一种类外泌体仿生制剂及其制备方法与应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，特别是涉及一种类外泌体仿生制剂的制备方法及其应用。所述类外泌体仿生制剂包括多个类外泌体前体LPO

【技术实现步骤摘要】
一种类外泌体仿生制剂及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，特别是涉及一种类外泌体仿生制剂的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]外泌体是所有活细胞都会分泌的一种天然纳米级别的小囊泡，是细胞间信息交流的重要媒介，囊泡内富含核酸，蛋白质和脂质。脐带间充质干细胞外泌体因其含有丰富的营养物质及靶向性，被广泛运用在医药，化妆品及医美等领域。
[0003]外泌体获取难度大，资源稀缺，各种提取方法又或多或少对脐带间充质干细胞外泌体纯度、活性等产生影响。比如一、超速离心法，此法成本高，难操作，时间长，高速离心会损伤外泌体从而影响纯度；二、超滤离心，这种操作简单，成本较低，但纯度一般，会损失部分外泌体的生物活性，且存在纯度不足的问题；三、免疫亲和捕获法，实际成本高，产率低，适合游离细胞样本，癌症异质性会影响免疫识别，抗原决定簇可能被封闭；四、微流体法，缺乏大规模临床样本测试，缺乏方法学的验证，以及适合小样本量的提取。以上四种方法获得的外泌体均不易长期常温存储，并且提取获得的外泌体，内含的营养物质成分复杂，难以定性定量分析。因此急需一种类外泌体仿生制剂，可以替代现有从胎盘等生物体内提取出的获得的外泌体。进而解决医药，化妆品及医美等领域的应用需求。但目前还没有相关技术可以实现。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种类外泌体仿生制剂的制备方法及其应用，解决了现有的外泌体获取效率低，难度大，无法批量化生产，同时提取的外泌体成分易遭破坏的技术问题。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术实施例，一方面公开了，一种类外泌体仿生制剂，所述类外泌体仿生制剂包括多个类外泌体前体LPO
‑
EXO；
[0006]所述类外泌体前体LPO
‑
EXO包括：
[0007]仿生磷脂双分子壳体，所述仿生磷脂双分子壳体包括仿生磷脂双分子外壳体和仿生磷脂双分子内壳体，所述仿生磷脂双分子内壳体在内侧，仿生磷脂双分子外壳体在外侧；
[0008]囊内物，所述囊内物包括水溶性活性物质和油溶性活性物质，所述水溶性活性物质设置在仿生磷脂双分子外壳体和仿生磷脂双分子内壳体之间的第一空间内，以及仿生磷脂双分子内壳体内部的第二空间内；所述油溶性活性物质被包裹在仿生磷脂双分子外壳体内部的第三空间内和仿生磷脂双分子内壳体内部的第四空间内。
[0009]进一步的，所述油溶性活性物质以重量份计包括：氢化卵磷脂1.8
‑
2.5份、生育酚乙酸酯0.2
‑
0.3份、神经酰胺0.3
‑
0.5份和角鲨烷2
‑
3份。
[0010]进一步的，所述水溶性活性物质以重量份计包括，所述水溶性活性物质以重量份计包括，纯水78.8
‑
89份、甘油2
‑
5份、羟基苯乙酮0.4
‑
0.6份、色氨酸0.5
‑
1.5份、吡咯烷酮羧酸2
‑
3.5份、水解透明质酸钠0.3
‑
1份、水解肌动蛋白0.2
‑
0.5份、水解胶原蛋白0.2
‑
0.5份、
β
‑
烟酰胺单核苷酸0.2
‑
0.5份、聚脱氧核糖核苷酸0.5
‑
1.2份和1,2己二醇0.4
‑
0.6份。
[0011]进一步的，所述类外泌体仿生制剂表面为向外突出的软毛刺结构。
[0012]进一步的，所述类外泌体仿生制剂还包括金粉。
[0013]本专利技术实施例还提供了一种制备类外泌体仿生制剂的方法，包括以下步骤，
[0014](1)将纯水78.8
‑
89份、甘油2
‑
5份、羟基苯乙酮0.4
‑
0.6份混合形成A相，将A相加入70℃水相锅加热搅拌，转速30r/min，溶解充分，保温15min后降温至35℃备用；
[0015](2)将B相物质色氨酸0.5
‑
1.5份、吡咯烷酮羧酸2
‑
3.5份、水解透明质酸钠0.3
‑
1份、水解肌动蛋白0.2
‑
0.5份、水解胶原蛋白0.2
‑
0.5份、β
‑
烟酰胺单核苷酸0.2
‑
0.5份、聚脱氧核糖核苷酸0.5
‑
1.2份和1,2己二醇0.4
‑
0.6份，逐一加入A相中，搅拌转速30r/min，搅拌时间30min，搅拌均匀形成水相混合物备用；
[0016](3)将氢化卵磷脂1.8
‑
2.5份、生育酚乙酸酯0.2
‑
0.3份、神经酰胺0.3
‑
0.5份、角鲨烷2
‑
3份混合后形成C相，将C相加入上述混合物中，搅拌转速40r/min，均质40HZ，均值时间5min，初步形成乳化体系备用；
[0017](4)将得到的流体再利用微射流均质机设置压力1000
‑
1200bar，温度30～35℃下进行高压均质处理，得到类外泌体前体LPO
‑
EXO；
[0018](5)将琼脂糖0.5
‑
0.8份和金粉0.5
‑
1份加入乳化锅中，45r/min边搅拌边加热至75～80℃，并保温5分钟之后，降温至40
‑
45℃后保温，加入类外泌体前体LPO
‑
EXO100份，10r/min搅拌至均匀得到水相混合物；
[0019](6)在油相锅内加入椰油醇
‑
辛酸酯/癸酸酯TO 100份、聚酰胺
‑
81.485
‑
2.475份、季戊四醇四(双
‑
叔丁基羟基氢化肉桂酸)酯0.015
‑
0.025份混合加热溶解形成油相混合物；
[0020](7)将油相混合物转入冷却降温设备，控制温度在5
‑
10℃左右，油相搅拌速度保持在20
‑
30r/min；
[0021](8)将水相混合物通过0.5
‑
3mm疏水性滤网加入油相混合物中，重量比，水相混合物：油相混合物＝1:0.5～1:1，保持油相搅拌速率不变，温度控制在5
‑
10℃，颗粒硬化后继续搅拌1小时封存，得到类外泌体仿生制剂MO
‑
LPO
‑
EXO。
[0022]进一步的，所述制备类外泌体仿生制剂的方法，包括以下步骤，
[0023](1)将纯水83.9份、甘油3份、羟基苯乙酮0.5份混合形成A相，将A相加入70℃水相锅加热搅拌，转速30r/min，溶解充分，保温15min后降温至35℃备用；
[0024](2)将B相物质色氨酸1份、吡咯烷酮羧酸3份、水解透明质酸钠0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种类外泌体仿生制剂，其特征在于，所述类外泌体仿生制剂包括多个类外泌体前体LPO
‑
EXO；所述类外泌体前体LPO
‑
EXO包括：仿生磷脂双分子壳体，所述仿生磷脂双分子壳体包括仿生磷脂双分子外壳体和仿生磷脂双分子内壳体，所述仿生磷脂双分子内壳体在内侧，仿生磷脂双分子外壳体在外侧；囊内物，所述囊内物包括水溶性活性物质和油溶性活性物质，所述水溶性活性物质，设置在仿生磷脂双分子外壳体和仿生磷脂双分子内壳体之间的第一空间内，以及仿生磷脂双分子内壳体内部的第二空间内；所述油溶性活性物质被包裹在仿生磷脂双分子外壳体内部的第三空间内和仿生磷脂双分子内壳体内部的第四空间内。2.根据权利要求1所述的类外泌体仿生制剂，其特征在于，所述油溶性活性物质以重量份计包括：氢化卵磷脂1.8
‑
2.5份、生育酚乙酸酯0.2
‑
0.3份、神经酰胺0.3
‑
0.5份和角鲨烷2
‑
3份。3.根据权利要求1所述的类外泌体仿生制剂，其特征在于，所述水溶性活性物质以重量份计包括，纯水78.8
‑
89份、甘油2
‑
5份、羟基苯乙酮0.4
‑
0.6份、色氨酸0.5
‑
1.5份、吡咯烷酮羧酸2
‑
3.5份、水解透明质酸钠0.3
‑
1份、水解肌动蛋白0.2
‑
0.5份、水解胶原蛋白0.2
‑
0.5份、β
‑
烟酰胺单核苷酸0.2
‑
0.5份、聚脱氧核糖核苷酸0.5
‑
1.2份和1,2己二醇0.4
‑
0.6份。4.根据权利要求1至3中任一所述的类外泌体仿生制剂，其特征在于，所述类外泌体仿生制剂表面为向外突出的软毛刺结构。5.根据权利要求4所述的类外泌体仿生制剂，其特征在于，所述类外泌体仿生制剂还包括金粉。6.一种制备权利要求1
‑
5所述类外泌体仿生制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤，(1)将纯水78.8
‑
89份、甘油2
‑
5份、羟基苯乙酮0.4
‑
0.6份混合形成A相，将A相加入70℃水相锅加热搅拌，转速30r/min，溶解充分，保温15min后降温至35℃备用；(2)将B相物质色氨酸0.5
‑
1.5份、吡咯烷酮羧酸2
‑
3.5份、水解透明质酸钠0.3
‑
1份、水解肌动蛋白0.2
‑
0.5份、水解胶原蛋白0.2
‑
0.5份、β
‑
烟酰胺单核苷酸0.2
‑
0.5份、聚脱氧核糖核苷酸0.5
‑
1.2份和1,2己二醇0.4
‑
0.6份，逐一加入A相中，搅拌转速30r/min，搅拌时间30min，搅拌均匀形成水相混合物备用；(3)将氢化卵磷脂1.8
‑
2.5份、生育酚乙酸酯0.2
‑
0.3份、神经酰胺0.3
‑
0.5份、角鲨烷2
‑
3份混合后形成C相，将C相加入上述混合物中，搅拌转速40r/min，均质40HZ，均值时间5min，初步形成乳化体系备用；(4)将得到的流体再利用微射流均质机设置压力1000
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1200bar，温度30～35℃下进行高压均质处理，得到类外泌体前体LPO
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EXO；(5)将琼脂糖0....

【专利技术属性】
技术研发人员：田丽君，
申请(专利权)人：西安九州再生医学集团有限公司，
类型：发明
国别省市：