一种兔抗小鼠IQUB多克隆抗体的制备与应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，涉及一种兔抗小鼠IQUB多克隆抗体的制备方法与应用；根据小鼠IQUB开放阅读框全长设计携带酶切位点的PCR引物，PCR扩增小鼠IQUB开放阅读框全长，将IQUB蛋白编码序列全长插入pET

【技术实现步骤摘要】
一种兔抗小鼠IQUB多克隆抗体的制备与应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种兔抗小鼠IQUB多克隆抗体的制备方法与应用。

技术介绍

[0002]IQUBI(IQ motif and ubiquitin domain containing,IQUB)发现于2002年，位于染色体7q31.32，其编码的蛋白主要包含两个结构域，泛素样结构域和IQ结构域。一些已报道的研究证实了部分含IQ基序的分子在精子形成过程中具有重要作用，例如：Myo5A，位于睾丸精子的顶体，与顶体形成和胞吐作用有关；IQCF1，在小鼠睾丸精子细胞的顶体区域的表达，通过对IQCF1基因敲除小鼠模型的研究，发现IQCF1与精子顶体反应有关；IQCB1，与纤毛内的货物运输有关。IQCD是 nexin
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dynein 调节复合物 (N
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DRC) 的一个亚基。 N
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DRC 是轴丝“9 + 2”微管组织的一个组成部分，在调节鞭毛和纤毛运动中起关键作用，同时也是顶体相关基因，在精子发生的晚期，它定位于圆形和长形精子细胞以及成熟精子的顶体区域，在受精和顶体反应中发挥作用。IQCG定位变形中的精子细胞的精子领结构，IQCG基因敲除会导致小鼠雄性不育，这是由于精子发生的严重缺陷，精子完全不动。IQCG敲除精子鞭毛中的轴丝是紊乱的，在IQCG敲除小鼠精子细胞中几乎找不到任何典型的（“9+2”）微管结构。
[0003]有研究报道IQUB的表达具有生殖细胞特异性，其mRNA在圆形精子细胞中表达，蛋白质在伸长精子细胞和成熟精子中表达，主要位于成熟精子的顶体和尾部。表明IQUB可能在精子发生和/或受精过程中具有多种功能。综上，许多含IQ基序的分子与精子的顶体形成、顶体反应、纤毛内的货物转运、纤毛和鞭毛运动的调节等过程相关，IQUB作为其中之一，可能在精子发生过程中发挥了重要作用，但其在精子发生中的具体作用及机制尚未阐明。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于解决现有技术中的不足，提供一种兔抗小鼠IQUB多克隆抗体的制备方法与应用。为了解决上述问题，本专利技术根据小鼠IQUB开放阅读框全长设计携带酶切位点的PCR引物，PCR扩增小鼠IQUB开放阅读框全长，将IQUB蛋白编码序列全长插入pET
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30a(+)载体，构建pET
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30a
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IQUB重组质粒。将重组质粒转化入大肠杆菌BL21中，异丙基
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β
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D
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硫代半乳糖苷(IPTG)诱导IQUB蛋白表达。利用组氨酸融合蛋白纯化柱纯化蛋白，使用梯度浓度的尿素复性的原核蛋白。使用复性的IQUB蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。应用ELISA测定多克隆抗体效价，Western blot法及免疫荧光染色法分析多克隆抗体的有效性与特异性。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：第一方面，本专利技术提供一种IQUB原核蛋白，所述IQUB原核蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0006]SEQ ID NO：1：MSDPEEERVADSTAHYEEAGKVISIPRPSDEAEGSDVMPEQDDEVQELTTESEENVERHSEFSLSTPKSDDSKPREEVTSLGSASGSQDQDYRLLDYQKGEDDELLFLHKIKAIKETLQTSVRESIATVKIV
LIPAGQEIIMPFRVDAPFRFLKEHFAHLLHIPHYVLQITHEGIIVGNNESLIQYGIKPQEIVQVEVFSTLPDQYPVRRIEGLSEGSQIITVTIQTSIDRYEEVAVEIIKSDFHKPFLGGFRHKITGLEYHNAGTQTVPRKIPEKDNLFCRDTQTVFQKKKLQQTTNTTSTQMTKIGVYVSNMTDKLLKPGNYFSAAEYHARRLHAVIVIQTSYRRWHAKRYVESLRKQKKLRLEWEEEQELLKIQEKEEWIRMDYYRRHNPKTTEDFELLYNALELWRQEEVEQICHYSSEAERKAALCELLEKETQMIASIGRHRSAARMERQDAAIQAFLDKCSAPNVWRRGDGKTIEMDTQFTIRARELQSIYKCILLKDLSQDERLDILLTLKHTVKEHECKLTQEILELIDREVDLMMRGVKPHNLEGLRKRITTLFIHYIKTPLFNPEVAKYLKVPQDPLKFYDTIYFCHSCQNYLPSVEFSVSPTSHRVYRCRHCINLENETQRRESFLKYKCLLQRLYYSEADYGDNSQIAFLMQLQDIKYLTENIWASQSALSAWDDLNDLVMVRWDKHVEWSPWNCILLTKDESTAHLRLPSIEKGYGHHFVHKIKHKHILAKNYFSQIPTLASLILNDDEVEDIRSKHSTKSPPKIIITRRIQPH。
[0007]所述IQUB原核蛋白的编码序列为IQUB开放阅读框全长序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2。
[0008]SEQ ID NO：2：ATGTCTGATCCCGAGGAAGAACGTGTCGCTGACTCCACCGCCCACTATGAAGAGGCTGGCAAAGTCATCAGTATTCCTCGTCCTTCAGACGAAGCAGAAGGGTCAGATGTGATGCCAGAGCAAGACGATGAAGTGCAGGAACTCACCACCGAGAGCGAGGAGAACGTGGAGAGGCATAGTGAATTTAGTCTTTCAACCCCCAAATCCGACGACTCCAAACCCAGGGAAGAGGTCACGTCCCTTGGAAGTGCCTCAGGATCTCAGGATCAAGATTACAGACTTTTGGATTACCAGAAAGGAGAAGATGATGAGCTGTTATTTCTGCATAAGATAAAAGCTATAAAGGAGACTTTGCAGACGTCAGTGAGAGAGTCTATAGCAACAGTAAAAATTGTACTTATTCCTGCAGGCCAGGAAATTATAATGCCTTTTAGAGTTGATGCTCCATTTAGATTCCTCAAGGAGCACTTTGCACACTTATTACATATCCCACATTATGTACTGCAAATAACACATGAAGGCATCATTGTTGGGAATAATGAATCTCTAATACAATATGGAATCAAACCACAAGAAATTGTTCAAGTGGAGGTGTTTTCCACACTTCCTGACCAATATCCAGTCAGAAGAATAGAGGGCTTGAGTGAGGGCTCCCAGATCATAACGGTCACCATTCAGACCAGCATCGATCGCTATGAGGAGGTAGCAGTTGAGATAATAAAATCTGACTTCCACAAGCCATTTCTTGGAGGATTTAGA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种IQUB原核蛋白，其特征在于，所述IQUB原核蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。2. 根据权利要求1所述的IQUB原核蛋白，其特征在于，所述IQUB原核蛋白的编码序列为IQUB开放阅读框全长序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2。3. 一种pET
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30a
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IQUB重组质粒，其特征在于，所述重组质粒包含如SEQ ID NO：2所示小鼠IQUB开放阅读框全长序列，载体为pET
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30a(+)空载质粒。4.权利要求3所述的pET
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30a
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IQUB重组质粒的构建方法，其特征在于，所述方法为：步骤S1：下载小鼠IQUB开放阅读框全长序列，设计携带酶切位点的用于扩增IQUB开放阅读框全长的PCR引物；步骤S2：以IQUB真核表达质粒为模板，PCR扩增IQUB开放阅读框全长序列，并对PCR产物进行纯化及回收；步骤S3：将IQUB原核蛋白编码序列全长插入pET
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30a(+)空载质粒，构建pET
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30a
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IQUB重组质粒。5. 根据权利要求4所述的pET
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30a
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IQUB重组质粒的构建方法，其特征在于，步骤S1中所述PCR引物为前向引物和反向引物，所述前向引物如SEQ ID NO：3：5
’‑ꢀ
GGGAATTCATGTCTGATCCCGAGGAAG
‑3’
所示，所示反向引物如SEQ ID NO：4：5
’‑
GGCTCGAGTATGAGGTTGAATCCTACGG
‑3’
所示。6.根据权利要求4所述的pET
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30a
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IQUB重组质粒的构建方法，其特征在于，所述步骤S3的具体步骤如下：步骤S3
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1：将回收...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑英，袁露，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：