用于补体因子H(CFH)的结合蛋白制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合补体因子H(CFH)的新型蛋白。本发明专利技术进一步涉及CFH的生产方法，特别是CFH的纯化方法。本发明专利技术的新型CFH结合配体是先进且强大的工具，因为它们允许通过亲和色谱纯化CFH的方法。谱纯化CFH的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于补体因子H(CFH)的结合蛋白


[0001]本专利技术涉及特异性结合补体因子H(CFH)的新型蛋白。本专利技术进一步涉及CFH的生产方法，特别是CFH的纯化方法。本专利技术的新型CFH结合配体是先进且强大的工具，因为它们允许通过亲和色谱(affinity chromatography，亲和色谱法)纯化CFH的方法。

技术介绍

[0002]补体因子H(CFH；β
‑
1H球蛋白)是一种天然存在于血浆中的血清糖蛋白。CFH是补体系统的替代路径的主要流体相调节剂，防止C3和C5转化酶的形成并且促进已形成的转化酶的分解。重要的是，CFH充当通过酶促裂解使C3b失活的辅因子。如果由于CFH的突变，C3b没有失活，结果可能是严重的疾病，例如肾损伤。其它并发症可能是可能的。已知因子H用于治疗应用。为了提供因子H，该因子必须以高度纯化的活性形式提供。
[0003]然而，目前CFH的生产过程涉及使用多个纯化步骤的复杂程序的CFH(或重组CFH)的纯化过程。例如，一种已知的CFH纯化是三步色谱纯化(疏水相互作用、肝素亲和色谱和离子交换色谱)。纯化方法后的收率很低(只有约15％)，并且只能小规模纯化。
[0004]本领域强烈需要提供用于更简单和有效的生产方法的方法，特别是CFH的纯化方法。本专利技术通过提供用于CFH的新型结合蛋白来满足这种需要。这些新型结合蛋白特别有利，因为它们允许在亲和色谱以及诊断应用中精确捕获因子H。这将开启涉及CFH纯化的成功生产，例如，用于医疗目的的经济可行的数量。
[0005]以上概述并不一定描述了由本专利技术所解决的所有问题。

技术实现思路

[0006]本公开提供以下项目1至15，但不具体地限于此：
[0007]1.一种用于补体因子H(CFH)的结合蛋白，包含与选自SEQ ID NO:1
‑
25的组中的任一个具有至少80％序列同一性的氨基酸序列，其中该结合蛋白对CFH具有小于1μM的结合亲和力。优选的是以下用于CFH的结合蛋白，其包含与SEQ ID NO:13具有至少89.5％序列同一性的氨基酸序列，其中该结合蛋白对CFH具有小于1μM的结合亲和力。
[0008]2.根据项目1的用于CFH的结合蛋白，其中CFH结合蛋白对CFH具有小于500nM的结合亲和力。
[0009]3.根据项目1
‑
2的用于CFH的结合蛋白，其中2、3、4、5或6个CFH结合蛋白彼此连接。
[0010]4.根据项目3的用于CFH的结合蛋白，其中所述结合蛋白是同源多聚体或异源多聚体。
[0011]5.根据项目1
‑
4的用于CFH的结合蛋白，其中所述结合蛋白另外包含至少一种其他分子，该其他分子优选地选自下组：(a)非免疫球蛋白(Ig)结合蛋白，或(b)诊断活性部分，该诊断活性部分任选地选自放射性核素、荧光蛋白、光敏剂、染料或酶或以上的任意组合。
[0012]6.根据项目1
‑
5中任一项的用于CFH的结合蛋白，包含SEQ ID NO:7、9、10、13、14、15、16、17、18、19和23中任一个的氨基酸序列，或与其具有至少89.5％同一性的氨基酸序
列。
[0013]7.根据项目1
‑
6中任一项的用于CFH的结合蛋白，用于在诊断与CFH相关的疾病中使用。
[0014]8.根据项目1
‑
7中任一项的用于CFH的结合蛋白，用于在技术应用如CFH或包含CFH的蛋白的亲和纯化中使用。
[0015]9.一种亲和分离基质，包含根据项目1
‑
8中任一项的用于CFH的结合蛋白。
[0016]10.根据项目1
‑
8中任一项的用于CFH的结合蛋白或根据项目9的亲和分离基质用于CFH或包含CFH的蛋白的亲和纯化的用途。
[0017]11.一种生产CFH的方法，包括使用亲和色谱基质的至少一个色谱步骤，该亲和色谱基质具有特异性结合CFH的亲和力，其中将根据项目1
‑
8中任一项的用于CFH的结合蛋白偶联至所述亲和色谱基质。
[0018]12.根据项目11的方法，该方法包括：(a)提供含有CFH的液体；(b)提供亲和分离基质，该亲和分离基质包含与所述亲和分离基质偶联的至少一种根据项目1
‑
8中任一项的用于CFH的结合蛋白；(c)在允许至少一种根据项目1
‑
8中任一项的用于CFH的结合蛋白结合的条件下使所述亲和分离基质与所述液体接触；(d)从所述亲和纯化基质洗脱所述CFH；和(e)获得所述纯化的CFH。
[0019]13.根据项目1
‑
8的用于CFH的结合蛋白在确定CFH存在的方法中的用途。
[0020]14.一种分析液体样品中CFH存在的方法，该方法包括以下步骤：
[0021](i)提供含有CFH的液体，
[0022](ii)提供根据项目1
‑
8的用于CFH的结合蛋白，
[0023](iii)在允许根据项目1
‑
8的CFH的结合蛋白与CFH结合的条件下，使(i)的液体与该结合蛋白接触，
[0024](iv)分离根据项目1
‑
8的CFH的复合物，和
[0025](v)确定(i)的液体中根据项目1
‑
8的用于CFH的结合蛋白的量。
[0026]15.一种编码根据项目1
‑
8中任一项的结合蛋白的多核苷酸。
[0027]本专利技术的该概述不是限制性的，并且本专利技术的其它方面和实施方式将从以下描述、实施例和附图中变得明显。
附图说明
[0028]图1：用于CFH的结合蛋白的氨基酸序列。图1A：SEQ ID NO:1
‑
22的氨基酸序列。图1B：与SEQ ID NO:13具有至少95％同一性的用于CFH的结合蛋白的氨基酸(SEQ ID NO:13、14、15、17、23)的多序列比对。
[0029]图2：CFH结合蛋白的分析结果(结合CFH和纯化)。
[0030]图3：来自SE
‑
HPLC的级分的SDS
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PAGE，其显示了CFH是通过Praesto纯化的，Praesto具有SEQ ID NO:23(＝SEQ ID NO:13，缺失了2个N
‑
末端氨基酸；CID213108)的氨基酸的固定化CFH亲和配体；泳道7显示了CFH的洗脱级分(在pH 3.5下洗脱)。
[0031]图4：从Praesto
‑
213108洗脱的纯化CFH的SE_HPLC色谱图，该Praesto
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213108具有SEQ ID NO:23(与SEQ ID NO:13相同，但缺失了2个N末端氨基酸；CID213108)的固定化CFH亲和配体。在通过Praesto
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213本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于补体因子H(CFH)的结合蛋白，包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少89.5％序列同一性的氨基酸序列，其中所述结合蛋白对CFH具有小于1μM的结合亲和力。2.根据权利要求1所述的用于CFH的结合蛋白，其中CFH结合蛋白对CFH具有小于500nM的结合亲和力。3.根据权利要求1
‑
2所述的用于CFH的结合蛋白，其中2、3、4、5或6个CFH结合蛋白彼此连接。4.根据权利要求3所述的用于CFH的结合蛋白，其中所述结合蛋白为同源多聚体或异源多聚体。5.根据权利要求1
‑
4所述的用于CFH的结合蛋白，其中所述结合蛋白另外包含至少一种其他分子，所述其他分子优选地选自下组：(a)非免疫球蛋白(Ig)结合蛋白，或(b)诊断活性部分，所述诊断活性部分任选地选自放射性核素、荧光蛋白、光敏剂、染料或酶或以上的任意组合。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的用于CFH的结合蛋白，包含SEQID NO:7、9、10、14、15、16、17、18、19和23中任一个的氨基酸序列。7.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的用于CFH的结合蛋白，用于在诊断与CFH相关的疾病中使用。8.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的用于CFH的结合蛋白，用于在CFH或包含CFH的蛋白的亲和纯化中使用。9.一种亲和分离基质，包含根据权利要求1
‑
6中任一项所述的用于CFH的结合蛋白。10.根据权利要求1
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6中任一项所述的用于CFH的结合蛋白或根据权利要求9所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：埃里克，
申请(专利权)人：纳维格蛋白质有限公司，
类型：发明
国别省市：