用于单细胞测序的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法技术

本发明专利技术公开了一种用于单细胞测序的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，涉及OCT包埋冰冻组织的细胞核提取技术领域，本方法先切掉经过OCT包埋剂包埋的冰冻组织表面的OCT包埋剂，切片，剥离切片周围多余的OCT包埋剂；然后在所述切片中加入裂解液，进行研磨、裂解；再加入洗涤液混匀，过细胞筛，离心弃上清；再加入洗涤液重悬、沉淀；最后吸取上层液体过枪头筛若干次，加入核悬液后离心弃上清，再加入核悬液重悬，完成细胞核提取。采用本方法提取的OCT包埋剂包埋的动物组织细胞核悬液，最终提取的含细胞核液体中细胞核总量明显增加，杂质明显减少，细胞核的形态完整度非常高，能够满足单细胞测序的要求。序的要求。序的要求。

【技术实现步骤摘要】
用于单细胞测序的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法


[0001]本专利技术涉及冰冻组织的细胞核提取
，特别涉及用于单细胞测序的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法。

技术介绍

[0002]OCT包埋技术，是将动物组织样本用OCT包埋剂(optimal cutting temperature compound，聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物)进行浸泡包埋，随后进行组织冰冻、切片的技术。利用OCT包埋技术，在冰冻切片时可以支撑组织，以增加组织的连续性，减少皱折及碎裂。又因OCT混合物为水溶性，故在漂片时可溶于水，所以在以后的染色中不会增加背景染色，使切片质量得到改善。
[0003]随着空间转录组技术的发展，越来越多的科研工作者利用OCT包埋新鲜组织样本来进行空间转录组测序。然而，OCT包埋样本因其动物组织经过冰冻后会导致组织解离得到的细胞悬液细胞活力太低，从而不宜用于单细胞测序。现有技术中，文献《从OCT包埋冰冻组织中的DNA提取》(董明等，中国医科大学学报，1994年第23卷第5期)提供了一种从OCT包埋冰冻组织中提取DNA的方法，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于单细胞测序的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、切掉经过OCT包埋剂包埋的冰冻组织表面的OCT包埋剂，切片，剥离切片周围多余的OCT包埋剂；S2、在所述切片中加入裂解液，进行研磨、裂解；S3、加入洗涤液混匀，过细胞筛，离心弃上清；再加入洗涤液重悬、沉淀；S4、吸取上层液体过枪头筛若干次，加入核悬液后离心弃上清，再加入核悬液重悬，完成细胞核提取。2.根据权利要求1所述的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，其特征在于，步骤S1的具体方法为：将OCT包埋剂包埋冰冻组织固定在切片机上，切掉组织表面的OCT包埋剂，直至暴露出组织的最大切面后，收集若干片切片，剥离切片周围的多余OCT包埋剂。3.根据权利要求1所述的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，其特征在于，步骤S2中，所述裂解液的原料和终浓度分别为：基础缓冲液1mL、NP400.2wt％、BSA 0.01wt％、RNase inhibitor 1U/μL和无核酸无酶水。4.根据权利要求3所述的OCT包埋冰冻组织的细胞核提取方法，其特征在于，所述基础缓冲液的原料和终浓度分别为：NaCl 292mM、Tris
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HCl 20...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝升，南春旭，李霞，丁悦，杨中正，许秀勤，王邹，
申请(专利权)人：武汉生物样本库有限公司，
类型：发明
国别省市：