一种重组CA125基因工程抗原的构建方法和制备工艺技术

一种重组CA125基因工程抗原的构建方法和制备工艺，涉及基因工程技术领域，具体涉及一种重组CA125基因工程抗原的构建方法和制备工艺。一种重组CA125基因工程抗原的构建方法及制备工艺，它包括以下步骤：步骤一：利用基因工程手段，从CA125全长序列中选取了2段作为目的片段，将目的片段通过酶切连接到目的载体pET

【技术实现步骤摘要】
一种重组CA125基因工程抗原的构建方法和制备工艺


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种重组CA125基因工程抗原的构建方法和制备工艺。

技术介绍

[0002]MUC16基因，又称CA125，该基因位于人类染色体19p13.2上，由179kb的基因组DNA编码。MUC16是一种I型跨膜蛋白，主要包含三个部分：N端结构域、串联重复结构域和C端结构域。N端结构域长度约12,000个氨基酸；TR结构域包含18个
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60个可变数目的串联重复序列，每个重复序列有156个氨基酸，包含56个海胆精子蛋白
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肠激酶
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聚集蛋白结构域以及两个锚蛋白域；C端结构域由284个氨基酸组成，又可以分为细胞外部分、单次跨膜结构域，细胞质尾端结合域和推定的核定位信号RRRKK。附着于卵巢癌细胞表面的蛋白会发生变化，其长度可能会截短，或者其侧链的改变，这些都将导致正常细胞与卵巢癌细胞的糖基化模式不同，因此，CA125蛋白可以作为筛查卵巢癌等癌症的特异性标志物。
[0003]随着生物技术的发展，蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组CA125基因工程抗原的构建方法和制备工艺，其特征在于：它包括以下步骤：步骤一：利用基因重组技术，从CA125全长序列中选取了2段作为目的片段，将目的片段通过酶切连接到目的载体pET
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52b质粒上，将pET
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52b质粒转化入感受态细胞中，得到高表达的菌株，将得到的菌株放置于甘油菌中保存；步骤二：取上述甘油菌于含有50ug/ml氨苄卡那霉素的固体LB培养基平板上划线，在37℃培养箱中放置12
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16h，培养得到重组菌的单菌落；将获得的重组蛋白菌体放置于200ml含kan的液体LB培养基中，在37℃，220rpm摇床中悬浮培养至OD600为0.6
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0.8时，加入诱导剂使培养液终浓度为1mM，继续在37℃下诱导表达4h；步骤三：将诱导剂诱导表达的菌液，在4℃下，使用离心机以6500rpm/min离心5min，收集菌体沉淀；用PBS重悬，于冰浴中通过超声波细胞破碎机进行破碎；破碎完成后，4℃，使用离心机以12000rpm/min离心5min，收集包涵体沉淀；步骤四：得到的包涵体沉淀用包涵体洗涤液A重悬，室温下，使用离心机以8500rpm/min离心5min，弃上清，重复清洗一次；再用包涵体洗涤液B清洗一次；得到包涵体沉淀再加入包涵体溶解液，重悬混匀后，超声波溶解10min，超声功率为100W，3s开，3s关。步骤五：将溶解后的包涵体用稀释液稀释50倍；使用10k超滤管将稀释后的包涵体溶解液进行浓缩，浓缩至蛋白浓度1mg/ml以上时，向超滤管中加入10倍体积的缓冲液，继续超滤浓缩；重复3次完成换液；得到重组CA125基因工程抗原；步骤六：利用化学免疫分析方法，吖啶酯化学发光平台进行检测CA125活性；所述步骤一中选取的2段目的片段为重复频率高且存在特异性的重复序列。2.根据权利要求1所述的一种重组CA125基因工程抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：周小曼，陈川，孙康成，
申请(专利权)人：深圳赛柏生物有限公司，
类型：发明
国别省市：