信号数据显示为绿色，则所述待测小麦基因组中籽粒硬度关联基因的基因型是CT。
[0017]在一种实施方式中，所述小麦籽粒硬度关联基因为小麦基因组中染色体7B上SNP位点8108。
[0018]在一种实施方式中，所述小麦籽粒硬度关联基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0019]在一种实施方式中，所述PCR扩增具体为，
[0020]引物组组合中以摩尔比计，上游引物1：上游引物2：下游引物＝12：12：30；PCR反应程序为：95℃变性15min；95℃变性20s，65℃退火1min，10个循环；95℃变性20s，57℃延伸1min，连续30个循环；37℃延伸1min。
[0021]5μL扩增体系可参考设计如下：
[0022][0023][0024]所述Primer Mix，每100μL中：
[0025]上游引物1(F1)，10μM、12μL；
[0026]上游引物2(F2)，10μM、12μL；
[0027]下游引物(R)，10μM、30μL；
[0028]ddH2O，46μL。
[0029]本专利技术的第四个目的是提供一种检测小麦籽粒硬度的方法，包括如下步骤：
[0030](1)检测小麦基因组中染色体7B上SNP位点8108的基因型；
[0031](2)染色体7B上SNP位点8108的基因型是TT的待测小麦籽粒硬度高于染色体7B上SNP位点8108的基因型是CC或CT的待测小麦。
[0032]本专利技术的第五个目的是提供一种选育或筛选小麦单株或株系或品系或品种的方法，包括如下(A)或(B)：
[0033](A)培育小麦籽粒硬度高的小麦品种的方法；选择染色体7B上SNP位点8108的基因型是TT的待测小麦作为亲本进行选育，并在育种各世代选择基因组中染色体7B上SNP位点8108的基因型是TT的小麦，最终获得籽粒硬度相对较高的小麦单株或株系或品系或品种；
[0034](B)培育小麦籽粒硬度低的小麦品种的方法；选择染色体7B上SNP位点8108的基因型是CC的待测小麦作为亲本进行选育，并在育种各世代选择基因组中染色体7B上SNP位点8108的基因型是CC的小麦，最终获得籽粒硬度相对较低的小麦单株或株系或品系或品种。
[0035]本专利技术另一方面提供了所述染色体7B上SNP位点8108，或所述引物，或所述试剂盒在如下任一中的应用：
[0036](A)鉴定或辅助鉴定小麦籽粒硬度性状；
[0037](B)比较待测小麦籽粒硬度的高低；
[0038](C)选育或筛选籽粒硬度相对较高的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测小麦籽粒硬度关联基因的成套KASP引物，其特征在于，所述成套KASP引物包含引物A、引物B和引物C；所述引物A为SEQ ID No.1的第22
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45位所示的单链DNA或其衍生物；所述引物B为SEQ ID No.2的第22
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45位所示的单链DNA或其衍生物；所述引物C为SEQ ID No.3的单链DNA。2.根据权利要求1所述的成套KASP引物，其特征在于，所述SEQ ID No.1的第22
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45位所示的单链DNA的衍生物为SEQ ID No.1的第22
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45位所示的单链DNA的5'端连接特异荧光标签序列A；所述SEQ ID No.2的第22
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45位所示的单链DNA的衍生物为SEQ ID No.2的第22
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45位所示的单链DNA的5'端连接特异荧光标签序列B。3.根据权利要求2所述的成套KASP引物，其特征在于，所述特异荧光标签序列A和特异荧光标签序列B为不同的荧光报告基因，分别选自FAM、TET、VIC、JOE或HEX。4.根据权利要求2或3所述的成套KASP引物，其特征在于，所述特异荧光标签序列A为荧光标签序列FAM，所述特异荧光标签序列B为荧光标签序列HEX。5.根据权利要求4所述的成套KASP引物，其特征在于，所述荧光标签序列FAM的核苷酸序列为SEQ ID No.1的第1
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21位，所述荧光标签序列HEX的核苷酸序列为SEQ ID No.2的第1
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21位。6.一种用于检测小麦籽粒硬度关联基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1～3任一所述的成套KASP引物。7.一种检测小麦籽粒硬度关联基因的基因型的方法，其特征在于，包括如下步骤：以待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求1～...
【专利技术属性】
技术研发人员：王莉，杨帆，杨龙平，周正富，江锋，雷振生，罗群，吴政卿，
申请(专利权)人：贵州茅台酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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