猪圆环病毒抗原组合物及其制备方法、应用和疫苗技术

本发明专利技术提供了一种猪圆环病毒抗原组合物及其制备方法、应用和疫苗，涉及生物技术领域。本发明专利技术提供的猪圆环病毒抗原，包括猪圆环病毒2a型抗原、猪圆环病毒2b型抗原、猪圆环病毒2d型抗原。该抗原的表达量高、免疫原性好，能够有效诱导机体产生相应抗体，适于制备用于预防猪圆环病毒2a亚型、2b亚型和2d亚型的产品。本发明专利技术提供的上述抗原的制备方法，以293T细胞作为表达体系，降低了杂蛋白的产量，提高了目的蛋白的表达量，该制备方法稳定、高效且质量可控。本发明专利技术提供的猪圆环病毒三价疫苗，安全性好，能够有效的激发机体的免疫反应，同时实现对猪圆环病毒三种亚型的预防，扩大了疫病防控范围，节省了劳力，提高了工作效率。提高了工作效率。提高了工作效率。

【技术实现步骤摘要】
猪圆环病毒抗原组合物及其制备方法、应用和疫苗


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种猪圆环病毒抗原组合物及其制备方法、应用和疫苗。

技术介绍

[0002]猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)属圆环病毒科圆环病毒属，为致病性病毒，在世界范围内流行，PCV2对猪具有较强的易感性。PCV2是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪呼吸道疾病综合征(PRDC)、猪免疫缺陷综合征(PIDS)、猪皮炎与肾病综合征(PNDS)等多种疾病的主要病原，感染猪可自鼻液、粪便等废物中排出病毒，经口腔、呼吸道途径感染不同年龄的猪，引起广泛分布于全身器官、组织的病理损伤。造成猪只生长发育迟缓/受阻、精神沉郁、贫血、呼吸困难/咳嗽、淋巴结肿大、皮肤苍白/病变等。PCV2严重侵害猪的免疫系统，导致患猪形成免疫抑制而造成免疫缺陷，使机体更易感染PRRSV、PRV、PPV、MHP、PEDV、SIV、多杀性巴氏杆菌等其他病原，使患猪呈二重感染或三重混合感染，病猪的病死率也大大提高，造成十分严重的危害。
[0003]基于PCV2基因序列的不同，又将PCV2分为PCV2a、PCV2b、PCV2c、PCV2d，PCV2e五个基因亚型。经过流行病学调查发现，我国主要以PCV2a、PCV2b、PCV2d，3个亚型占优势，已经成为我国的主要流行株。为有效控制该病而减少经济损失，所以研制针对PCV2主要流行株的三价疫苗，对该病的防治具有重要意义。
[0004]有鉴于此，特提出本专利技术。/>
技术实现思路

[0005]本专利技术的第一目的在于提供猪圆环病毒抗原组合物，该抗原免疫原性高。
[0006]本专利技术的第二目的在于提供上述猪圆环病毒抗原组合物的制备方法。
[0007]本专利技术的第三目的在于提供上述猪圆环病毒抗原组合物在制备预防猪圆环病毒的产品中的应用。
[0008]本专利技术的第四目的在于提供一种猪圆环病毒三价疫苗，以解决上述问题中的至少一种。
[0009]第一方面，本专利技术提供了猪圆环病毒抗原组合物，包括猪圆环病毒2a型抗原、猪圆环病毒2b型抗原和猪圆环病毒2d型抗原；
[0010]所述猪圆环病毒2a型抗原由PCV2a
‑
xht基因片段表达，所述PCV2a
‑
xht基因片段的核酸序列如SEQ ID NO.1所示；
[0011]所述猪圆环病毒2b型抗原由PCV2b基因片段表达，所述PCV2b基因片段的核酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0012]所述猪圆环病毒2d型抗原由PCV2d基因片段表达，所述PCV2d基因片段的核酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0013]作为进一步技术方案，所述猪圆环病毒抗原组合物中猪圆环病毒2a型抗原、猪圆
环病毒2b型抗原和猪圆环病毒2d型抗原的质量比为1～3:1～3:1～3；
[0014]优选地，所述猪圆环病毒抗原组合物中猪圆环病毒2a型抗原、猪圆环病毒2b型抗原和猪圆环病毒2d型抗原的质量比为1:1:1。
[0015]第二方面，本专利技术提供了一种猪圆环病毒抗原组合物的制备方法，包括在293T细胞中表达编码所述猪圆环病毒抗原组合物的基因，获得猪圆环病毒抗原组合物。
[0016]作为进一步技术方案，将表达载体转入293T细胞中实现编码所述猪圆环病毒抗原组合物的基因的表达；
[0017]优选地，所述表达载体为：包含表达所述猪圆环病毒2a型抗原的基因的表达载体、包含表达所述猪圆环病毒2b型抗原的基因的表达载体和包含表达所述猪圆环病毒2d型抗原的基因的表达载体；
[0018]优选地，所述表达载体包括pCDNA3.1。
[0019]作为进一步技术方案，所述293T细胞拥有单加压系统。
[0020]作为进一步技术方案，将表达所述猪圆环病毒抗原组合物的293T细胞扩大培养。
[0021]作为进一步技术方案，所述扩大培养的步骤为：将293T细胞接种后在36～37℃下悬浮培养4～6天，然后在31～33℃下悬浮培养。
[0022]作为进一步技术方案，所述细胞接种的密度为5
×
105～5
×
106个/ml，优选为1
×
106个/ml；
[0023]优选地，悬浮培养的过程中，维持培养基中葡萄糖浓度为2.5～4g/L；
[0024]优选地，培养基的pH为7.2～7.6；
[0025]优选地，当细胞活率低于75％时，收获抗原。
[0026]第三方面，本专利技术提供了上述猪圆环病毒抗原组合物在制备预防猪圆环病毒的产品中的应用。
[0027]第四方面，本专利技术提供了一种猪圆环病毒三价疫苗，包括上述猪圆环病毒抗原组合物。
[0028]作为进一步技术方案，所述猪圆环病毒三价疫苗中还包括佐剂；
[0029]优选地，所述猪圆环病毒抗原组合物与佐剂的质量比为1～3:1～3；
[0030]优选地，所述佐剂优选水性佐剂。
[0031]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0032]本专利技术提供的猪圆环病毒抗原组合物的表达量高、免疫原性好，能够有效诱导机体产生相应抗体，适于制备用于预防猪圆环病毒2a亚型、2b亚型和2d亚型的产品。
[0033]本专利技术提供的猪圆环病毒抗原组合物的制备方法，以293T细胞作为表达体系，降低了杂蛋白的产量，提高了目的蛋白的表达量，该制备方法稳定、高效且质量可控。
[0034]本专利技术提供的猪圆环病毒三价疫苗，主要以上述猪圆环病毒抗原组合物为活性物质，其安全性好，能够有效的激发机体的免疫反应，同时实现对猪圆环病毒三种亚型的预防，扩大了疫病防控范围，节省了劳力，提高了工作效率。
附图说明
[0035]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的
附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0036]图1为pCDNA3.1
‑
PCV2a
‑
xht/PCV2b/PCV2d构建示意图；
[0037]图2为pCDNA3.1
‑
PCV2a/PCV2b/PCV2d双酶切鉴定结果；
[0038]图3为7个片段的Western
‑
blot结果；
[0039]图4为3个片段的Western
‑
blot结果；
[0040]图5为2个片段的Western
‑
blot结果。
具体实施方式
[0041]下面将结合实施方式和实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.猪圆环病毒抗原组合物，其特征在于，包括猪圆环病毒2a型抗原、猪圆环病毒2b型抗原和猪圆环病毒2d型抗原；所述猪圆环病毒2a型抗原由PCV2a
‑
xht基因片段表达，所述PCV2a
‑
xht基因片段的核酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述猪圆环病毒2b型抗原由PCV2b基因片段表达，所述PCV2b基因片段的核酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述猪圆环病毒2d型抗原由PCV2d基因片段表达，所述PCV2d基因片段的核酸序列如SEQ ID NO.3所示。2.根据权利要求1所述的猪圆环病毒抗原组合物，其特征在于，所述猪圆环病毒抗原组合物中猪圆环病毒2a型抗原、猪圆环病毒2b型抗原和猪圆环病毒2d型抗原的质量比为1～3:1～3:1～3；优选地，所述猪圆环病毒抗原组合物中猪圆环病毒2a型抗原、猪圆环病毒2b型抗原和猪圆环病毒2d型抗原的质量比为1:1:1。3.权利要求1或2所述猪圆环病毒抗原组合物的制备方法，其特征在于，包括在293T细胞中表达编码所述猪圆环病毒抗原组合物的基因，获得猪圆环病毒抗原组合物。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，将表达载体转入293T细胞中实现编码所述猪圆环病毒抗原组合物的基因的表达；优选地，所述表达载体为：包含表达所述猪圆环病毒2a型抗原的基因的...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺笋，潘晓梅，程兰玲，候凤，毛丽萍，唐慧芬，周涛，郭妍婷，王遵宝，李俊辉，李佳，
申请(专利权)人：天康制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：