一种治疗肝纤维化的siRNA药物及其应用制造技术

一种小干扰RNA及其在制备肝纤维化药物中的应用，所述小干扰RNA用于抑制靶基因的表达，所述靶基因为NADPH氧化酶(NOX)相关基因。本发明专利技术提供的小干扰RNA序列能够特异性敲降NOX1基因转录水平，降低NOX1基因表达。降低NOX1基因表达。降低NOX1基因表达。

【技术实现步骤摘要】
一种治疗肝纤维化的siRNA药物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种小干扰RNA药物及其在制备肝纤维化药物中的应用。

技术介绍

[0002]肝纤维化(Hepatic Fibrosis，HF)是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生，导致肝内弥漫性细胞外基质过度沉积的病理过程。肝纤维化是一种在损害因子持续作用下渐进的病理过程，是慢性肝病发展到肝硬化的必经病理阶段；同时肝纤维化也是肝癌形成的主要病因，超过80％的肝癌是由肝纤维化发展而来。
[0003]肝纤维化主要由两种慢性肝损伤引起:肝毒性损伤和胆汁淤积性损伤。肝毒性损伤是由肝细胞慢性损伤引起的，例如，乙型肝炎(HBV)感染、丙型肝炎(HCV)感染、酒精性肝炎(ALD)、代谢综合征诱发的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。我国是乙肝大国，是引发肝纤维化/肝硬化的首要因素。这一点与在西方国家以酒精性肝病和丙型肝炎为主发病因素不同。但是由于饮食结构的改变，非酒精性脂肪肝发病率在我国也逐年提升，目前已经达到20％左右，不排除在未来取代乙肝成为诱导肝纤维化或肝硬化的首要因素。
[0004]肝纤维化是肝组织抗损伤的修复过程，早期对肝组织的损伤修复有重要的防御作用。因此，在肝纤维化发生的早期阶段，以病因治疗(比如抗乙肝病毒治疗、抗丙肝病毒治疗、戒酒等)及抗炎保肝治疗为主。进展期需要抗肝纤维化治疗，抑制肝脏炎症、肝细胞保护(抑制肝星状细胞的增殖活化)和抑制脂质过氧化是抗肝纤维化的重要措施。
[0005]针对肝纤维化现有的治疗药物，目前都是中成药和化药，服用频率较高，需要每天服用。siRNA药物最低是按月来注射的，而现有技术中缺乏针对肝纤维化等疾病具有有效治疗作用的siRNA药物。

技术实现思路

[0006]在一实施例中，提供一种小干扰RNA，所述小干扰RNA用于抑制靶基因的表达，所述靶基因为NADPH氧化酶(NOX)相关基因。
[0007]依据上述实施例的一种小干扰RNA及其在制备肝纤维化药物中的应用，本专利技术提供的小干扰RNA序列能够特异性敲降NOX1基因转录水平，降低NOX1基因表达，从而可以用于制备治疗NOX1基因高表达引起的疾病的药物。
[0008]在一实施例中，动物实验证明，提供的小干扰RNA可以在四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠急性肝损伤和肝纤维化模型起到很好的治疗作用，提示其可以用于制备治疗肝纤维化的药物，即siRNA核酸药物。
附图说明
[0009]图1A为siRNA1和siRNA2对人肝星状细胞LX
‑
2中NOX1基因的沉默效率结果图；
[0010]图1B为siRNA1和siRNA2对小鼠胃癌细胞MCF中NOX1基因的沉默效率结果图；
[0011]图2A为siRNA1对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织NOX1基因表达的影响结果图；
[0012]图2B为siRNA1对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织α
‑
SMA基因表达的影响结果图；
[0013]图2C为siRNA1对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织Col1a1基因表达的影响结果图；
[0014]图2D为siRNA1对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织TGF
‑
β1基因表达的影响结果图；
[0015]图2E为siRNA1对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织CD68基因表达的影响结果图；
[0016]图2F为siRNA1对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织TIMP1基因表达的影响结果图；
[0017]图2G为siRNA1对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织CTGF基因表达的影响结果图；
[0018]图3A为siRNA1对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织HE切片的影响；
[0019]图3B为siRNA1对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织天狼星红切片的影响；
[0020]图4A为siRNA2对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织NOX1基因表达的影响结果图；
[0021]图4B为siRNA2对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织α
‑
SMA基因表达的影响结果图；
[0022]图4C为siRNA2对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织Col1a1基因表达的影响结果图；
[0023]图4D为siRNA2对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织TGF
‑
β1基因表达的影响结果图；
[0024]图4E为siRNA2对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织CD68基因表达的影响结果图；
[0025]图4F为siRNA2对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织IL
‑
1β基因表达的影响结果图；
[0026]图4G为siRNA2对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织TNFα基因表达的影响结果图；
[0027]图5为siRNA2对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织HE切片的影响；
[0028]图6为siRNA2对CCl4诱导的急性肝损伤模型小鼠的肝脏组织天狼星红切片的影响。
具体实施方式
[0029]下面通过具体实施方式结合附图对本专利技术作进一步详细说明。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本申请能被更好的理解。然而，本领域技术人员可以毫不费力的认识到，其中部分特征在不同情况下是可以省略的，或者可以由其他材料、方法所替代。
在某些情况下，本申请相关的一些操作并没有在说明书中显示或者描述，这是为了避免本申请的核心部分被过多的描述所淹没，而对于本领域技术人员而言，详细描述这些相关操作并不是必要的，他们根据说明书中的描述以及本领域的一般技术知识即可完整了解相关操作。
[0030]另外，说明书中所描述的特点、操作或者特征可以以任意适当的方式结合形成各种实施方式。同时，方法描述中的各步骤或者动作也可以按照本领域技术人员所能显而易见的方式进行顺序调换或调整。因此，说明书和附图中的各种顺序只是为了清楚描述某一个实施例，并不意味着是必须的顺序，除非另有说明其中某个顺序是必须遵循的。
[0031]本文中为部件所编序号本身，例如“第一”、“第二”等，仅用于区分所描述的对象，不具有任何顺序或技术含义。
[0032]本文中，小干扰RNA(Small interfering RNA；siRNA)有时称为短干扰RNA(short interfering RNA)或沉默RNA(silencing RNA)，是一种长度约为19到25个核苷酸的双链RNA，在生物学上有许多不同的用途。已知siRNA主要参与RNA干扰(RNAi)现象，以带有专一性的方式调节基因的表达。
[0033]本文中，NOX1基因编码NADPH氧化酶家族的一个亚型，该家族的酶负责催化氧的单电子转移，生成活性氧本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小干扰RNA，其特征在于，所述小干扰RNA包含第一链，所述第一链包含如SEQ ID NO:2或4所示核苷酸序列。2.如权利要求1所述的小干扰RNA，其特征在于，所述小干扰RNA的第一链中的至少部分核苷酸序列可与靶基因mRNA上的至少部分核苷酸序列反向互补配对；或，所述靶基因包括NADPH氧化酶相关基因；或，所述靶基因包括NOX1基因；或，所述小干扰RNA用于抑制肝纤维化相关基因的表达；或，所述肝纤维化相关基因包括α
‑
SMA、COL1A1、TGF
‑
β1、TIMP1、CTGF、CD68、IL
‑
1β、TNF
‑
α基因中的至少一种；或，所述小干扰RNA还包含第二链；或，所述小干扰RNA的第一链、第二链中的至少部分核苷酸序列反向互补配对；或，所述第二链包含如SEQ ID NO:1或3所示核苷酸序列。3.如权利要求1所述的小干扰RNA，其特征在于，所述小干扰RNA的第一链和/或第二链上分别自5
’
端起的前21个核苷酸中的任何一个具有化学修饰；或，所述化学修饰包括如下修饰中的至少一种：甲氧基修饰、氟代修饰、硫代磷酸修饰；或...

【专利技术属性】
技术研发人员：张培发，李晓慧，丁晓霞，姜孝明，
申请(专利权)人：深圳市乐土生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：