自复制信使核糖核酸疫苗制造技术

本发明专利技术提供信使核糖核酸(mRNA)分子，其包含：表达盒1，其含有RNA复制酶的编码序列、和表达盒2，其含有抗原的编码序列。本发明专利技术还提供mRNA疫苗，其通过将本发明专利技术的mRNA分子包封为脂质纳米颗粒(LNP)得到。本发明专利技术还提供DNA分子，其被转录成本发明专利技术的mRNA分子。本发明专利技术还提供本发明专利技术的mRNA分子在制造引发抗HER2免疫应答的mRNA疫苗中的用途。本发明专利技术还提供mRNA分子的制造方法，其包括：(1)基于病毒的基因组的DNA序列，将其中结构性多蛋白的编码序列中的结构性多蛋白的启动子之后的部分替换为抗原的编码序列；(2)向5'UTR的5'侧附加RNA聚合酶的启动子位点；(3)向3'UTR的3'侧附加多聚A；及(4)将通过步骤(1)～(3)构建的DNA分子转录为mRNA分子。子。子。

【技术实现步骤摘要】
自复制信使核糖核酸疫苗


[0001]本专利技术涉及自复制信使核糖核酸(mRNA)分子、自复制mRNA疫苗、用于转录成自复制mRNA分子的DNA分子、自复制mRNA分子在制造引发抗HER2免疫应答的自复制mRNA疫苗中的用途、及自复制mRNA分子的制造方法。

技术介绍

[0002]人类表皮生长因子受体2(HER2)是一种表达于正常细胞表面的功能受体，但在30％的乳腺癌患者的瘤组织会中出现异常高表达，是一类肿瘤相关抗原。在HER2高表达的患者中，肿瘤会表现出更强的肿瘤侵袭性及更高的复发频率。目前临床数据显示，机体内产生了针对HER2的细胞毒性免疫反应的患者群体，其生存期或复发概率等指标都有明显提升，提示通过表达HER2通过诱导机体产生针对HER2的特异性免疫反应来攻击和杀死高表达该抗原的肿瘤细胞，同时形成免疫记忆，使机体获得长期的免疫治疗或预防效果的可行性。
[0003]在基于免疫细胞、多肽、病毒载体和核酸分子在内的多种肿瘤疫苗形式中，mRNA疫苗表现出了独特的优势。mRNA疫苗进入细胞质中即可完成抗原的翻译表达，且不整合至基因组中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.信使核糖核酸(mRNA)分子，其包含：表达盒1，其含有RNA复制酶的编码序列、和表达盒2，其含有抗原的编码序列。2.根据权利要求1所述的mRNA分子，其中所述RNA复制酶是病毒的RNA复制酶。3.根据权利要求1所述的mRNA分子，其中所述表达盒1源于病毒的非结构性多蛋白的编码序列。4.根据权利要求2或3所述的mRNA分子，其中所述病毒是披膜病毒科(Togaviridae)的病毒。5.根据权利要求4所述的mRNA分子，其中所述披膜病毒科(Togaviridae)的病毒是甲病毒属(Alphavirus)的病毒。6.根据权利要求4所述的mRNA分子，其中所述甲病毒属(Alphavirus)的病毒是委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus，VEEV)。7.根据权利要求1所述的mRNA分子，其中所述抗原是HER2抗原或其变体。8.根据权利要求7所述的mRNA分子，其中所述HER2抗原变体具有经改造的细胞内结构域(ICD)，其中酪氨酸激酶(TK)活性位点被失活突变。9.根据权利要求7或8所述的mRNA分子，其中所述HER2抗原变体具有主要组织相容性复合体1(MHC1)转运结构域(MITD)，所述MITD置换了HER2抗原的跨膜结构域(TMD)。10.根据权利要求9所述的mRNA分子，其中所述HER2抗原变体具有MITD的信号肽(SP)，所述MITD的SP置换了HER2抗原的SP。11.根据权利要求8或10所述的mRNA分子，其中所述HER2抗原变体具有SEQ IDNO：2或4所示的序列。12.根据权利要求11所述的mRNA分子，其中所述HER2抗原变体的编码序列具有SEQ ID NO：1或3所示的序列。13.根据权利要求7所述的mRNA分子，其中所述HER2抗原或其变体的编码序列的5'侧具有Kozak序列。14.根据权利要求13所述的mRNA分子，其中所述Kozak序列是GCCACCAUGG。15.根据权利要求1所述的mRNA分子，其中所述表达盒2具有启动子，所述抗原的编码序列位于所述启动子下游。16.根据权利要求15所述的mRNA分子，其中所述启动子源于所述表达盒1所来源的物种。17.根据权利要求15或16所述的mRNA分子，其中所述启动子是26S启动子。18.根据权利要求1所述的mRNA分子，其中所述表达盒1的上游还具有RNA聚合酶的启动子位点和5'UTR；且所述表达盒2的下游还具有3'UTR和多聚A。19.根据权利要求18所述的mRNA分子，其中所述RNA聚合酶是T7 RNA聚合酶。20.根据权利要求18所述的mRNA分子，其中所述5'UTR和3'UTR源于所述表达盒1所来源的物种。21.根据权利要求19或20所述的mRNA分子，其对应的DNA序列具有SEQ ID NO：5或6所示的序列。
22.根据权利要求1所述的mRNA分子，其中的尿苷三磷酸是天然尿苷三磷酸(UTP)或N1
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甲基假尿苷三磷酸(N1
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Me
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pUTP)。23.信使核糖核酸(m...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫悦，刘晓虎，余志斌，徐江，丁隽，雍丹妮，刘根盛，贾为国，
申请(专利权)人：上海复诺健生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：