基于扩增子的文库构建方法技术

本公开内容涉及一种基于扩增子的文库构建方法，其特征在于包括以下步骤：1)提供DNA例如抽提的DNA；2)对所述DNA进行超声打断以形成打断后的DNA；和3)对所述打断后的DNA进行扩增以形成扩增子文库。以形成扩增子文库。以形成扩增子文库。

【技术实现步骤摘要】
基于扩增子的文库构建方法


[0001]本专利技术属于高通量基因测序领域，具体而言，本专利技术涉及一种基于扩增子的文库构建方法。

技术介绍

[0002]随着近年来资讯通量的激增，高通量测序技术在生命科学及医学领域方面的研究和应用越来越广泛，特别是在疾病诊断及预防中发挥重要作用，其主要表现在产前筛查、肿瘤诊断、重大疾病预防、健康相关宏基因组分析等方面。虽然人类全基因组测序从测序时间和成本上已有了巨大的飞跃，但庞大的数据分析和遗传信息提取也很费时费力，相比较而言，全外显子测序，基因组合(panel)的测序将直击可能引起疾病的大部分基因序列，而扩增子测序特异性强、目标明确、数据分析简单快速和成本低等优点将更有利于在临床疾病检测上的广泛应用。
[0003]扩增子测序技术是一种靶向捕获测序技术，主要利用多重PCR技术同时对多个目标区域序列进行特异性扩增和富集，得到扩增子文库，然后采用二代测序技术对扩增子文库进行测序，从而获取目标区域的序列信息。扩增子测序技术组合设计灵活，经济快速，重复性好，特异性强等优势，已成为首选技术，广泛应用于生物基础研究和临本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于扩增子的文库构建方法，其特征在于包括以下步骤：1)提供DNA例如抽提的DNA；2)对所述DNA进行超声打断以形成打断后的DNA；和3)对所述打断后的DNA进行扩增以形成扩增子文库。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述打断后的DNA长度范围为150 bp
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5 kb，优选200 bp
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2000 bp例如500 bp
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2000 bp，更优选400 bp
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1500 bp，最优选500 bp
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1000 bp；和/或所述打断后的DNA的峰值长度在300 bp
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2000 bp之间例如500 bp
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2000 bp，优选在500 bp
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1000 bp之间。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述扩增包括i)以所述打断后的DNA为模板，通过第一引物进行第一轮PCR扩增，ii)任选地进行纯化；iii)以第一轮PCR扩增的产物为模板，通过第二引物进行第二轮PCR扩增；和iv)任选地进行纯化，以获得目标扩增子文库；优选地，所述第一轮和第二轮PCR扩增使用rhAmpSeq系统进行。4. 如权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述超声打断使用超声破碎仪例如Covaris的超声破碎仪，优选Covaris M系列的超声破碎仪，更优选Covaris M220超声破碎仪进行。5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述DNA来自生物样品，优选所述样品为体液样品或组织样品，和更优选所述样品选自活组织检查样品、肿瘤组织样品、细胞培养物、经固化处理的样品（如石蜡包埋样品例如FFPE样品）、全血、血浆、血清、唾液、脑髓液、汗液、痰、肺泡灌洗液、尿液、粪便、分泌液、乳汁和腹膜液。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：李夏静，孙春丽，谢正华，
申请(专利权)人：上海思路迪生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：