一种检测结合态4-甲基咪唑含量的方法技术

本发明专利技术属于食品检测技术领域，具体涉及一种检测结合态4

【技术实现步骤摘要】
一种检测结合态4
‑
甲基咪唑含量的方法


[0001]本专利技术属于食品检测
，具体涉及一种检测结合态4
‑
甲基咪唑含量的方法。

技术介绍

[0002]经研究发现，热加工食品常常发生美拉德反应等一系列非酶褐变，在形成特有的风味和颜色时，带来了一些有毒有害物质，如4
‑
甲基咪唑(4
‑
methylimidazole,4
‑
MI)，它是一种含氮杂环有机化合物。4
‑
MI的前体物质是美拉德反应中产生的二羰基化合物，通过与氨发生反应生成，而它的生成途径大致可以分为两条，其一是二羰基化合物与等效氨反应形成中间体，而醛类与等效氨反应形成另一种中间体，生成的两个中间体一起反应生成4
‑
MI。第二种方式是二羰基化合物与双氨反应形成中间体，然后与醛类反应形成4
‑
MI。4
‑
MI既是焦糖色素中主要的潜在危害物，同时也存在于未添加焦糖色素的食品中。MI的动物毒理学实验证明其具有显著致畸、致癌等毒副作用，被列为“人类可能的致癌物”(Group 2A)。
[0003]烘焙食品因其具有较长的保质期、多样的味道和质地等特点，在全球范围内的消费，销售额和产品种类都在增加。目前，在世界绝大多数国家中，面包、饼干、蛋糕等主流烘焙食品已经成为人们日常生活中的主食，而4
‑
甲基咪唑普遍存在于日常市售焙烤制品中，4
‑
MI的含量最高可达几百毫克。而目前对于4
‑
MI的研究仅仅限于游离态MI，这一部分MI主要是通过溶解于乙腈或水进行提取和检测。因此，有效检测烘焙食品中结合态4
‑
MI的含量具有重要意义，有利于人们进一步了解危害物对人体健康的影响。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在解决上述问题，提供了一种检测结合态4
‑
甲基咪唑含量的方法，检测精度高，重现性好，填补了现有检测结合态4
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甲基咪唑的技术空白。
[0005]按照本专利技术的技术方案，所述检测结合态4
‑
甲基咪唑含量的方法，包括以下步骤，
[0006]S1：对样品进行脱脂处理后，去除游离态4
‑
甲基咪唑，得到待检测样品；
[0007]S2：向所述待检测样品中加入盐酸，在惰性气氛下加热水解，得到水解待测样品；
[0008]S3：调整所述水解待测样品的pH至中性，定容后离心，取上清液进行固相萃取，得到待检测液；
[0009]S4：采用高效液相色谱质谱联用仪对所述待检测液进行检测。
[0010]进一步的，所述样品为烘焙食品样品。
[0011]进一步的，所述步骤S1中，向样品中加入正己烷进行脱脂，重复三次，完成脱脂处理，脱脂处理后的样品自然挥干，得到脱脂样品。
[0012]进一步的，所述步骤S1中，去除游离态4
‑
甲基咪唑的具体操作如下：向脱脂后的样品中加入乙腈，超声提取后离心去除上清液，重复上述操作2
‑
3次，将游离形式的甲基咪唑达到基本全部去除，以免影响结合态甲基咪唑含量。
[0013]进一步的，离心所得上清液可以用于固相萃取后检测游离态4
‑
甲基咪唑。
[0014]进一步的，每1g样品加入8
‑
15mL乙腈。
[0015]进一步的，所述步骤S1中，去除游离态4
‑
甲基咪唑的同时还包括去除蛋白质的操作。
[0016]进一步的，通过加入三氯乙酸溶液去除脱脂样品中的蛋白质，所述三氯乙酸溶液的浓度为3
‑
10％，每1g样品加入3
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8mL三氯乙酸溶液。
[0017]进一步的，所述步骤S2前还包括，将待检测样品冷冻干燥的操作。
[0018]进一步的，所述步骤S2中，盐酸的浓度为5
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7mol/L，浓度过高反应危险，浓度过低无法达到水解效果，影响结合态4
‑
MI测定含量。
[0019]进一步的，每1g样品加入8
‑
15mL盐酸。
[0020]进一步的，所述步骤S2中，加热水解的温度为110～120℃，时间为20
‑
40h。
[0021]进一步的，所述水解待测样品中还含有4
‑
MI
‑
d3内标溶液。具体的，每1g样品，可以加入150mL浓度为10μg/mL的4
‑
MI
‑
d3内标溶液。
[0022]进一步的，所述步骤S3中，加入氢氧化钠调整所述水解待测样品的pH至中性。
[0023]进一步的，所述步骤S3中，固相萃取为MCX固相萃取，固相萃取的具体操作如下：固相萃取活化后，将上清液上样，随后分别用超纯水和甲醇淋洗萃取柱，最后采用氨水甲醇混合液对柱填料中的4
‑
甲基咪唑进行洗脱。
[0024]进一步的，所述用氨水甲醇混合液为95％的甲醇
‑
氨溶液(甲醇体积占比为95％)，每1mL待检测液，氨水甲醇混合液的使用量为1.5
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2.5mL，优选为1.5mL。
[0025]进一步的，采用水和甲醇进行固相萃取活化。
[0026]进一步的，所述步骤S4中，液相色谱条件如下：
[0027]色谱柱是Waters X
‑
Bridge C18(2.1mm
×
100mm，3.5μm)；
[0028]柱温为35℃；
[0029]流动相中有机相包括乙腈，水相包括甲酸水；
[0030]流速为0.3mL/min；
[0031]进样量为5μL。
[0032]进一步的，所述甲酸水为0.1％甲酸水。
[0033]进一步的，液相色谱的洗脱梯度为：0.0
‑
0.7min，95％水相；0.7
‑
2.0min，95
‑
20％水相；2.0
‑
2.5min，20
‑
5％水相；2.5
‑
3.5min，5％水相；3.5
‑
4.0min，5
‑
95％水相；4.0
‑
6.0min，95％水相。
[0034]进一步的，所述步骤S4中，质谱条件如下：
[0035]检测方式：多反应检测(MRM)；
[0036]毛细管电压：3.55kV；
[0037]离子源温度：110℃；
[0038]脱溶剂气温度：350℃；
[0039]锥孔气：氮气，纯度99.9％；流量：50L/h；
[0040]脱溶剂气：氮气，纯度99.9％；流量：500L/h；
[0041]碰撞气：氩气，纯度99.9％；流量：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测结合态4
‑
甲基咪唑含量的方法，其特征在于，包括以下步骤，S1：对样品进行脱脂处理后，去除游离态4
‑
甲基咪唑，得到待检测样品；S2：向所述待检测样品中加入盐酸，在惰性气氛下加热水解，得到水解待测样品；S3：调整所述水解待测样品的pH至中性，定容后离心，取上清液进行固相萃取，得到待检测液；S4：采用高效液相色谱质谱联用仪对所述待检测液进行检测。2.如权利要求1所述的检测结合态4
‑
甲基咪唑含量的方法，其特征在于，所述步骤S1中，去除游离态4
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甲基咪唑的具体操作如下：向脱脂后的样品中加入乙腈，超声提取后离心去除上清液，重复上述操作2
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3次。3.如权利要求2所述的检测结合态4
‑
甲基咪唑含量的方法，其特征在于，每1g样品加入8
‑
15mL乙腈。4.如权利要求1所述的检测结合态4
‑
甲基咪唑含量的方法，其特征在于，所述步骤S1中，去除游离态4
‑
甲基咪唑的同时还包括去除蛋白质的操作。5.如权利要求1所述的检测结合态4
‑
甲基咪唑含量的方法，其特征在于，所述步骤S2中，盐酸的浓度为5
‑
7mol/L，每1g样品加入8
‑
15mL盐酸。6.如权利要求1所述的检测结合态4
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘红阳，张泽宁，曾茂茂，陈洁，何志勇，陈秋铭，王召君，秦昉，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：