lncPostn作为预测心脏纤维化的生物标记物及其应用制造技术

本发明专利技术属于医学领域，具体的涉及一种lncPostn作为预测心脏纤维化的生物标记物及其应用。所述lncPostn基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明专利技术首次发现了lncPostn基因，发现其与人和小鼠同源，有望成为治疗心梗后心脏纤维化的新靶点。脏纤维化的新靶点。脏纤维化的新靶点。

【技术实现步骤摘要】
lncPostn作为预测心脏纤维化的生物标记物及其应用


[0001]本专利技术属于医学领域，具体的，涉及一种lncPostn作为预测心脏纤维化的生物标记物及其应用。

技术介绍

[0002]心力衰竭是导致死亡的主要原因，在诊断后的五年内死亡率超过50％，主要由不利的心室重塑、心脏纤维化和心室顺应性降低引起。心脏纤维化是一种由心肌损伤引起的创伤愈合反应，其特征是细胞外基质蛋白在心肌间质中蓄积。纤维化重塑可能破坏心肌细胞之间的机电协调并损害电传导系统，导致收缩和舒张功能障碍以及心脏性猝死。心脏纤维化的严重程度与心力衰竭患者的长期死亡率密切相关。临床上，尽管新四联治疗可以显著降低心力衰竭患者的全因死亡率，但由于心脏纤维化类型的多变性及其复杂的病理机制，目前仍缺乏有效的治疗方法减少甚至逆转心肌纤维化。因此，迫切需要开发直接针对心脏成纤维细胞火花和纤维化重塑的有效疗法。
[0003]长链非编码RNA(Long non
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coding RNAs，lncRNAs)是一类异质的长转录本(超过200个核苷酸)。研究表明，lncRNA在调节动脉粥样硬化、斑块炎症、细胞肥大和增殖方面起着关键作用。部分lncRNA已被确定为心脏成纤维细胞增殖和调控纤维化基因表达的关键调节因子。超级增强子相关的lncRNA
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Wisper控制纤维化Loxl2的表达，有助于胶原交联和细胞基质的稳定。在心肌成纤维细胞中富集的lncRNA
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Meg3通过调节MMP
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2促进心肌纤维化。SAFB与lncRNA
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SAIL相互作用，调控SAFB介导的纤维化相关基因转录。然而，目前对心脏纤维化潜在的分子机制及lncRNAs在心肌纤维化中的作用的相关研究仍然非常有限。

技术实现思路

[0004]在本专利技术中，专利技术人将小鼠心梗后近端区心肌组织和对照进行非编码RNA芯片筛选，发现其中的lncRNA
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NONMMUT043086从小鼠心梗后1天开始上调，在梗死后21天升高最明显，且相对于近端区和远端区，在心肌梗死区升高显著。同时，专利技术人在TGF
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β诱导的细胞纤维化模型中验证，lncRNA
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NONMMUT043086也明显升高。相对于心肌细胞，lncRNA特异性作用于心脏成纤维细胞(图1)。通过UCSC序列比对，专利技术人发现lncRNA
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NONMMUT043086定位于17号外显子，临近编码基因Periostin(Postn)，因此专利技术人将其命名为lncPostn，并进一步探索lncPostn在心脏纤维化中的作用。
[0005]具体的，本专利技术的技术方案如下：
[0006]本专利技术第一个方面公开了一种lncPostn基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0007]本专利技术第二个方面公开了一种预测心脏纤维化的生物标志物，所述生物标志物包括上述的lncPostn基因。
[0008]优选的，所述生物标志物为急性心肌梗死患者心室重构心脏纤维化的生物标志物。
[0009]本专利技术第四个方面公开了上述的lncPostn基因在作为临床改善心脏纤维新靶点
中的应用。
[0010]本专利技术第五个方面公开了一种非诊断和治疗目的用于验证lncPostn基因在作为临床改善心脏纤维新靶点中的应用的体外模型的构建方法，包括：
[0011]S1：构建敲减了lncPostn基因的载体，在TGF
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β诱导的鼠心脏成纤维化模型中检测lncPostn的功能；
[0012]S2：构建过表达了lncPostn基因的载体，在TGF
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β诱导的鼠心脏成纤维化模型中检测lncPostn的功能。
[0013]优选的，检测lncPostn的功能包括免疫荧光或流式细胞检测指标，所述指标为α
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SMA/EdU双阳性细胞比例。
[0014]优选的，检测lncPostn的功能包括荧光定量PCR指标，所述指标包括α
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SMA、Col1a1、Col3a1、CTGF表达量。
[0015]本专利技术第六个方面公开了一种非诊断和治疗目的用于验证lncPostn基因在作为临床改善心脏纤维新靶点中的应用的体内模型的构建方法，包括：
[0016]对鼠进行冠状动脉左前降支结扎手术，构建心梗模型，在鼠尾静脉注射敲减了lncPostn基因的载体。
[0017]本专利技术第七个方面公开了上述的lncPostn基因、上述的生物标志物、上述的应用或上述的方法在医学领域中的应用。
[0018]优选的，所述应用为在心脏纤维化领域中的应用。
[0019]在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，而不超出本专利技术的构思与保护范围。
[0020]本专利技术相对于现有技术具有如下的显著优点及效果：
[0021]本专利技术首次发现了lncPostn基因，发现其与人和小鼠同源，有望成为治疗心梗后心脏纤维化的新靶点。
附图说明
[0022]图1为筛选心脏纤维化模型中的差异表达的lncRNA示意图。A
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C：芯片筛选心梗后重构模型中变化的lncRNA(n＝5)。D：选取变化>5倍的lncRNA进行荧光定量PCR验证(n＝5)(图中柱形图中的每组从左到右依次为Sham组和MI组)。E：在细胞模型中进行荧光定量PCR验证变化的lncRNAs(n＝5)(图中柱形图中的每组从左到右依次为CTL组和TGF
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β1组)。F：荧光定量PCR检测到lnc043086(lncPostn)在成纤维细胞中表达更高(n＝5)(图中柱形图中的每组从左到右依次为NMCF组和NMCM组)。G：与对照组相比，lncPostn心梗后1天开始表达升高，21天升高最明显(n＝4)(图中柱形图中的每组从左到右依次为Sham组和MI组)。
[0023]图2为敲减lncPostn改善TGF
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b诱导的细胞纤维化的示意图。A：荧光定量PCR验证验证lncPostn小干扰RNA的效率(n＝5)。B：荧光定量PCR检测敲减lncPostn抑制成纤维细胞的转化(n＝5)(图中柱形图中的每组从左到右依次为CTL组和TGF
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β1组)。C
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E：免疫荧光检测敲减lncPostn抑制成纤维细胞的增殖(n＝4)(图中柱形图中的每组从左到右依次为CTL组和TGF
‑
β1组)。F
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H：流式检测敲减lncPostn抑制成纤维细胞的增殖(n＝4)(图中柱形图中的每组从左到右依次为CTL组和TGF
‑
β1组)。
[0024]图3为过表达lncPostn促进细胞纤维化的示意图。A：荧光定量PCR验证验证
lncPostn过表现腺病毒的效率(n＝5)。B：荧光定量PCR检测过表达lncPostn促进成纤维本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. lncPostn基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.一种预测心脏纤维化的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括权利要求1所述的lncPostn基因。3.根据权利要求2所述的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为急性心肌梗死患者心室重构心脏纤维化的生物标志物。4.根据权利要求1所述的lncPostn基因在作为临床改善心脏纤维新靶点中的应用。5.一种非诊断和治疗目的用于验证lncPostn基因在作为临床改善心脏纤维新靶点中的应用的体外模型的构建方法，其特征在于，包括：S1：构建敲减了lncPostn基因的载体，在TGF
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β诱导的鼠心脏成纤维化模型中检测lncPostn的功能；S2：构建过表达了lncPostn基因的载体，在TGF
‑
β诱导的鼠心脏成纤维化模型中检测lncPostn的功能。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶丽婵，
申请(专利权)人：常州市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：