一种有机溶剂-无机盐双水相体系分离纯化黄连多糖的方法技术

本发明专利技术涉及一种有机溶剂

【技术实现步骤摘要】
一种有机溶剂
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无机盐双水相体系分离纯化黄连多糖的方法


[0001]本专利技术属于黄连多糖的分离纯化
，涉及一种有机溶剂
‑
无机盐双水相体系分离纯化黄连多糖的方法。

技术介绍

[0002]黄连为临床常用的名贵中药材，其具有清热燥湿，泻火解毒之功效。黄连的主要活性成分为黄连生物碱，主要包括小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱等异喹啉类生物碱。此外，黄连中的多糖类成分也是黄连的活性成分之一，但目前关注相对较少。据研究报道，黄连多糖具有降血糖、抗炎、免疫调节、神经保护等作用。
[0003]目前黄连多糖主要采用热水提取法来进行提取，但是现有技术中通过醇沉方法得到的黄连多糖中具有一部分蛋白质、大量色素及生物碱存在，进而严重影响提取得到的黄连多糖的纯度。
[0004]黄连多糖中蛋白质的去除主要采用Sevage法，其中涉及到有机溶剂氯仿和正丁醇的使用，而氯仿是一种有毒的有机溶剂，可能引发孕妇自发性流产和胎儿先天畸形，致癌等；正丁醇也是一种低毒类有机溶剂，具有刺激和麻痹作用。因此采用Sevage法提取的黄连多糖存在一定的安全隐患。
[0005]活性炭脱色法是当前常用的多糖脱色方法，但活性炭脱色选择性差，在吸附色素的同时会吸附多糖，造成多糖损失。
[0006]因此，有必要研究一种条件温和、绿色高效、多糖纯度高且适合于工业化生产的分离纯化方法。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种有机溶剂
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无机盐双水相体系分离纯化黄连多糖的方法。
[0008]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0009]1.一种有机溶剂
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无机盐双水相体系分离纯化黄连多糖的方法，所述方法包括如下步骤：
[0010](1)有机溶剂
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无机盐双水相萃取：向黄连粗多糖水溶液中加入有机溶剂和无机盐形成有机溶剂
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无机盐双水相体系，在15～55℃的温度进行萃取，充分静置使两相分层，分别收集得到上相和下相；
[0011](2)脱盐及冷冻干燥：将所述下相进行浓缩后用200～500Da的透析袋进行透析，透析后再浓缩得到黄连多糖浓缩液，向其中加入无水乙醇进行醇沉，将得到的沉淀冷冻干燥后即得纯化的黄连多糖；
[0012]所述有机溶剂
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无机盐双水相体系中包括质量分数为24～32％的有机溶剂和质量分数为17～22％的无机盐；
[0013]所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙二醇、丙酮、正丙醇、异丙醇、正丁醇或异丁醇中的
任意一种或几种，所述无机盐为磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钾、硫酸钾、碳酸钠、柠檬酸钾、柠檬酸钠或硫酸铵中的任意一种或几种。
[0014]优选的，步骤(1)中，所述黄连粗多糖水溶液中黄连粗多糖的质量体积浓度为1～5mg/mL。
[0015]进一步优选的，所述黄连粗多糖按照如下方法制备：
[0016](1)粉碎：将黄连药材烘干，粉碎后过60～100目筛后得到黄连粗多糖粉末；
[0017](2)脱脂：按照1:5～10，g:mL的质量体积比将所述黄连粉末用无水乙醇回流提取2～4次，每次2～3h，过滤后的药渣置于60～70℃烘箱中烘干备用；
[0018](3)提取：按照1:5～10，g；mL的质量体积比将烘干后的药渣加入去离子水中，在70～80℃的温度下提取2～4次，每次1～3h，过滤得到的滤液旋转离心后收集上清液，浓缩至所述上清液总体积的0.015～0.025倍得到浓缩液备用；
[0019](4)制备黄连粗多糖：将所述浓缩液加入无水乙醇至浓缩液中乙醇的体积浓度为50～80％，摇匀后置于0～4℃的冰箱冷藏10～12h，取出后经旋转离心后收集沉淀，冷冻干燥3～4天后即得黄连粗多糖。
[0020]进一步优选的，所述旋转离心的转速为4000～5000r/min。
[0021]优选的，所述步骤(2)中，所述黄连多糖浓缩液和无水乙醇的体积比为1:1～4。
[0022]本专利技术的有益效果在于：本专利技术公开了一种有机溶剂
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无机盐双水相体系分离纯化黄连多糖的方法，主要是将有机溶剂及无机盐加入到黄连粗多糖水溶液中形成双水相体系，由于黄连粗多糖溶液中不同成分在上下相中分配系数的不同，所以其在两相之间可以选择性分配，大部分黄连多糖被萃取到下层的无机盐体系中，而黄连生物碱、色素、蛋白质等杂质被萃取到上层的有机溶剂体系或两相界面中。因此，本专利技术的方法可以有效除去黄连粗多糖中的蛋白质、色素及生物碱，并大幅度提高黄连多糖的纯度(其中除蛋白率为：85～95％、黄连多糖的纯度为：85～95％)，同时避免了三氯甲烷等有机溶剂的使用，更加安全绿色环保，便于工业应用中大批量、高纯度的黄连多糖的获取；并且该方法操作简单，安全有效，绿色环保。
[0023]本专利技术的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本专利技术的实践中得到教导。本专利技术的目标和其他优点可以通过下面的说明书来实现和获得。
附图说明
[0024]为了使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术作优选的详细描述，其中：
[0025]图1为实施例1中黄连粗多糖经乙醇
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硫酸铵双水相萃取的纯化效果；
[0026]图2为实施例1中经过乙醇
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硫酸铵双水相纯化后上相中总生物碱的HPLC法测定结果；
[0027]图3为实施例1中经过乙醇
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硫酸铵双水相纯化后下相中总生物碱的HPLC法测定结果。
具体实施方式
[0028]以下通过特定的具体实例说明本专利技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点与功效。本专利技术还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本专利技术的精神下进行各种修饰或改变。需要说明的是，以下实施例中所提供的图示仅以示意方式说明本专利技术的基本构想，在不冲突的情况下，以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0029]实施例1
[0030]一种有机溶剂
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无机盐双水相体系分离纯化黄连多糖的方法，具体包括如下步骤：
[0031](1)制备黄连粗多糖：将黄连药材粉碎后过过60～100目筛后得到黄连粉末；准确称取黄连粉末50.0g，按照1:5料液质量体积比加入250mL无水乙醇中，回流提取3次，每次2h，过滤得到的药渣置于60℃的烘箱中烘干；将烘干的药渣加入料液质量体积比为1:10的去离子水500mL，于75℃提取3次，每次2h，过滤得到的滤液以4000r/min的转速离心10min，收集上清液并将其体积浓缩至0.02倍；再向浓缩液中缓慢加入无水乙醇至无水乙醇的体积浓度为75％，摇匀本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种有机溶剂
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无机盐双水相体系分离纯化黄连多糖的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)有机溶剂
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无机盐双水相萃取：向黄连粗多糖水溶液中加入有机溶剂和无机盐形成有机溶剂
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无机盐双水相体系，在15～55℃的温度进行萃取，充分静置使两相分层，分别收集得到上相和下相；(2)脱盐及冷冻干燥：将所述下相进行浓缩后用200～500Da的透析袋进行透析，透析后再浓缩得到黄连多糖浓缩液，向其中加入无水乙醇进行醇沉，将得到的沉淀冷冻干燥后即得纯化的黄连多糖；所述有机溶剂
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无机盐双水相体系中包括质量分数为24～32％的有机溶剂和质量分数为17～22％的无机盐；所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙二醇、丙酮、正丙醇、异丙醇、正丁醇或异丁醇中的任意一种或几种，所述无机盐为磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钾、硫酸钾、碳酸钠、柠檬酸钾、柠檬酸钠或硫酸铵中的任意一种或几种。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述黄连粗多糖水溶液中黄...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈前锋，胥叶，杨军，龙潇云，吴诗慧，龙艳，金丽来，章雪莲，袁吕江，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：