一种宿主细胞蛋白TAB1及应用制造技术

本发明专利技术公开一种宿主细胞蛋白TAB1及应用，涉及基因生物技术领域。本发明专利技术公开宿主细胞蛋白TAB1，所述TAB1氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；同时公开编码宿主细胞蛋白TAB1的核苷酸，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；本发明专利技术进一步通过免疫共沉淀实验验证TAB1与HFMD病毒的非结构蛋白3D的互作关系，并发现TAB1可通过激活NF

【技术实现步骤摘要】
一种宿主细胞蛋白TAB1及应用


[0001]本专利技术涉及基因生物
，涉及一种宿主细胞蛋白TAB1及应用，具体涉及TAB1在抑制HFMD病毒复制中的应用。

技术介绍

[0002]手足口病(Hand
‑
Foot
‑
and
‑
MouthDisease，HFMD)是由多种肠道病毒感染引起的儿童急性传染病。多数幼儿患者发病突然，以发热和手足、口腔等部位皮疹、疱疹、溃疡为主要症状，少数患儿可并发无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性痹、神经源性肺水肿和心肌炎严重并发症，个别重症患儿病情进展迅速，可导致死亡。近年来全球各地出现了爆发和流行，重症率和死亡率都直线上升，对幼儿健康造成严重威胁，且造成巨大的经济损失。HFMD的病原体为小核糖核酸病毒科，有20多种(型)，主要包括肠道病毒71型(enterovirustype71，EV71)、柯萨奇病毒(coxsackievirus，CV)A群和B群以及埃可病毒(entericcytopathichumanorphanvirus，ECHO)等，然而截止到目前为止，尚无HFMD的特异性药物。因此，开发抗病毒药物对治疗HFMD病毒感染至关重要。
[0003]HFMD病毒为无包膜的单股正链RNA病毒，基因组全长约7400bp，可编码2194个氨基酸的多聚蛋白前体，并进一步水解为三个前体蛋白(P1、P2、P3)。P1前体蛋白基因编码四种结构蛋白(VP1、VP2、VP3和VP4)，主要负责病毒核衣壳的组装，其中VP1基因具有主要的中和抗原决定簇，是肠道病毒血清学分型的重要依据。P2和P3基因区编码的七种非结构蛋白(nonstructuralprotein，NSP)(2A、2B、2C、3A、3B、3C和3D)在病毒复制、细胞自噬和逃逸天然免疫中发挥了重要作用。
[0004]TAB1
‑
TAK1复合物在激活炎症反应方面起着至关重要的作用，并参与调控多种病理过程，如TAB1介导的p38α激活促进了丙型肝炎病毒的复制，进而导致肝癌的发生发展。然而，TAB1通过其他炎症反应在抗病毒免疫中的调节机制以前还没有报道。我们的研究揭示了宿主蛋白TAB1的一种新的抗病毒机制，为开发抗HFMD病毒感染的药物提供了科学依据。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于，提供一种宿主细胞蛋白TAB1，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述TAB1可以抑制HFMD病毒复制，用于HFMD预防以及治疗性药物的制备，应用于抗病毒药物研发。
[0006]为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本专利技术是通过以下技术方案实现：
[0007]一种宿主细胞蛋白TAB1，所述TAB1氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]进一步的，所述宿主细胞蛋白TAB1通过基因合成、基因克隆、蛋白分离纯化等手段获得，无需进行修饰。
[0009]本专利技术的另一目的在于，提供一种编码宿主细胞蛋白TAB1的核苷酸，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0010]本专利技术的另一目的在于，提供宿主细胞蛋白TAB1在抑制HFMD病毒复制的应用。
[0011]进一步的，TAB1与HFMD病毒的非结构蛋白3D的互作关系，并发现TAB1可通过激活NF
‑
κB通路，上调炎症因子的表达。
[0012]本专利技术的另一目的在于，提供宿主蛋白TAB1在制备HFMD预防或治疗产品中的应用；
[0013]进一步的，所述HFMD预防或治疗产品为HFMD预防或治疗性药物。
[0014]本专利技术的有益效果：
[0015]本专利技术公开宿主细胞蛋白TAB1，所述TAB1氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；同时公开编码宿主细胞蛋白TAB1的核苷酸，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0016]本专利技术公开的TAB1与HFMD病毒的非结构蛋白3D的互作关系，并发现TAB1可通过激活NF
‑
κB通路，上调炎症因子的表达；
[0017]本专利技术公开的宿主蛋白TAB1可以抑制HFMD病毒复制，用于HFMD预防以及治疗性药物的制备，在抗病毒药物研发方面具有一定意义。
[0018]当然，实施本专利技术的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
附图说明
[0019]图1为本专利技术实施例所述蛋白TAB1可抑制HFMD病毒复制；
[0020]图2本专利技术实施例所述蛋白TAB1与HFMD病毒非结构蛋白3D的互作关系；
[0021]图3本专利技术实施例所述蛋白TAB1可上调炎症因子的表达；
[0022]图4本专利技术实施例所述蛋白TAB1可通过IκBα磷酸化激活NF
‑
κB通路。
具体实施方式
[0023]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将结合附图对实施例对本专利技术进行详细说明。
[0024]本专利技术所使用的药品、试剂、仪器、设备等如无特殊说明，均可通过商业化途径购买获得，涉及的实验方法如无特殊说明，均为本领域常规实验操作或依照相应试剂的产品说明书进行。
[0025]实施例1
[0026]本实施例中，TAB1能够抑制HFMD病毒
‑
CVB5和EV71的复制。
[0027]取100μL的无血清培养基、2μg的pcDNA3.1
‑
TAB1质粒以及4μL转染试剂EL溶液混合；混合液室温静置孵育20min后，加入提前铺好的6孔板RD细胞中，同时设置对照组，于37℃、5％CO2培养箱中继续培养24h。随后进行CVB5或EV71病毒刺激，24h后提取各孔中收集的细胞沉淀，实时荧光定量PCR以及Western Blot检测细胞中病毒VP1的表达水平。如图1所示，TAB1能够抑制CVB5和EV71病毒的复制。
[0028]实施例2
[0029]本实施例中，TAB1能够与HFMD病毒
‑
CVB53D相互作用
[0030]将本实验室构建的pcDNA3.1
‑
3D
‑
2Flag表达载体质粒转染RD细胞，37℃、CO2培养箱中培养24小时后，收集细胞沉淀。裂解后加入TAB1或Flag抗体进行免疫共沉淀，WesternBlot检测蛋白互作情况。如图2所示，TAB1与3D蛋白具有互作关系。
[0031]实施例3
[0032]本实施例中，TAB1可上调炎症因子的表达。
[0033]取100μL的无血清培养基、2μg的pcDNA3.1
‑
TAB1质粒以及4μLEL溶液混合，得到混合液；室温静置孵育20min后，加入提前铺好的6孔板细胞中，同时设置对照组，于37℃、5％CO2培养箱中继续培养24h。随后进行CVB5病毒刺激，24h后收集的细胞沉淀以及上清。细胞沉淀提取RNA后，实时荧光定量PCR检测炎症因子mRNA表达水平；上清采用ELISA测定炎症因子的表达量。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种宿主细胞蛋白TAB1，其特征在于：所述TAB1氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.如权利要求1所述的宿主细胞蛋白TAB1，其特征在于：所述宿主细胞蛋白TAB1通过基因合成、基因克隆、蛋白分离纯化手段获得，无需进行修饰。3.一种编码权利要求1宿主细胞蛋白TAB1的核苷酸，其特征在于：所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.如权利要求1所述的宿主细胞蛋白TAB1在抑...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈伟，张佳玉，孙博，滕培英，周小爽，李静，高静茹，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：