突变鸭坦布苏病毒株及其构建方法、应用技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，具体公开了一种突变鸭坦布苏病毒株及其构建方法、应用。本发明专利技术通过特定的引物组合，构建了定点突变E基因的突变质粒EDII+III E89G V312A，进而构建了突变鸭坦布苏病毒株rDTMUV EDII+III E89G V312A。该毒株可为后续抗鸭坦布苏病毒的药物、疫苗的制备提供了良好的平台。疫苗的制备提供了良好的平台。疫苗的制备提供了良好的平台。

【技术实现步骤摘要】
突变鸭坦布苏病毒株及其构建方法、应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，尤其涉及一种突变鸭坦布苏病毒株及其构建方法、应用。

技术介绍

[0002]2010年4月，中国东南沿海省份爆发了一场未知的鸭蛋下降病，其特征是产蛋量大幅下降，感染蛋鸭和种鸭出现神经系统症状。剖检时可见卵巢充血、出血、卵泡闭锁、破裂。该病的发病率高达90％。最后确定鸭Tembusu病毒(DTMUV)为病原。目前已有的商业疫苗存在保护效力低，保护效价并不十分理想以至于需要重复接种，因此给养鸭行业造成较重的经济负担。
[0003]DTMUV属于黄病毒属，黄病毒科。其基因组只有一个长的独立开放阅读框，编码3个结构蛋白：核衣壳(C)、膜(M)和包膜(E)；以及7个非结构蛋白：NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4BNS5。例如，E蛋白第367位由极性氨基酸T突变为带正电荷极性氨基酸K是DTMUV细胞适应和毒力减弱的主要决定因素。因此，构建鸭坦布苏病毒突变株具有重要的意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题在于，提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于定点突变鸭坦布苏病毒中E基因的引物组合，其特征在于，包括引物一和引物二，所述引物一为核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的DNA分子，所述引物二为核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的DNA分子。2.如权利要求1所述的用于定点突变鸭坦布苏病毒中E基因的引物组合，其特征在于，还包括引物三和引物四，所述引物三为核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的DNA分子，所述引物四为核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示的DNA分子。3.一种突变鸭坦布苏病毒株的构建方法，其特征在于，包括：(1)采用如权利要求1和/或2所述的引物组合构建突变质粒EDII+III E89GV312A；(2)采用所述突变质粒EDII+III E89G V312A与pF2质粒、pF3质粒、pF4质粒连接，得到突变毒株cDNA；(3)将所述突变毒株cDNA体外转录后转染细胞，拯救后得到突变鸭坦布苏病毒株。4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)包括：(1.1)采用如权利要求1和/或如权利要求2所述的引物组合对pF1质粒进行PCR扩增；(1.2)将PCR扩增产物同源重组并转化进入DH5α感受态细菌；(1.3)将DH5α感受态细菌进行单克隆细菌扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：向程威，杨泽坤，王婷，杨洁，陈瑞爱，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：