一种绣球菌多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种绣球菌多糖，由海藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖四种单糖聚合而成，各单糖组分的质量百分比如下：海藻糖9.21wt％，半乳糖37.29wt％，葡萄糖34.83wt％，甘露糖18.67％。本发明专利技术提供的绣球菌多糖，为单一多糖活性物质，在较低浓度时对成骨细胞的增殖具有促进作用，因此可作为一种潜在的治疗骨质疏松的药物。的药物。的药物。

【技术实现步骤摘要】
一种绣球菌多糖及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种绣球菌多糖及其制备方法和应用，特别涉及绣球菌多糖在促进成骨细胞增殖中的应用。

技术介绍

[0002]骨质疏松为中老年人群常见慢性病，尤其是中老年女性骨质疏松症更为普遍，患病后容易出现骨质疏松性疼痛，极大地增加了骨折的风险，严重影响中老年人群的生活质量。骨质疏松症的主要病理特征为骨量减少及骨微结构退化，成骨细胞是一种功能性细胞并可在骨形成过程中发挥重要作用。
[0003]目前治疗骨质疏松症的常用药物有抗骨代谢类药物，如雌激素、选择性雌激素受体调节剂、双磷酸盐类、降钙素类等；促骨合成类药物，如甲状旁腺激素类药物。这些药物虽然有一定疗效，但是也存在着副作用的风险，如：雌激素与子宫内膜癌、乳腺癌之间的关系仍然存在着争议；结合型雌激素会明显升高HDL胆固醇水平；双膦酸盐类药物容易产生颌骨坏死、肌肉骨骼痛、食道癌、肾功能衰竭不良反应等。
[0004]有研究表明，大型真菌及某些活性成分在提高骨密度、缓解骨质疏松性疼痛等方面具有显著作用。近年来，真菌多糖因其结构多样性和多种生物学功能而受到广泛关注。现有技术中，常采用超声辅助法和酶辅助法提取大型真菌多糖。其中，超声辅助法提取大型真菌多糖的工艺是：大型真菌粉末
→
超声波处理浸提
→
抽滤除渣
→
离心(8 000r/min，10min)
→
取上清液
→
在上清液中加入5％三氯乙酸至提取液不混浊(除蛋白)[18]→
离心(8 000r/min，20min)
→
取上清液60℃下旋蒸至其体积的1/4左右
→
加入3倍体积的95％乙醇静置24～48h
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抽滤
→
滤渣离心(8 000r/min，20min)后取沉淀
→
用无水乙醇洗涤并收集沉淀
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将沉淀溶于蒸馏水透析48h
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冷冻干燥
→
得大型真菌粗多糖。单独使用超声提取菌类多糖，往往采用较高的超声功率，以达到促进多糖成分析出的目的，超声辅助提取法过程中的局部升温以及超声的空化效应，可能会导致多糖结构的破坏，从而降低提取物的有效成分，并且结果重复性较低。此外，有报道称超声波处理导致多糖分子量(MW)下降高达70％。且得到的是粗多糖，为一种多糖混合物，里面可能含有蛋白、肽类残留。
[0005]酶辅助法提取大型真菌多糖的工艺是：取干燥后的大型真菌，用破碎机破碎至过60目筛；称取粉碎后的大型真菌样5g，按照液料比1∶25加入柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲溶液，再加入纤维素酶，放入水浴恒温振荡器中酶解；酶解后置于121℃灭菌锅加热20min进行灭活，离心并取上清液定容至25.0mL，收集2次的溶出液，采用旋转蒸发仪浓缩至100mL，加入400mL无水乙醇至80％浓度，置于4℃冰箱冷藏过夜，离心得到沉淀即为大型真菌粗多糖。相对较高的酶成本是酶辅助提取法的主要缺点之一，此外，酶辅助提取法的规模化是一个挑战，因为酶的活性会受到多种因素的影响，如温度和溶氧等。酶的种类、浓度、温度、pH、反应时间以及液固比对酶辅助提取法的提取率也有影响。得到的同样是粗多糖，为一种多糖混合物，里面可能含有蛋白、肽类残留。
[0006]粗多糖对于提高骨密度、缓解骨质疏松性的作用效果不佳。
[0007]针对现有技术不足，本专利技术的目的是提供一种绣球菌多糖在促进成骨细胞增殖中的应用。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供一种绣球菌多糖，是单一多糖活性物质，具有可有效促进成骨细胞增殖的作用。
[0009]本专利技术的技术方案如下：
[0010]一种绣球菌多糖，由海藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖四种单糖聚合而成，所述绣球菌多糖的化学式如式(Ⅰ)所示：
[0011][0012]进一步地，各单糖组分的质量百分比如下：海藻糖9.21wt％，半乳糖37.29wt％，葡萄糖34.83wt％，甘露糖18.67％。
[0013]进一步地，糖链组成摩尔比为：t
‑
Fuc(p)：t
‑
Man(p)：t
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Glc(p)：t
‑
Gal(p)：3
‑
Glc(p)：6
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Man(p)：4
‑
Gal(p)：6
‑
Gal(p)：3,6
‑
Man(p)：4,6
‑
Glc(p)：2,6
‑
Gal(p)＝9.22：2.38：19.01：3.33：14.35：9.59：11.71：11.59：6.70：3.93：8.19。
[0014]进一步地，所述绣球菌多糖的平均分子量为32249g/mol。
[0015]本专利技术还提供一种绣球菌多糖的制备方法，包括如下步骤：
[0016]步骤S1，将绣球菌子实体粉碎后，通过低功率超声波辅助纤维素酶法进行分离提取，经醇沉得到绣球菌粗多糖；
[0017]步骤S2，将绣球菌粗多糖在蒸馏水中重新溶解，然后在DEAE
‑
52纤维素柱上纯化，获得多糖组分F
‑
1、F
‑
2和F
‑
3；
[0018]步骤S3，在凝胶纯化系统中用0.2M/L的NaCl作为流动相洗脱，得到含量最高的多糖成分F
‑
1；
[0019]步骤S4，将多糖成分F
‑
1在凝胶纯化系统中进一步纯化，得到纯化的绣球菌多糖。
[0020]基于所述绣球菌多糖，本专利技术还提供一种绣球菌多糖在促进成骨细胞增殖中的应用。
[0021]进一步地，绣球菌多糖的浓度为6.25
‑
25μg/ml。
[0022]基于所述绣球菌多糖，本专利技术还提供一种绣球菌多糖在治疗骨质疏松药物中的应用。
[0023]与现有技术相比，本专利技术提供的绣球菌多糖及其制备方法和应用，有益效果在于：
[0024]本专利技术提供的绣球菌多糖，为单一多糖活性物质，在较低浓度时对成骨细胞的增殖具有促进作用，因此可作为一种潜在的治疗骨质疏松的药物。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0026]图1是粗多糖在DEAE
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52纤维素柱上的阴离子交换色谱图；
[0027]图2是多糖组分F
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1在凝胶纯化系统柱上的阴离子交换色谱图；
[0028]图3是SCPS的HPGPC图谱；
[0029]图4是SCPS的FT
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种绣球菌多糖，其特征在于，由海藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖四种单糖聚合而成，所述绣球菌多糖的化学式如式(Ⅰ)所示：2.根据权利要求1所述的绣球菌多糖，其特征在于，各单糖组分的质量百分比如下：海藻糖9.21wt％，半乳糖37.29wt％，葡萄糖34.83wt％，甘露糖18.67％。3.根据权利要求1所述的绣球菌多糖，其特征在于，糖链组成摩尔比为：t
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Fuc(p)：t
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Man(p)：t
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Glc(p)：t
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Gal(p)：3
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Glc(p)：6
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Man(p)：4
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Gal(p)：6
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Gal(p)：3,6
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Man(p)：4,6
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Glc(p)：2,6
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Gal(p)＝9.22：2.38：19.01：3.33：14.35：9.59：11.71：11.59：6.70：3.93：8.19。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：黄晓辉，刘祝祥，冯立国，徐宁，吴芳，王小艳，
申请(专利权)人：吉首大学，
类型：发明
国别省市：