一种海蛇尾多糖硫酸酯衍生物的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种海蛇尾多糖硫酸酯衍生物的制备方法及应用，所述方法包括以下步骤：S1、将海蛇尾烘干粉碎，加水提取后酶解，再加入过氧化物脱色，醇沉后浓缩冻干得到海蛇尾总多糖；S2、将海蛇尾总多糖溶解于适量的超纯水，采用阴离子交换柱分离，收集纯水组分，再采用分子排阻色潽法进一步纯化，制得所述的海蛇尾多糖TPG；S3、在氮气氛围下，取适量TPG于二甲基亚砜中溶解，进行硫酸酯化改性，无水乙醇醇沉，4℃静置，反复盐析醇沉，复溶后离心，采用阴离子交换柱纯化，透析脱盐，浓缩，冻干，得到海蛇尾多糖硫酸酯衍生物TPGS。本发明专利技术的制备的海蛇尾多糖硫酸酯衍生物TPGS可作为潜在的抗凝药物治疗血栓性疾病，改善人类健康。改善人类健康。改善人类健康。

【技术实现步骤摘要】
一种海蛇尾多糖硫酸酯衍生物的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及医药
，尤其是涉及一种海蛇尾多糖硫酸酯衍生物的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]心血管疾病严重威胁人类的健康，其中包括血栓性疾病。机体内血管内皮细胞受损、血流减慢或血流方向改变，以及血液凝固性改变等导致血栓的形成。目前临床常见的预防和治疗血栓的药物是以肝素或类肝素为代表的抗凝剂。但肝素的长期使用会引起许多副作用如血小板的减少、骨质疏松及出血性并发症，且来源于哺乳动物如猪和牛的肠黏膜的肝素制剂具有病毒污染的风险。研发药效显著且毒副作用小的抗凝剂仍是新药开发的关注点。
[0003]中药多糖大都具有良好的免疫调节和抗肿瘤等活性受到了广泛关注。研究发现，多糖的生物活性高度依赖于其物理化学性质和结构特征。经过结构修饰如硫酸化、磷酸化、乙酰化等不仅可以改变其分子量大小、水溶性等理化性质，还可以增强其药理活性，甚至产生新的生物活性。来源于天然提取或硫酸化化学修饰的硫酸化多糖，生物活性高，其中包括抗凝血活性。海洋生物是硫酸化多糖的丰富来源，在新药开发上具有潜在的应用。海蛇尾广泛分布在南极、北极和热带的深水和浅水海洋栖息地。然而，与其他棘皮动物相比，对该物种多糖的研究非常有限。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种海蛇尾多糖硫酸酯衍生物的制备方法及应用，制备的海蛇尾多糖硫酸酯衍生物TPGS可作为潜在的抗凝药物治疗血栓性疾病，改善人类健康。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供一种海蛇尾多糖的制备方法，按照以下步骤制备：
[0006]S1、将海蛇尾烘干粉碎，加水提取后酶解，再加入过氧化物脱色，醇沉后浓缩冻干得到海蛇尾总多糖；
[0007]S2、将海蛇尾总多糖溶解于适量的超纯水，采用阴离子交换柱分离，收集纯水组分，再采用分子排阻色潽法进一步纯化，制得海蛇尾多糖TPG。
[0008]优选的，步骤S1中，加水提取，干粉和纯水料液比为1:(2～5)，提取温度为45～60℃，提取时间16～18h，提取液调pH值至2～3除蛋白，酶解后用氢氧化钠调pH至中性。
[0009]优选的，将步骤S2获得的TPG通过酸解后制备海蛇尾多糖低聚物，其结构特征与所述TPG一致。
[0010]优选的，所述TPG及其低聚物具有如下结构特征：
[0011][0012]式(I)中，n为1
‑
100的整数；A、A
’
、B、C、D为α
–
D
–
葡萄糖
–1–
基，E为葡萄糖二醇。
[0013]优选的，TPG及其低聚物由
→
4)
‑
α
‑
D
‑
Glcp
‑
(1
→
重复单元形成主链，其二糖侧链α
‑
D
‑
Glc
‑
(1
→
4)
‑
α
‑
D
‑
Glc
‑
(1
→
连接于主链的C
‑
6位。
[0014]一种海蛇尾多糖硫酸酯衍生物的制备方法，按照以下方法制备：
[0015]在氮气氛围下，取适量TPG于二甲基亚砜中溶解，进行硫酸酯化改性，无水乙醇醇沉，4℃静置，反复盐析醇沉，复溶后离心，采用阴离子交换柱纯化，透析脱盐，浓缩，冻干，得到硫酸酯衍生物TPGS。
[0016]优选的，步骤S3中硫酸酯化改性所采用的方法为氯磺酸
‑
吡啶法、三氧化硫
‑
吡啶法、三氧化硫吡啶
‑
DMF法或甲酰胺
‑
氯磺酸法。
[0017]优选的，所述TPGS具有如下结构特征：
[0018][0019]式(II)中，n、A、B、C、D定义与式(I)相同；R为相互独立的H或
‑
SO3H。
[0020]优选的，TPG单糖组成为葡萄糖，总糖含量为90～100％；TPGS总糖含量为40～70％，硫酸基含量为30～60％，取代度为0.5～2.0。
[0021]一种TPGS在制备抗凝剂上的应用，所述抗凝剂为在药学上可接受的盐，所述的药学上可接受的盐为钙盐、钠盐或钾盐。
[0022]因此，本专利技术采用上述一种海蛇尾多糖硫酸酯衍生物的制备方法及应用，具有如下有益效果：
[0023]1、本专利技术制备的海蛇尾多糖TPG由葡萄糖组成，是一种含有二糖侧链结构新颖的多糖，该多糖的结构组成明显不同于文献报道及已有专利中制备的葡聚糖。
[0024]2、本专利技术中的一种TPGS具有强效FXase抑制活性，其EC
50
值与LMWH的活性相当。具有低出血倾向的内源性凝血途径抑制剂已成为新型抗凝药物研究的热点。FXase作为抗凝血靶点，可以减少出血倾向等副作用。因此，本专利技术一种海蛇尾多糖的硫酸酯衍生物TPGS对于开发新型抗凝剂治疗血栓性疾病具有重要价值。
[0025]下面通过附图和实施例，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
[0026]图1为海蛇尾多糖的Sepharose CL
‑
6B凝胶柱层析洗脱曲线；
[0027]图2为海蛇尾TPG、TPGS、低聚物F1～F3的高效液相色谱图、单糖组成分析、红外光谱图；
[0028]图3为TPG及其低聚物F1～F3的1H NMR和13C NMR检测图谱；
[0029]图4为TPG的低聚物F2的DEPT
‑
135检测图谱；
[0030]图5为TPG的低聚物F2的1H
‑
1H COSY图谱；
[0031]图6为TPG的低聚物F2的1H
‑
1H TOCSY图谱；
[0032]图7为TPG的低聚物F2的1H
‑
13C HMBC图谱；
[0033]图8为TPG的低聚物F3的1H
‑
1H ROESY图谱；
[0034]图9为TPG的低聚物F3的1H
‑
13C HSQC图谱；
[0035]图10为TPG和TPGS的1H
‑
13C HSQC叠加图谱；
[0036]图11为TPGS对APTT、PT、TT、内源性FXase、因子Xa和因子Ⅱa的影响。
具体实施方式
[0037]以下通过附图和实施例对本专利技术的技术方案作进一步说明。
[0038]除非另外定义，本专利技术使用的技术术语或者科学术语应当为本专利技术所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。
[0039]实施例1：一种海蛇尾多糖(Trichasterpalmiferus glucan,TPG)的制备
[0040]1.1材料
[0041]海蛇尾(Trichasterpalmiferus)购自广西本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种海蛇尾多糖的制备方法，其特征在于，按照以下步骤制备：S1、将海蛇尾烘干粉碎，加水提取后酶解，再加入过氧化物脱色，醇沉后浓缩冻干得到海蛇尾总多糖；S2、将海蛇尾总多糖溶解于适量的超纯水，采用阴离子交换柱分离，收集纯水组分，再采用分子排阻色潽法进一步纯化，制得海蛇尾多糖TPG。2.根据权利要求1所述一种海蛇尾多糖的制备方法，其特征在于：步骤S1中，加水提取，干粉和纯水料液比为1:(2～5)，提取温度为45～60℃，提取时间16～18h，提取液调pH值至2～3除蛋白，酶解后用氢氧化钠调pH至中性。3.根据权利要求1所述一种海蛇尾多糖的制备方法，其特征在于：将步骤S2获得的TPG通过酸解后制备海蛇尾多糖低聚物，其结构特征与所述TPG一致。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述一种海蛇尾多糖的制备方法，其特征在于，所述TPG及其低聚物具有如下结构特征：式(I)中，n为1
‑
100的整数；A、A
’
、B、C、D为α
–
D
–
葡萄糖
–1–
基，E为葡萄糖二醇。5.根据权利要求1
‑
3任一项所述一种海蛇尾多糖的制备方法，其特征在于：TPG及其低聚物由
→
4)
‑
α
‑
D
‑
Glcp
‑
(1
→
重复单元形成主链，其二糖侧链α
‑
D
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：袁清霞，赵龙岩，马海琼，唐浩，谭鸿杰，李婷婷，魏时英，黄金文，姚玥，胡亚平，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：