装载干扰软骨细胞NLRP3表达的核酸序列纳米颗粒及其制备方法和用途技术

本发明专利技术提供一种装载干扰软骨细胞NLRP3表达的核酸序列纳米颗粒及其制备方法和用途。本发明专利技术利用PLGA

【技术实现步骤摘要】
装载干扰软骨细胞NLRP3表达的核酸序列纳米颗粒及其制备方法和用途


[0001]本专利技术属医药制剂
，具体涉及一种装载干扰软骨细胞NLRP3表达的核酸序列纳米颗粒及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]骨关节炎是一种常见的慢性疾病。据统计，全球有2.42亿骨关节炎患者，且目前没有可以预防或者抑制骨关节炎进展的药物。关节软骨是无血管的组织，这导致全身的药物治疗缺乏良好的关节生物分布，因此关节内的局部给药成为了提高药物生物利用度和减少全身不良反应的首选给药途径。然而，滑膜中的毛细血管和淋巴管可以迅速将注射的药物从关节间隙中去除。研究表明，与直接注射游离药物相比，纳米药物具有更好的生物分布和溶解度，并且在关节腔的停留时间更长。因此纳米药物可能是成为骨关节炎高效、安全治疗药物的关键。
[0003]研究表明，基于载体的shRNA进入细胞核后，通过进一步的加工、运输到细胞质中，该过程可以高效的干扰靶基因的表达，为疾病的治疗提供了方向。NLR Family Pyrin Domain Containing 3(NLRP3)是细胞质中的一种重要的模式识别受体，能够识别病原体相关分子模式和损伤相关分子模式。NLRP3与凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis
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associated speck
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like protein containing a CARD,ASC)和半胱氨酸天冬氨酸酶
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1前体(pro
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Caspase
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1)共同组成NLRP3炎症小体蛋白复合物。一旦NLRP3炎症小体被激活，就会诱导pro
‑
Caspase
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1活化，进而促进促炎细胞因子，如：IL
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1β、IL
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18的成熟及分泌。此外，活化的Caspase
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1还可以切割gasdermin D(GSDMD)并释放其N末端结构域，该结构域被转移到细胞膜上，促进细胞膜形成孔，导致细胞内容物的释放，诱导细胞焦亡。目前研究表明，通过全身性敲除NLRP3，可以缓解骨关节炎的病理特征。因此软骨细胞的NLRP3的表达可能与骨关节炎的进程有关。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术中的问题，本专利技术提供一种装载干扰软骨细胞NLRP3表达的核酸序列纳米颗粒。研究发现，常规装载NLRP3
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shRNA的纳米颗粒针对骨关节炎细胞靶向性较差，无法有效实现软骨细胞特异性降低NLRP3的表达，进而不能很好的抑制骨关节炎的进展。本专利技术利用PLGA
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PEG
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PEI作为纳米载体，制备得到的纳米颗粒负载具有软骨细胞特异性的Col2a1启动子驱动的NLRP3
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shRNA，通过关节腔注射进入小鼠关节内，能够实现软骨细胞特异性降低NLRP3表达的功能，不但能够有效抑制了骨关节炎的进展，且具有良好的生物相容性。
[0005]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]第一方面，本专利技术提供一种装载干扰软骨细胞NLRP3表达的核酸序列纳米颗粒，其特征在于：所述纳米颗粒负载软骨细胞特异性启动子Col2a1驱动的NLRP3
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shRNA；所述
Col2a1的启动子序列为：
[0007]CCTCACAAAGCCGAGTCCAGCTGGAGCCACCTCCAGACTCTCTGGCCAGAGCCTCAGAGTGGCCAA
[0008]CAGTCCCTGGCCAGCGGTTGCTCTATCCAGGCTAAGGGCACCCACTCCCCTGGAGATTCCTGAACCTG
[0009]GGCCAGGAAGAGCCGAACTAGACAAGCGTCTCCAATCCATCCCGTTTTGTCCCCGGGGTTGTCTGCA
[0010]GTCCCGTTAGTCCCTTCCCTGGCCTGTTCGCCCCTTAGACCTCCACACAGGTCTCCCTCTGTGTAGGAA
[0011]TTCACCAGACCCTGTCCTAGCCACCCGCTCAGTTCCCCCTTCTACCTAGGCCTTTTCTAGCTAGTTGGA
[0012]TGGGGGATGGGTTAGGGAGGCTGTGGTCCCCGAGACTCCAGGTGGGAGCTCACGGGCAGGTACTCC
[0013]GCAAAGGAGCTGGAAGGCAGGTCTGGAAAACTGTCCCCCAGATTTAGGATTCTGGACAACGTCCATC
[0014]TGCTCATGCTTTGGTCCCCCACGCACCTCCCCGCCTCCTAAATTCCCCATCCCCACCTTTCTTGCTCCT
[0015]TTCTGTTGCTTCGTCCTCTCTGCCTTGGGTCTAAAACTCCAGGCTTATGCCTCTGCAAACAACCCCCTC
[0016]CCTTCTAACCCCAGCAGAACTCCGAGGAAAGGGGCCCGATGCTCCCCCCCTTCCCGCCTGTGGTTAG
[0017]AGGGGGCAGTGTGGCAGTCCCAAGTGGGGGCGACCGGAGGCTGTCTCGGTGCCCCGCCCGATCAGG
[0018]CCACTGGGCACATTGGGGGCGGGAAGCTGGGCTCACGAAAGGGGCGACTGGCCTTGGCAGGTGTGG
[0019]GCTCTGGTCCGGCCTGGGCGGGCTCCGGGGGCGGGGTCTCAGGTTACAGCCCCGCGGGGGGCTAGG
[0020]GGGCGGCCCGCGGTTTGGGCCGGTTTGCCAGCCTTTGGAGCGACCGGGAGCATATAACTGGAGCCTC
[0021]TGCCGGGGGAAGACGCAGAGCGCCGCTGGGCTGCCGGGTCTCCTGCCTCCTCCTGCTCCTAGGGCCTCCTGCATGAGGGAGCGGTAGAGAC。
[0022]进一步，所述纳米颗粒利用PLGA
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PEG
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PEI作为纳米载体。
[0023]更进一步，所述NLRP3
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shRNA为小鼠NLRP3核酸序列或人源NLRP3核酸序列。所述小鼠NLRP3核酸序列：
[0024]①
CCAGGAGAGAACCTCTTATTT；或
[0025]②
CCGGCCTTACTTCAATCTGTT；或
[0026]③
CCGGCCTTACTTCAATCTGTT；
[0027]所述人源NLRP3核酸序列：
[0028]①
GAGACTCAGGAGTCGCAATTT。
[0029]所述PLGA的分子量为40...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种装载干扰软骨细胞NLRP3表达的核酸序列纳米颗粒，其特征在于：所述纳米颗粒负载软骨细胞特异性启动子Col2a1驱动的NLRP3
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shRNA；所述Col2a1的启动子序列为：CCTCACAAAGCCGAGTCCAGCTGGAGCCACCTCCAGACTCTCTGGCCAGAGCCTCAGAGTGGCCAACAGTCCCTGGCCAGCGGTTGCTCTATCCAGGCTAAGGGCACCCACTCCCCTGGAGATTCCTGAACCTGGGCCAGGAAGAGCCGAACTAGACAAGCGTCTCCAATCCATCCCGTTTTGTCCCCGGGGTTGTCTGCAGTCCCGTTAGTCCCTTCCCTGGCCTGTTCGCCCCTTAGACCTCCACACAGGTCTCCCTCTGTGTAGGAATTCACCAGACCCTGTCCTAGCCACCCGCTCAGTTCCCCCTTCTACCTAGGCCTTTTCTAGCTAGTTGGATGGGGGATGGGTTAGGGAGGCTGTGGTCCCCGAGACTCCAGGTGGGAGCTCACGGGCAGGTACTCCGCAAAGGAGCTGGAAGGCAGGTCTGGAAAACTGTCCCCCAGATTTAGGATTCTGGACAACGTCCATCTGCTCATGCTTTGGTCCCCCACGCACCTCCCCGCCTCCTAAATTCCCCATCCCCACCTTTCTTGCTCCTTTCTGTTGCTTCGTCCTCTCTGCCTTGGGTCTAAAACTCCAGGCTTATGCCTCTGCAAACAACCCCCTCCCTTCTAACCCCAGCAGAACTCCGAGGAAAGGGGCCCGATGCTCCCCCCCTTCCCGCCTGTGGTTAGAGGGGGCAGTGTGGCAGTCCCAAGTGGGGGCGACCGGAGGCTGTCTCGGTGCCCCGCCCGATCAGGCCACTGGGCACATTGGGGGCGGGAAGCTGGGCTCACGAAAGGGGCGACTGGCCTTGGCAGGTGTGGGCTCTGGTCCGGCCTGGGCGGGCTCCGGGGGCGGGGTCTCAGGTTACAGCCCCGCGGGGGGCTAGGGGGCGGCCCGCGGTTTGGGCCGGTTTGCCAGCCTTTGGAGCGACCGGGAGCATATAACTGGAGCCTCTGCCGGGGGAAGACGCAGAGCGCCGCTGGGCTGCCGGGTCTCCTGCCTCCTCCTGCTCCTAGGGCCTCCTGCATGAGGGAGCGGTAGAGAC。2.如权利要求1所述的纳米颗粒，其特征在于：所述纳米颗粒利用PLGA
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PEG
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PEI作为纳米载体。3.如权利要求1或2所述的纳米颗粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：厉轲，杨娴，万敬员，杜慧，于超，魏乐易，钟敏萱，蒋泞蔓，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：