猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物制造技术

本发明专利技术公开了一种猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物，其可利用真核表现系统表现出E2重组蛋白后，结合CpG佐剂及双相佐剂所得的猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物，仅须单剂接种即可提供有效免疫保护力，毋需补强免疫。毋需补强免疫。毋需补强免疫。

【技术实现步骤摘要】
猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物


[0001]本专利技术涉及一种动物病毒的重组蛋白及其应用，特别涉及一种单剂接种的猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物。

技术介绍

[0002]典型猪瘟(Classical swine fever；CSF)又称古典猪瘟，是一种感染猪只的高传染性疾病。一般而言，猪只高烧、厌食、腹泻、神经症状、全身红斑、大量死亡、母猪流产或产下死猪崽，即须考虑猪瘟的可能性。
[0003]CSFV于1903年首次被发现后，一直在亚洲、非洲、欧洲、中南美洲地区流行着，一旦爆发疫情常造成养猪产业重大的经济损失，影响全球经济，因此列为世界动物卫生组织(OIE)表A(List A)的疾病之一，属必须通报的动物传染病。据文献指出1948年在东亚的猪瘟发生率曾达81.3％。此病毒流行的国家必须使用常规疫苗接种来预防和控制病源传播，2017年181个OIE会员国中，已有32个国家被认为没有猪瘟病毒的散播。如果疫苗使用得当，即能限制猪瘟传播、预防疾病爆发并在未感染猪群中建立完整的保护性免疫，避免严重猪只死亡及经济损失。
[0004]典型猪瘟的病原为典型猪瘟病毒(Classcal Swine fever virus；CSFV)，属于黄病毒科(Flavivirdae)瘟疫病毒属(Pestivirus)。CSFV基因组为单股正股RNA，全长约12300个碱基，可转译成3898个氨基酸并形成多聚蛋白(polyprotein) 后，再由病毒和细胞蛋白酶加工成四种结构蛋白(C、Erns、E1和E2)和八种非结构病毒蛋白(Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)。 CSFV套膜上的结构蛋白E1蛋白和E2蛋白都属于糖蛋白，是入侵宿主细胞的重要角色。因此，在开发CSFV次单位疫苗时，经常选择E2蛋白作为抗原的重要决定位。
[0005]目前疫苗为控制所有疾病的最佳策略。防治猪瘟的疫苗主要分为两种：活毒(减毒)疫苗及次单位(死毒)疫苗。活毒疫苗广泛用于猪瘟流行地区，以现阶段猪瘟疫苗的开发而言，猪瘟组织疫苗已逐步取代传统的兔化猪瘟疫苗。过去研究发现猪瘟病毒的核酸序列只有E2基因与中和抗体的产生密切相关，因此以生物技术生产特异猪瘟E2蛋白质成为重要开发议题。
[0006]E2次单位疫苗除了产生具有保护作用的猪瘟中和抗体，更可以满足DIVA (differentiate infected from vaccinated animal，能区分出受野外病毒感染与疫苗接种的动物)对疫苗接种的要求。以目前市售E2次单位疫苗(例如拜耳E2次单位疫苗)为例，其包含杆状病毒感染昆虫细胞生产的E2重组蛋白以及油包水型佐剂。在免疫动物时，市售E2次单位疫苗每次使用剂量为2mL(含60μg的 E2重组蛋白)，间隔3周后再补强免疫。
[0007]市售E2次单位疫苗除了有效增加猪只抗体之外，也克服习知活毒疫苗无法满足DIVA的缺点，进而用于区别诊断试剂中，藉此鉴别野外病毒的感染，加速猪场内潜在猪瘟病毒的清除，有助于对猪瘟清除的推行。
[0008]然而2005年的文献指出，东亚部份地区近二十年间流行的猪瘟病毒只基因亚群从3.4亚群转变成2.1a亚群，亟需提升猪瘟疫苗的免疫保护力。

技术实现思路

[0009]因此，本专利技术的一态样是提供一种猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物，其包含E2重组蛋白、CpG佐剂以及双相佐剂，所得的疫苗组成物仅须单剂接种，不需补强免疫即具有完整免疫保护力。
[0010]根据本专利技术的上述态样，提出一种猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物。此猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物包含E2重组蛋白、CpG佐剂以及双相佐剂，其中E2重组蛋白的一氨基酸序列为如序列识别号(SEQ ID NO):1所示。
[0011]在上述实施例中，前述E2重组蛋白可例如为源自于猪瘟病毒株2.1a亚群。
[0012]在上述实施例中，前述E2重组蛋白可例如为由真核表现系统所表现。
[0013]在上述实施例中，前述E2重组蛋白可例如为由如SEQ ID NO:2所示的核酸序列所编码。
[0014]在上述实施例中，前述猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物对受试对象的有效施用次数可例如为一次。
[0015]在上述实施例中，前述E2重组蛋白的有效剂量可例如为25μg/mL至 50μg/mL。
[0016]在上述实施例中，前述CpG佐剂的核酸序列可例如为如SEQ ID NO:3所示。
[0017]在上述实施例中，前述CpG佐剂与E2重组蛋白的重量比可例如为1:1至 1：2。
[0018]在上述实施例中，前述双相佐剂可例如为水包油包水(W/O/W)佐剂。
[0019]在上述实施例中，前述双相佐剂的有效剂量可例如为50体积％。
[0020]应用本专利技术的猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物，其可利用真核表现系统表现出E2重组蛋白后，结合CpG佐剂及双相佐剂所得的猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物，仅须单剂接种即可提供有效免疫保护力，毋需补强免疫。
[0021]可以理解的是，前述的概括说明及下述的详细说明仅为例示，旨在对要求保护的专利技术提供进一步的解释。
附图说明
[0022]为让本专利技术的上述和其他目的、特征、优点与实施例能更明显易懂，所附图式的详细说明如下：
[0023]图1A显示根据本专利技术一实施例的猪瘟病毒E2重组蛋白的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS
‑
PAGE)的胶体影像。
[0024]图1B显示图1A的西方墨点法的影像结果。
[0025]图2显示根据本专利技术数个实施例的猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物对受试猪只于单剂接种前后的血清抗体检测结果。
[0026]图3A至图3R显示本专利技术数个实施例的疫苗组A(图3A至图3F)、疫苗组 B(图3G至图3L)及对照组C(阳性对照组)(图3M至图3R)的受试动物的整体(图 3A、图3G、图3M)、脾脏(图3B、图3H、图3N)、肾脏(图3C、图3I、图3O)、胃(图3D、图3J、图3P)、回盲瓣(图3E、图3K、图3Q)、淋巴组织及扁桃腺(图 3F、图3L、图3R)的外观影像。
[0027]图4A至图4U显示本专利技术数个实施例的疫苗组A(图4A至图4G)、疫苗组B(图4H至图4N)及对照组C(阳性对照组)(图4O至图4U)的受试动物的大脑(图4A、图4H、图4O)、小脑(图
4B、图4I、图4P)、心脏(图4C、图4J、图4Q)、肝脏(图4D、图4K、图4R)、脾脏(图4E、图4L、图4S)、肺脏(图4F、图4M、图4T)及肾脏(图4G、图4N、图4U)的组织切片染色影像。
[0028]图5A至图5R显示本专利技术数个实施例的疫苗组A(图5A至图5F)、疫苗组B(图5G至图5L)及对照组C(阳性对照组)(图5M至图5R)的受试动物的胃(图 5A、图5G、图5M)、大肠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物，其特征在于，包括：E2重组蛋白，其中该E2重组蛋白的一氨基酸序列为如序列识别号(SEQ ID NO):1所示；CpG佐剂；以及双相佐剂。2.根据权利要求1所述的猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物，其特征在于，其中该E2重组蛋白是源自于猪瘟病毒2.1a亚群。3.根据权利要求1所述的猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物，其特征在于，其中该E2重组蛋白为由真核表现系统所表现。4.根据权利要求1所述的猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物，其特征在于，其中该E2重组蛋白是由如SEQ ID NO:2所示的一核酸序列所编码。5.根据权利要求1所述的猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物，其特征在于，其中该猪瘟病毒E2次单位疫苗组成物对一受试对...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄秀琪，黄彦理，鍾文彬，吴美莉，柯冠铭，陈计志，
申请(专利权)人：台湾屏东科技大学，
类型：发明
国别省市：