基于合成的被修饰的痘苗安卡拉（SMVA）的冠状病毒疫苗制造技术

公开了用于预防或治疗冠状病毒感染的基于合成的被修饰的痘苗安卡拉(MVA)的疫苗和生产该疫苗的方法。具体而言，本公开提供了一种疫苗组合物，其包括：(i)包含MVA的整个基因组的单个合成DNA片段或两个或更多个合成DNA片段，和(ii)编码一个或多个冠状病毒抗原，亚单位，或其片段的一个或多个DNA序列，插入到所述MVA的一个或多个插入位点中以预防或治疗冠状病毒感染。病毒感染。病毒感染。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于合成的被修饰的痘苗安卡拉(SMVA)的冠状病毒疫苗
[0001]优先权声明
[0002]本申请要求于2020年5月17日提交的美国临时专利申请号63/026,127，于2020年6月25日提交的美国临时专利申请号63/044,033，于2020年11月13日提交的美国临时专利申请号63/113,810，和于2021年3月15日提交的美国临时专利申请号63/161,371的优先权，其内容通过引用整体并入本文。

技术介绍

[0003]被修饰的痘苗安卡拉(MVA)是一种高度减毒的正痘病毒，自其亲本株绒毛膜尿囊痘苗安卡拉(CVA)在鸡胚成纤维细胞(CEF)上通过570次传代衍生而来。由于减毒过程，MVA获得了六个主要的基因组缺失(Del1
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6)以及多个较短的缺失，插入，和点突变，导致基因片段化，截断，短内部缺失，和氨基酸替换。MVA严重限制了宿主细胞的嗜性(tropism)，仅允许在禽类细胞中进行生产性组装，例如，CEF和幼仓鼠肾(BHK)细胞，而在人和大多数其他哺乳动物细胞中，MVA组装由于病毒组装的后期阻滞而失败。虽然为非病原和高度减本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于预防或治疗受试者冠状病毒感染的疫苗组合物，包括：(i)包含MVA的整个基因组的单个合成DNA片段，或各自包含所述MVA的基因组的部分序列的两个或更多个合成DNA片段，使得所述两个或更多个DNA片段在共转染后转移到宿主细胞中时顺序组装并包含所述MVA基因组的全长序列，和(ii)编码一个或多个冠状病毒抗原，亚单位，或其片段的一个或多个DNA序列，插入到所述MVA的一个或多个插入位点中，其中所述抗原在所述一个或多个MVA DNA片段转染后于所述宿主细胞中表达。2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述抗原，亚单位，或其片段的DNA序列经密码子优化以在所述宿主细胞或痘苗病毒中表达。3.根据权利要求1或权利要求2所述的疫苗组合物，其中，所述一个或多个DNA片段进一步包含编码所述冠状病毒抗原，亚单位，或其片段的DNA序列上游的病毒启动子，编码所述冠状病毒抗原，亚单位，或其片段的DNA序列下游的转录终止信号，或两者。4.根据权利要求3所述的疫苗组合物，其中，所述启动子包含mH5启动子，p7.5启动子，或任何其他合适的天然或合成的痘苗或痘病毒启动子。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的疫苗组合物，其中，编码所述抗原，亚单位，或其片段的所述DNA序列被插入到一个或多个MVA插入位点中，如基因间区域，非必需基因和区域，和缺失位点。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的疫苗组合物，其中，所述一个或多个冠状病毒抗原包括刺突(S)蛋白，核衣壳(N)蛋白，膜(M)蛋白，和包膜(E)蛋白，木瓜样蛋白酶，ORF1A，3CL蛋白酶，ORF1B，内切核糖核酸酶，基质，解旋酶，蛋白质1a，蛋白质1b，或其免疫原性片段。7.根据权利要求6所述的疫苗组合物，其中，所述一个或多个冠状病毒抗原包含SARS
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CoV
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2刺突(S)蛋白，SARS
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CoV
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2核衣壳(N)蛋白，或两者。8.根据权利要求6或7所述的疫苗组合物，其中，所述S蛋白或所述N蛋白是完全成熟的或完全糖基化的。9.根据权利要求6
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8中任一项所述的疫苗组合物，其中，所述被表达的S蛋白被修饰以包含选自F817P，A892P，A899P，A942P，K986P，V987P，和RRAR682
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685GSAS的一个或多个突变。10.根据权利要求7
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9中任一项所述的疫苗组合物，其中，所述S蛋白包含在N
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末端处的信号肽，或在C
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末端处的跨膜结构域或细胞质结构域。11.根据权利要求7
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10中任一项所述的疫苗组合物，其中，所述S蛋白的C
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末端处的19个氨基酸残基缺失。12.根据权利要求7
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11中任一项所述的疫苗组合物，其中，编码所述S蛋白或所述N蛋白的序列通过沉默密码子改变进行密码子优化以避免连续顺序的4个或更多个相同核苷酸。13.根据权利要求7
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12中任一项所述的疫苗组合物，其中，所述S蛋白包含选自由以下组成的组的一个或多个突变：S13I，L18F，T19R，T20N，R21T，P26S，69和70位处组氨酸和缬氨酸缺失，K77T，D80A，T95I，D138Y，G142D，144位处酪氨酸缺失，W152C，E154K，氨基酸156和157位处谷氨酸和苯丙氨酸缺失，R158G，R190S，D215G，Q218H，242
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244位处亮氨酸，丙氨酸，和亮氨酸缺失，R246I，K417N，K417T，N439K，L452R，Y453F，S477N，T478K，E484K，E484Q，S494P，N501Y，S520S，A570D，D614G，H655Y，P681H，P681R，RRAR682
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685GSAS，A701V，T716I，
D950N，S982A，K986P，V987P，T1027I，Q1071H，H1101D，D1118H，和V1176F。14.根据权利要求1
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13中任一项所述的疫苗组合物，其中，所述一个或多个抗原包含该S蛋白的S1结构域，S2结构域，或受体结合结构域(RBD)。15.根据权利要求14所述的疫苗组合物，其中，所述S1结构域，所述S2结构域，或所述RBD包含在N
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末端处的信号肽，或在C
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末端处的跨膜结构域或细胞质结构域。16.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐，
申请(专利权)人：希望之城，
类型：发明
国别省市：